亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        酶輔助提取金銀花中綠原酸與多糖的工藝研究

        2015-12-24 03:30:58石奇
        應(yīng)用化工 2015年7期
        關(guān)鍵詞:綠原金銀花多糖

        石奇

        (西安文理學(xué)院化學(xué)與化學(xué)工程學(xué)院,陜西 西安 710065)

        金銀花為忍冬科植物忍冬的干燥花蕾或帶初開的花[1]?,F(xiàn)代藥理研究表明,金銀花具有抑菌[2]、抗病毒[3]、抗氧化[4]、抗腫瘤[5]等藥理作用。金銀花綠原酸和金銀花多糖同為金銀花的主要活性成分,都具有抗細(xì)菌、抗氧化和抗腫瘤等功能[6-9]。植物中活性物質(zhì)的提取方法有多種,如水提法、酶提法、微波輔助提取法、超聲輔助提取法等。酶提法具有快速、高效、反應(yīng)時(shí)間短、溫和等諸多優(yōu)點(diǎn),已應(yīng)用于植物活性成分的提取上[10-11]。

        由于綠原酸和多糖都具有很好的藥物活性,在食品、保健、醫(yī)藥和日用化工等多個(gè)領(lǐng)域具有重要的應(yīng)用,而以往的研究一般只提取金銀花中的一種有效成分,目前還未見同時(shí)提取這兩種活性成分的工藝報(bào)道,本研究以酶提法為輔助,采用酶法水提醇沉一套工藝將金銀花中的綠原酸和多糖一并取出分離,以期同時(shí)獲得較高得率的綠原酸、多糖,為合理利用藥材資源及工業(yè)化生產(chǎn)提供實(shí)驗(yàn)室理論依據(jù)。

        1 實(shí)驗(yàn)部分

        1.1 材料與儀器

        乙醇、丙酮、甲醇、磷酸、乙腈、乙酸乙酯、三氯乙酸、無水葡萄糖、苯酚、濃硫酸均為分析純;金銀花藥材,產(chǎn)自河北省邢臺(tái)市;綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品(純度≥98%),購自天津市一方科技有限公司;纖維素酶(酶活力≥400 U/mg)。

        RE-52AA 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀;LXJ-64-01 型離心機(jī);755B 型分光光度計(jì);YP202N 型電子天平;101 型電熱鼓風(fēng)干燥箱;Nicolet 5700 型紅外光譜儀;AGILENTLC12 型高效液相色譜儀。

        1.2 綠原酸與多糖提取

        取100.00 g 金銀花干燥粉末,加入1∶10 的蒸餾水以及一定量的纖維素酶,一定溫度提取數(shù)次,合并多次提取液與金銀花殘?jiān)?,離心分離,液體減壓濃縮,1∶4(體積比)無水乙醇低溫沉淀,離心分離。醇沉固體低溫真空干燥,8%三氯乙酸脫蛋白,常溫?cái)嚢?5 min,離心分離,上清液乙醇沉淀,靜置,離心,固體用乙醇、丙酮依次進(jìn)行洗滌,低溫真空干燥,得金銀花多糖。首次醇沉操作所得液體與金銀花料渣混合,回流提取2 h,離心分離,液體減壓濃縮,乙酸乙酯純化處理[12],低溫真空干燥,得金銀花綠原酸。

        1.3 綠原酸含量測(cè)定

        采用高效液相色譜法測(cè)定金銀花中綠原酸[13]。色譜柱:C18粒(250 nm×4.6 mm,5 μm),流動(dòng)相:乙腈∶0. 4% 磷酸(15 ∶85),超聲振蕩15 min,流速1 mL/min,檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm,柱溫30 ℃,進(jìn)樣量20 μL,樣品在進(jìn)樣前經(jīng)0.45 μm 濾膜過濾。

        精密稱取綠原酸對(duì)照品0.010 6 g,加50%甲醇溶解并稀釋至50.0 mL,即為對(duì)照品溶液。精密吸取對(duì)照品溶液1.0,2.0,3.0,4.0,5.0 mL 置棕色量瓶中加50%甲醇稀釋至10.0 mL 搖勻,按上述色譜條件,以峰面積積分值為縱坐標(biāo),濃度為橫坐標(biāo),得綠原酸標(biāo)準(zhǔn)工作曲線y =20 763x +235.92,相關(guān)系數(shù)為R2=0.999 3,其線性范圍為:21.20 ~106.0 μg/mL。

