莫錦政 謝敬文 馬偉文 藍(lán)文莉 黎淑貞

（廣東省廣州市番禺區(qū)中心血站 廣州511400）

●診療經(jīng)驗(yàn)●

核酸檢測(cè)技術(shù)在獻(xiàn)血者HBsAg篩查中的意義

莫錦政 謝敬文 馬偉文 藍(lán)文莉 黎淑貞

（廣東省廣州市番禺區(qū)中心血站 廣州511400）

目的：回顧性分析獻(xiàn)血者HBsAg項(xiàng)目的篩查結(jié)果，探討核酸檢測(cè)技術(shù)（NAT）在獻(xiàn)血者血液篩查中的應(yīng)用價(jià)值。方法：采用兩個(gè)廠家的酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)試劑盒對(duì)獻(xiàn)血者開展HBsAg篩查；ELISA檢測(cè)陰性的獻(xiàn)血者標(biāo)本，采用羅氏診斷cobass201系統(tǒng)進(jìn)行HBV-DNA檢測(cè)。結(jié)果：在14 642份經(jīng)過兩遍ELISA檢測(cè)HBsAg陰性標(biāo)本中，檢出13份HBV-DNA陽性，陽性檢出率約為0.089%。結(jié)論：在經(jīng)過兩次ELISA檢測(cè)HBsAg陰性的獻(xiàn)血者中，仍然存在一定比例的HBV-DNA陽性，給臨床輸血安全帶來較大的風(fēng)險(xiǎn)；血站應(yīng)用ELISA聯(lián)合NAT的血液篩查策略，能有效降低臨床輸血傳播HBV的風(fēng)險(xiǎn)。

HBV-DNA核酸檢測(cè)（NAT）；血液篩查；隱匿性乙型肝炎病毒感染（OBI）；輸血風(fēng)險(xiǎn)

乙型肝炎病毒（HBV）感染是一個(gè)世界性公眾的健康問題，我國是個(gè)HBV感染的高流行區(qū)域。HBV感染是臨床輸血安全重要預(yù)防焦點(diǎn)之一。雖然血站已經(jīng)對(duì)HBsAg開展兩遍檢測(cè)以及近年來ELISA試劑盒檢測(cè)技術(shù)不斷改進(jìn)，輸血傳染HBV的風(fēng)險(xiǎn)已經(jīng)降到較低的水平，但是病毒窗口期、病毒變異、免疫沉默、隱匿性乙型肝炎病毒感染（OBI）等因素造成的漏檢仍無法避免。核酸檢測(cè)技術(shù)（NAT）的應(yīng)用可以彌補(bǔ)酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）的不足，更進(jìn)一步地提高血液安全。近3年來，我國發(fā)達(dá)地區(qū)采供血機(jī)構(gòu)血液篩查也相繼引入NAT技術(shù)。本站從2012年12月開始引進(jìn)NAT血液篩查技術(shù)，現(xiàn)將應(yīng)用情況報(bào)道如下：

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源及處理 本站2012年12月～2013 年6月無償獻(xiàn)血標(biāo)本17 641份。獻(xiàn)血者樣本留取3份，1份用EDTA-2K抗凝真空管（廣州陽普公司生產(chǎn)）留取5 ml用于血液ELISA檢測(cè)，2份用無菌EDTA-2K抗凝帶分離膠真空管（VACUETTE生產(chǎn)）各留取5 ml，其中紫色蓋的用于NAT檢測(cè)，白色蓋的用于留樣備用和確證實(shí)驗(yàn)。所有標(biāo)本4 h內(nèi)離心并分離血漿，用于ELISA和NAT檢測(cè)的標(biāo)本置于2～8℃冰箱保存，48 h內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)，用于留樣備用和確證實(shí)驗(yàn)的樣本置于-20℃以下冰箱保存。

1.2 試劑及檢測(cè) 無償獻(xiàn)血標(biāo)本先進(jìn)行兩遍酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)HBsAg篩查。酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)試劑盒HBsAg采用廈門新創(chuàng)、DiaSorin（Murex version3. 0）。NAT檢測(cè)試劑：cobas TaqScreen MPX Test，cobas TaqScreen MPX Control Kit。挑出HBsAg陰性的標(biāo)本共14 642份進(jìn)行核酸聯(lián)合檢測(cè)HIV-RNA、HCV-RNA和HBV-DNA，6個(gè)標(biāo)本混樣到一個(gè)POOL，其中每個(gè)樣本吸樣167 μl，對(duì)混樣陽性POOL進(jìn)行單個(gè)樣本（每個(gè)樣本吸樣1 ml）拆分實(shí)驗(yàn)，拆分陽性樣本送羅氏公司進(jìn)行HIV-RNA、HCV-RNA和HBV-DNA分項(xiàng)確證實(shí)驗(yàn)。

