尤利霞

(山西省醫(yī)藥與生命科學(xué)研究院藥用植物室，山西太原030006)

知母是我國傳統(tǒng)的常用藥材，來源于百合科植物知母(Anemarrhena asphodeloides Bge.)的干燥根莖，具有清熱瀉火、滋陰潤燥之功效［1］?，F(xiàn)代藥理研究表明，知母具有解熱、鎮(zhèn)靜、降壓、降血糖、利尿、祛痰等作用，常用于治療肺熱燥咳、腎陰虛引起的盜汗及消渴癥等［2］。知母主產(chǎn)于山西、河北、內(nèi)蒙古，黑龍江、吉林、遼寧、陜西、甘肅、山東等省區(qū)也有分布［3］。種子種苗是中藥材生產(chǎn)的源頭，種子質(zhì)量的真?zhèn)蝺?yōu)劣直接關(guān)系著藥材的產(chǎn)量與質(zhì)量。因此，開展中藥材種子質(zhì)量檢驗研究，是我國中藥材規(guī)范化生產(chǎn)急需解決的重要問題。該研究對7種不同來源的知母種子進行質(zhì)量檢測，比較知母種子的質(zhì)量優(yōu)劣，以期為知母生產(chǎn)引種繁殖和優(yōu)種選育提供科學(xué)的參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 供試材料為2013年秋分別從安徽亳州、河北易縣、山西萬榮、絳縣、襄汾、陵川購買的知母栽培新種子，以及2013年8月底從內(nèi)蒙古呼倫貝爾市大青山采收的野生知母種子。

1.2 儀器和試劑 電熱恒溫培養(yǎng)箱、電子天平、水浴鍋、高壓滅菌鍋、培養(yǎng)皿、定性濾紙、燒杯、鑷子、刀片;紅四氮唑、乙醇、氯化汞。

1.3 試驗方法

1.3.1 種子凈度測定。按農(nóng)作物種子檢驗規(guī)程(GB/T3543.3)［4］中凈度分析執(zhí)行。采用四分法分別將7種不同來源的知母種子各隨機取樣5份，每份試樣稱取20 g，然后用挑選法揀去雜質(zhì)，再依次稱取知母凈種子的重量，根據(jù)公式分別計算各樣品的種子凈度:種子凈度=(供試樣品總量－雜質(zhì)總量)/供試樣品總量×100%。具體計算7種樣品的5次平均值，即為該樣品的凈度。

1.3.2 種子千粒重測定。按農(nóng)作物種子檢驗規(guī)程(GB/T3543.7)［4］中重量測定法進行。分別將凈度分析后的7種不同來源的知母凈種子隨機取樣，每個試樣各數(shù)取500粒種子，分別用萬分之一電子天平稱重，記錄各自重量。每組試驗重復(fù)5次，5個重復(fù)的平均值乘以2即為該種子的千粒重，千粒重=(試樣重量/試樣粒數(shù))×1 000。

1.3.3 種子發(fā)芽試驗。按農(nóng)作物種子檢驗規(guī)程(GB/T3543.4)［4］進行發(fā)芽試驗。將經(jīng)過凈度測定的7種知母種子分別隨機數(shù)取試樣4份，每份50粒，每種各取200粒。分別將知母凈種用0.1%的升汞消毒2 min，然后用純凈水沖洗干凈。采用培養(yǎng)皿紙床，每組重復(fù)4次，每次播種50粒種子，置(25±1)℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)。以胚根伸出種皮2 mm時為發(fā)芽標(biāo)準(zhǔn)，每日觀察記錄發(fā)芽情況，隨時補給水分，保持紙床濕潤。同時，將試驗過程中出現(xiàn)的霉?fàn)€種子及時處理或揀出，并加以記錄。將觀察記錄的結(jié)果按公式算出各組知母種子的發(fā)芽勢和發(fā)芽率:發(fā)芽率=(發(fā)芽種子粒數(shù)/供試種子粒數(shù))×100%、發(fā)芽勢=規(guī)定天數(shù)內(nèi)發(fā)芽種子粒數(shù)/供試種子粒數(shù)×100%。

1.3.4 種子生活力測定。按種子常規(guī)檢驗方法四唑法［5］進行。隨機數(shù)取7種知母凈種子各200粒，分別在30～35℃溫水中浸種6 h，取出，用刀片將吸脹的種子沿種子胚中心線縱切成兩半，將其中的一半置于2個培養(yǎng)皿中，每皿100個半粒，加入適量的0.5%TTC，以覆蓋種子為度。然后置于(30±1)℃恒溫箱中1 h，凡被染成紅色的是活種子。將另一半在沸水中煮5 min殺死胚，做同樣染色處理，作為對照觀察。染色結(jié)束后，瀝去溶液，用清水沖洗，將種仁擺在培養(yǎng)皿中，逐一檢查記錄，計算活種子的百分率。種子生活力=染色種子個數(shù)/待測種子總數(shù)×100%。

