樊鑫，趙新達(dá)，楊大佐，趙歡，周一兵

(大連海洋大學(xué)遼寧省海洋生物資源恢復(fù)與生境修復(fù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，遼寧大連 116023)

石油是現(xiàn)代社會不可或缺的能源，但在石油的開采、運(yùn)輸、加工和使用過程中會給生態(tài)環(huán)境和社會環(huán)境造成一定的危害［1-2］。據(jù)聯(lián)合國有關(guān)組織統(tǒng)計，每年海上油井井噴事故和運(yùn)輸事故造成的溢油高達(dá)2.2 ×107t，大量石油進(jìn)入海洋環(huán)境，對海洋生態(tài)環(huán)境以及人類社會造成嚴(yán)重破壞［3-4］。吸附在懸浮物上石油烴會隨潮汐、海流遷移到潮間帶的沉積物上［5］。在潮水作用下，灘涂表層石油烴會向深部遷移，在遷移過程中被沉積物固體顆粒吸附，殘留于沉積物中［6］。沉積在灘涂底質(zhì)的石油烴一方面會影響底質(zhì)的通透性［7］，破壞灘涂底質(zhì)質(zhì)量;另一方面，石油烴中巨毒性、致癌性的多環(huán)芳烴會嚴(yán)重影響海洋底棲生物的正常生長。所以對海洋灘涂底質(zhì)中石油烴的測定尤為重要。

目前，測定石油烴含量的方法包括重量法、紫外分光光度法、紅外光度法、熒光分光光度法等。1979年，美國EPA 將重量法定為檢測水中石油污染物的標(biāo)準(zhǔn)方法［8］，其優(yōu)點(diǎn)是不受油品限制，不需要特殊儀器，且精密度和準(zhǔn)確度均比較理想，適合測定高濃度土壤，但損失了沸點(diǎn)低于提取劑的石油組分，所以測量值比真實(shí)值偏低［9］。紫外分光法適合于測定高濃度含油樣品中的石油污染物，無法測定石油污染物中的飽和烴和環(huán)烴類，靈敏度較低;該方法在測定地表水、土壤、沉積物中石油污染物的應(yīng)用較為廣泛，而在測定水產(chǎn)品中的石油污染物則不多見［10］。熒光分光光度法是一種超微量分析方法，相比紫外和紅外分光光度法具有更高的靈敏度;由于各種熒光物質(zhì)均有各自的紫外激發(fā)波長和熒光發(fā)射波長，熒光物質(zhì)的這種雙重特異性，使該方法具有良好的選擇性，能夠有效地排除其它物質(zhì)的干擾［11］。

無論上述何種方法，萃取是測定底質(zhì)中石油烴總量的重要步驟。石油能夠與土壤膠體以及一些有機(jī)物緊密結(jié)合成結(jié)構(gòu)復(fù)雜的復(fù)合體，必須使用具有較強(qiáng)極性的有機(jī)溶劑萃?。?2］。除了萃取劑的選擇，萃取方法也很重要，現(xiàn)在主流的萃取方法包括超聲萃取法、振蕩萃取法和索氏提取法［10］。目前對底質(zhì)中石油烴的萃取沒有統(tǒng)一完善的標(biāo)準(zhǔn)，不同研究所設(shè)定的萃取條件各有不同，所得出結(jié)論也不盡相同。本實(shí)驗(yàn)采用超聲萃取法萃取石油污染底質(zhì)的石油烴［13-14］。對萃取溫度、萃取劑、萃取時間以及液固比進(jìn)行了研究，為海洋灘涂底質(zhì)環(huán)境監(jiān)測提供依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 試劑與儀器

正己烷、二氯甲烷、石油醚均為分析純;盤錦油田稀油［15］，密度(20 ℃)＜0.92 g/cm3，粘度＜100 mPa·s;底質(zhì)，采自金州開發(fā)區(qū)灘涂，浸取液pH值7.82［16］，含鹽量13 060 mg/kg［17］。

日立F-2700 型熒光分光光度計;KQ3200B 型超聲波清洗器;DRP-1011 型烘箱;HERMAL Z383K 離心機(jī);AL204 電子天平;HI99163N 便攜式pH 測定儀;玻璃層析柱;CU420 型電熱恒溫水箱。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

有機(jī)溶劑經(jīng)活性炭脫芳處理。

1.2.1 油標(biāo)準(zhǔn)儲備液(1.00 mg/mL) 稱取0.100 g原油于100 mL 容量瓶中，用有機(jī)溶劑溶解、定容。

1.2.2 油標(biāo)準(zhǔn)使用液(100 μg/mL) 移取5.00 mL油標(biāo)準(zhǔn)儲備液于50 mL 容量瓶中，用有機(jī)溶劑定容。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 污染底質(zhì)的制備 底質(zhì)干燥后去除碎石和垃圾，40 目篩備用。分別稱取0.01，0.05，0.1，0.2 g 稀油，用適量石油醚溶解。分別與9.99，9.95，9.90，9.80 g 無石油污染的干燥底質(zhì)均勻混合，于背陰通風(fēng)的環(huán)境中自然風(fēng)干，得到石油含量分別為0.1%(1 000 mg/kg，海洋二類沉積質(zhì)標(biāo)準(zhǔn))，0.5%(5 000 mg/kg，超二類沉積質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)4 倍)，1.0%(10 000 mg/kg，超二類沉積質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)9 倍)和2.0%(20 000 mg/kg，超二類沉積質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)19 倍)的污染底質(zhì)。