1.3 儀器設(shè)備 KH120R低溫離心機(jī)（KHB）、瑞士哈美頓STAR全自動(dòng)加樣儀、深圳愛康A(chǔ)E150全自動(dòng)一體機(jī)、德國西門子BEHRING全自動(dòng)酶免后處理機(jī)、日本Olympus AU400全自動(dòng)生化儀、美國Roche Cobas s 201核酸檢測(cè)系 統(tǒng)（Hamilton MICROLAB STAR全自動(dòng)混樣儀、COBAS Amplipre核酸提取儀及COBAS Taqman核酸擴(kuò)增檢測(cè)儀）。

2 結(jié)果

在17 641份無償獻(xiàn)血標(biāo)本中選取14 642份經(jīng)兩遍ELISA檢測(cè)HBsAg陰性的標(biāo)本進(jìn)行NAT實(shí)驗(yàn)，檢出13份HBV-DNA陽性，陽性率約為0.089%。該13份HBV-DNA陽性樣本的乙肝兩對(duì)半結(jié)果分析見表1。

3 討論

目前，我國大部分采供血機(jī)構(gòu)均采用兩種不同試劑進(jìn)行ELISA平行檢測(cè)，雖然近年來ELISA試劑盒的靈敏度、特異性不斷改進(jìn)，但是仍無法避免病毒感染窗口期、病毒變異、免疫沉默等因素造成的漏檢。有研究表明NAT混樣檢測(cè)，可將HBV、HCV和HIV感染的平均窗口期分別由56 d、70 d、22 d縮短為41 d、12 d和11 d[1～2]，而且不受病毒變異、個(gè)體免疫因素影響，使輸血感染相關(guān)病毒的風(fēng)險(xiǎn)降到最低，極大程度地保障血液安全。本站對(duì)14 642份兩遍酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)HBsAg陰性的標(biāo)本中，應(yīng)用NAT

檢測(cè)技術(shù)篩查出13份HBV-DNA陽性，陽性率0.089%。從該13份樣本的乙肝兩對(duì)半結(jié)果分析可見，該批樣本中大部分可能是隱匿性乙肝炎病毒感染。隱匿性乙型肝炎病毒感染（occult hepatitis B virus infection，OBI）是指除血清轉(zhuǎn)換前的窗口期外，機(jī)體存在乙肝病毒（hepatitis B virus，HBV）DNA，但無法檢測(cè)到乙肝病毒表面抗原（HbsAg）的HBV感染，可伴有或不伴有乙肝病毒核心抗體（抗-HBc）或乙肝病毒表面抗體（抗-HBs）[3]。它是一種特殊形式的乙肝病毒感染，可通過輸血、器官移植等傳播乙肝病毒，并與慢性肝病、肝細(xì)胞肝癌及慢性丙肝發(fā)生、發(fā)展及治療有關(guān)，具有重要的公共衛(wèi)生學(xué)意義。多數(shù)OBI感染者的血循環(huán)中HBV-DNA的拷貝數(shù)均較低，一般小于105 copies/ml，OBI可有多種臨床形式，可以是肝功能正常、HBsAg（－）的“健康人”[4]，可以是急性乙肝感染恢復(fù)后[5]，也可能在慢性HBV感染者自發(fā)或使用抗病毒藥物后出現(xiàn)[6]，所以酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)技術(shù)無法檢測(cè)到OBI感染者乙肝病毒表面抗原陽性，因此說明隱匿性乙型肝炎病毒感染的HBV是目前本地區(qū)血液安全的主要隱患之一，本地區(qū)有必要對(duì)獻(xiàn)血者常規(guī)實(shí)行酶免聯(lián)合核酸檢測(cè)的篩查策略，以降低臨床輸血傳播HBV的風(fēng)險(xiǎn)。

[1]Busch MP.HIV,HBV,and HCV:new developments related to transfusion safety[J].Vox Sang,2000,78(s2):253-256

[2]王迅,鄭嵐,張晰,等.核酸擴(kuò)增技術(shù)（NAT）在上海血液篩檢中的初步應(yīng)用[J].中國輸血雜志,2003,16(3):157-160

[3]Allian JP.Occult hepatitis B virus infection[J].Transfus Clin Biol, 2004,11(1):18-25

[4]Siva CM,Costi C,Michelon C,et al.Low rate of occult hepatitis B virus infection among antiHBc positive blood donors living in a low prevalence region in Brazil[J].J Infect,2005,51(1):24-29

[5]Yuki N,Nagaoka T,Yamashiro M,et al.Long term histologic and virologic outcomes of acute self limited hepatitis B[J].Hepatology, 2003,37(5):1172-1179

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10.13638/j.issn.1671-4040.2015.06.038