2 結(jié)果與分析

2.1 種子的凈重和千粒重 由表1可知，7種知母種子中易縣的種子凈度高達92.76%，其次為亳州的，種子凈度達91.59%，絳縣、萬榮、襄汾、大青山的種子凈度居于中等;陵川的種子凈度最差，為78.43%。7種知母種子的千粒重范圍為6.83 ～7.85 g，平均值為7.48 g，其中襄汾的種子千粒重高達7.85 g，其他依次為絳縣＞亳州＞萬榮＞易縣＞陵川＞大青山，大青山野生種子的千粒重最低，為6.83 g。

表1 知母種子質(zhì)量檢測結(jié)果

2.2 種子的發(fā)芽率、發(fā)芽勢和生活力 從表1可看出，7種知母種子的發(fā)芽率為48.5% ～95.0%，發(fā)芽率由高到低依次為陵川＞襄汾＞亳州＞易縣＞萬榮＞大青山＞絳縣;7種知母種子的發(fā)芽勢為28.5% ～78.5%，發(fā)芽勢由高到低依次為陵川＞易縣＞萬榮＞大青山＞襄汾＞亳州＞絳縣;7種知母種子的生活力為58.0% ～78.5%，生活力由高到低依次為陵川＞襄汾＞亳州＞萬榮＞大青山＞易縣＞絳縣。

3 討論與結(jié)論

根據(jù)文獻報道，知母種子在25℃下發(fā)芽率、發(fā)芽指數(shù)均高于20和30℃的指標(biāo)［6］;當(dāng)年采收的知母種子發(fā)芽率為80% ～90%，隔年知母種子發(fā)芽率為 40% ～50%［7－8］。因此，該研究發(fā)芽試驗選擇25℃為知母種子的發(fā)芽溫度;該試驗所用絳縣種子雖為當(dāng)年的新種子，但其發(fā)芽率僅為48.5%，在7種知母種子中發(fā)芽率最低，這可能與其貯存過程中部分種子受潮發(fā)霉有關(guān)。

該試驗曾用四氮唑(TTC)法、溴麝香草酚藍(BTB)法和紅墨水染色法對知母種子進行生活力測定預(yù)試驗，發(fā)現(xiàn)紅墨水法雖然最為快捷且生活力也高，但因種胚染色不夠清晰，影響計數(shù)的準(zhǔn)確性;BTB法瓊脂培養(yǎng)基制作麻煩費時，且染色與否不易被觀察，不能準(zhǔn)確反映種子的生活力，因此，知母種子生活力檢測最終選擇了四唑染色法。TTC法染色清晰、準(zhǔn)確度高、重復(fù)性好，但利用四唑染色法也有一定的不足，即種胚染色普遍偏淡呈現(xiàn)粉紅色。

目前，國內(nèi)外關(guān)于知母種子質(zhì)量檢驗的研究很少，且關(guān)于知母野生種子的質(zhì)量檢驗還未見有文獻報道。該試驗通過對知母種子進行凈度、千粒重、發(fā)芽率、發(fā)芽勢和生活力指標(biāo)的檢測分析發(fā)現(xiàn)，7種不同來源的知母種子質(zhì)量上存在較大差異，且各項檢驗指標(biāo)之間相關(guān)性不明顯;陵川、襄汾、易縣、亳州的知母種子質(zhì)量較好，由于影響知母種子質(zhì)量的因素復(fù)雜多樣，還有待對其進行進一步深入研究。山西、河北、內(nèi)蒙、安徽是知母藥材的主要產(chǎn)區(qū)，河北易縣更是知母著名道地產(chǎn)區(qū)。因此，對上述7種來源于知母主產(chǎn)區(qū)的種子進行質(zhì)量檢測研究，可為知母藥材產(chǎn)區(qū)的生產(chǎn)繁殖提供科學(xué)依據(jù)，在知母引種繁殖和優(yōu)種選育方面具有一定應(yīng)用價值，對推動中藥材規(guī)范化種植具有重要的現(xiàn)實意義。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:一部［S］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:197－198.

［2］孫偉，李敬，馬淑坤.知母種子繁殖技術(shù)及效益分析［J］.遼寧農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007(3):102 －103.

［3］中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所.中草藥栽培技術(shù)［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，1979:289.

［4］國家技術(shù)監(jiān)督局.《農(nóng)作物種子檢驗規(guī)程》實施指南:GB/T3543［S］.北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，1995:1－92.

［5］王書林.藥用植物栽培技術(shù)［M］.北京:中國中醫(yī)藥出版社，2009:471－472.

［6］邢丹，王文全，于福來，等.知母種子質(zhì)量檢驗方法研究［J］.中國現(xiàn)代中藥，2011，13(5):23 －25.

［7］王明霞.知母的特征特性與人工栽培技術(shù)［J］.甘肅農(nóng)業(yè)科技，2005(8):71.

［8］徐同印，徐杰.知母的栽培管理技術(shù)［J］.中國中藥雜志，1990，15(12):717.