        1.4 多糖含量測(cè)定

        采用苯酚-硫酸法[14],測(cè)定金銀花提取物中總糖含量。以葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)樣品,分別取標(biāo)準(zhǔn)溶液(質(zhì)量濃度為10 mg/mL)0.1,0.2,0.3,0.4,0.5,0.6,0.7 mL 依次加水,為1 mL。另取蒸餾水1 mL作空白實(shí)驗(yàn),每支試管加10%苯酚溶液1 mL,搖勻。然后每支試管中緩慢加入H2SO45 mL,并放入冷水中冷卻,搖勻。在490 nm 下比色測(cè)定,以葡萄糖質(zhì)量濃度(mg/mL)為橫坐標(biāo),吸光度為縱坐標(biāo),制作標(biāo)準(zhǔn)曲線得方程y=0.030 3x+1.800 1,R2=0.995 8。

        2 結(jié)果與討論

        2.1 提取溫度對(duì)綠原酸與多糖得率的影響

        取酶用量為0.2%,提取時(shí)間為60 min,探討不同提取溫度對(duì)金銀花綠原酸與多糖得率的影響,實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖1。

        圖1 提取溫度對(duì)綠原酸和多糖得率的影響Fig.1 Effects of extraction temperature on yield of chlorogenic acid and polysaccharide

        由圖1 可知,提取溫度為50 ℃時(shí),酶法輔助對(duì)綠原酸和多糖的提取效果最好,隨著提取溫度升高,對(duì)多糖提取的影響不大,但使得綠原酸的得率下降,可能是由于體系溫度升高導(dǎo)致酶活力下降對(duì)綠原酸提取的負(fù)面影響較大,而對(duì)多糖提取影響較小。

        2.2 酶用量對(duì)綠原酸與多糖得率的影響

        固定提取溫度為50 ℃,提取時(shí)間60 min,考察不同酶用量對(duì)兩種產(chǎn)品得率的影響,實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖2。

        圖2 酶用量對(duì)綠原酸和多糖得率的影響Fig.2 Effects of cellulase concentration on extraction yield of chlorogenic acid and polysaccharide

        由圖2 可知,隨著酶用量的增加,提取綠原酸和多糖的得率呈上升趨勢(shì),但當(dāng)酶用量超過0.3% ~0.4%后,有效成分提取得率增效趨于平緩,這主要是由于纖維素酶的加入使得金銀花細(xì)胞壁破壞,增加了綠原酸和多糖的溶出,隨著酶用量的增加,金銀花中兩種有效成分大部分已溶出,所以繼續(xù)增加酶濃度將不再顯著增加提取效果。

        2.3 提取時(shí)間對(duì)綠原酸與多糖得率的影響

        設(shè)定提取溫度為50 ℃,酶用量為0.4%,比較不同提取時(shí)間對(duì)產(chǎn)品得率的影響,實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖3。

        圖3 提取時(shí)間對(duì)綠原酸和多糖得率的影響Fig.3 Effects of extraction time on yield of chlorogenic acid and polysaccharide

        由圖3 可知,隨著提取時(shí)間的延長(zhǎng),金銀花多糖的提取得率呈先增大后下降的狀態(tài),而金銀花綠原酸的提取得率呈先增大,到90 min 后再繼續(xù)延長(zhǎng)提取時(shí)間對(duì)其提取得率的影響不大,這主要是提取時(shí)間較長(zhǎng)后導(dǎo)致多糖分解,而綠原酸變化不大。

        2.4 正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化

        根據(jù)上述單因素實(shí)驗(yàn)探索情況,結(jié)合提取溫度、酶用量與提取時(shí)間3 個(gè)因素,各取3 個(gè)水平,選用L9(34)的正交表,以綠原酸得率與多糖得率為考察指標(biāo),經(jīng)權(quán)重得率(綠原酸、多糖得率權(quán)重值各為0.5),對(duì)酶輔助提取工藝進(jìn)行優(yōu)化,并對(duì)結(jié)果進(jìn)行極差分析,確定最優(yōu)工藝,正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。