1.3.2 樣品的超聲萃取及測定 準(zhǔn)確稱取1.00 g風(fēng)干污染底質(zhì)于50 mL 離心管中，添加萃取劑，混合均勻后在超聲波清洗器中進(jìn)行萃取。萃取后置于離心機(jī)內(nèi)以4 000 r/min 離心10 min［5］。收集上清液并定容，稀釋并測定吸光度I，以I－I0(I0為空白熒光強(qiáng)度)的值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上得出石油的濃度ρ(μg/mL)，計算土壤石油含量。

式中 Woil——每克污染底質(zhì)的石油含量，μg/g;

V——提取液體積，mL;

M——樣品的質(zhì)量，g。

底質(zhì)中總石油烴的萃取率:C=Woil/Ws×100%其中，C 為樣品底質(zhì)總石油烴的萃取率;Woil為樣品底質(zhì)總石油烴的實(shí)測值;Ws為樣品底質(zhì)總石油烴的設(shè)定值。

1.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

分別移取0，0.20，0.60，1.00，1.40，1.80，2.20 mL 油標(biāo)準(zhǔn)使用液于7 支20 mL 具塞比色管中，用有機(jī)溶劑溶解、混勻，稀釋定容。用熒光分光光度計測定吸光度。3 種有機(jī)溶劑的標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1。

圖1 3 種有機(jī)溶劑的標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 The standard curve of three kinds of organic solvent

1.5 底質(zhì)含水率的測定

采用烘干法測定石油污染土壤的含水率。105 ℃烘干16 h［18］。其含水率為:

式中 WH2O——底質(zhì)含水率，%;

MC——初始底質(zhì)的質(zhì)量，g;

MH——烘干后底質(zhì)的質(zhì)量，g。

2 結(jié)果與討論

2.1 超聲萃取正交實(shí)驗(yàn)

選取污染土壤的石油濃度、萃取溫度、萃取劑、萃取時間和液固比進(jìn)行研究，其中污染底質(zhì)的石油濃度、萃取溫度、萃取時間和液固比各設(shè)置4 個水平，萃取劑設(shè)置3 個水平，因素水平見表1，結(jié)果見表2。

表1 因素和水平表Table 1 Factors and levels

表2 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 2 The orthogonal experiment result

由表2 可知:①5 個因素對超生萃取效率影響從大到小分別為萃取劑＞土壤石油濃度＞液固比＞萃取溫度＞萃取時間;②濃度2%的石油污染底質(zhì)的萃取效率最高，1%次之，而0.5%和0.1%的萃取效率相近;③30 ℃下超生萃取效率要高于其他溫度;④二氯甲烷的超生萃取效率最高，達(dá)75.03%。該結(jié)果與李美玉［19］和陳建安等［10］的結(jié)果相似，其原因是二氯甲烷的提取物最接近污染土壤中石油烴的實(shí)際含量，而石油醚不能溶解瀝青質(zhì)，故萃取效率最差。但王如剛等［9］采用超生萃取法，液固比為3 ∶1 mL/g，結(jié)果最佳萃取劑為三氯甲烷;而溫傳忠［20］則認(rèn)為石油醚的提取效率高于二氯甲烷，其原因還待進(jìn)一步研究;⑤萃取時間效率依次為:15 ＞20＞10 ＞5 min;⑥液固比為6 ∶1 mL/g 的萃取效率最高。

綜上可知，最適用于灘涂石油污染底質(zhì)的超生萃取法的條件為:萃取劑為二氯甲烷，萃取溫度30 ℃，萃取時間15 min，液固比為6 ∶1 mL/g。且該條件下，超生萃取法更適用于濃度較高的石油污染灘涂底質(zhì)。

2.2 萃取次數(shù)對萃取率的影響

溫度30 ℃，萃取劑為二氯甲烷，每次的萃取時間為15 min，液固比為6 ∶1 mL/g，同時做2 個平行樣，萃取次數(shù)對萃取率的影響見表3。

表3 不同萃取次數(shù)的萃取率Table 3 The extraction rate of different number of times extraction

由表3 可知，通過兩次萃取，2%，1%，0.5%和0.1% 的石油污染灘涂底質(zhì)的萃取率分別達(dá)到90.09%，88.86%，82.65%和85.71%，第3 次萃取的萃取率提高不明顯，且需要更多操作，消耗更多試劑。所以，選取兩次萃取為最佳。

3 結(jié)論

石油污染灘涂底質(zhì)的超聲萃取最優(yōu)條件為:萃取劑二氯甲烷，萃取溫度30 ℃，液固比為6 mL/g，萃取時間每次15 min，萃取次數(shù)2 次。在此條件下，2%，1%，0.5%和0.1%的石油污染灘涂底質(zhì)的萃取 率 分 別 達(dá) 到90.09%，88.86%，82.65% 和85.71%。

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