        表1 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果Table 1 Results of orthogonal test

        由表1 可知,3 個(gè)因素對(duì)提取效果的影響程度大小為:提取溫度﹥提取時(shí)間﹥酶用量,確定最佳的工藝條件為:提取溫度50 ℃,提取時(shí)間120 min,酶用量0.5%。在該最佳工藝條件下,重復(fù)3 次平行實(shí)驗(yàn),得金銀花綠原酸平均得率為4.90%,金銀花多糖平均得率為6.58%。

        2.5 金銀花綠原酸HPLC 色譜檢測(cè)分析

        將提取所得金銀花綠原酸樣品研成細(xì)粉,稱取細(xì)粉約0. 5 g,加入50% 甲醇50 mL,超聲處理15 min,放冷,過濾,吸取濾液5 mL,加50%甲醇至25 mL 即為提取樣品溶液。取綠原酸對(duì)照品(按1.3 節(jié))與提取樣品溶液各20 μL 分別進(jìn)樣測(cè)定,結(jié)果見圖4。

        圖4 金銀花綠原酸HPLC 圖Fig.4 HPLC chromatogram of standard chlorogenic acid and chlorogenic acid from Flos Lonicerae

        由圖4 可知,檢測(cè)物均在4.91 min 處出現(xiàn)最大吸收峰,可以斷定兩種物質(zhì)為同一化合物。

        2.6 金銀花多糖紅外光譜檢測(cè)分析

        提取所得金銀花多糖的紅外分析見圖5。

        圖5 金銀花多糖的紅外光譜圖Fig.5 IR spectra analysis of polysaccharides from Flos Lonicerae

        由圖5 可知,提取所得多糖具有典型的多糖特征吸收峰[15],3 402 cm-1處的吸收峰是—OH 的伸縮振動(dòng)吸收峰,2 924 cm-1處是C—H 的伸縮振動(dòng)吸收峰,波數(shù)1 620 cm-1處有 C O 非對(duì)稱的伸縮振動(dòng)峰,1 404 cm-1處是C—H 變角振動(dòng),1 091 cm-1處為—OH 的變角振動(dòng)吸收峰,在890 cm-1處存在β-型糖苷鍵的特征吸收峰,說明金銀花多糖為β-多糖。

        3 結(jié)論

        通過該實(shí)驗(yàn),可以在一條工藝下同時(shí)實(shí)現(xiàn)對(duì)金銀花綠原酸和金銀花多糖這兩種活性物質(zhì)的提取,并得到較好的提取效果。金銀花多糖紅外分析表明該產(chǎn)物具有多糖的特征吸收峰,并初步斷定其結(jié)構(gòu)為β-多糖型。經(jīng)單因素實(shí)驗(yàn)探索,由正交實(shí)驗(yàn)得知提取溫度影響程度最大,其次是提取時(shí)間,酶用量影響最小,確定提取的最佳工藝參數(shù)為:提取溫度50 ℃,提取時(shí)間120 min,酶用量0.5%,得到金銀花綠原酸得率為4.90%,金銀花多糖得率為6.58%。

        [1] 中華人民共和國藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典一部[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2010:152.

        [2] 李平,趙成. 金銀花水提物及醇提物體外抗菌實(shí)驗(yàn)[J].中國當(dāng)代醫(yī)藥,2010,17(17):48-50.

        [3] 胡克杰,王躍紅,王棟.金銀花中綠原酸在體外抗病毒作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中醫(yī)藥信息,2010,7(3):27-28.

        [4] 宮璀璀,鄭玉霞,鄭乃剛,等. 金銀花在體內(nèi)抗氧化作用的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 實(shí)用醫(yī)藥雜志,2006,23(5):584-585.

        [5] 劉玉國,劉玉紅,蔣海強(qiáng).金銀花多糖對(duì)小鼠S180 肉瘤的抑制作用與機(jī)制研究[J]. 腫瘤學(xué)雜志,2012,18(8):584-587.

        [6] 吳衛(wèi)華,康楨,歐陽冬生,等. 綠原酸的藥理學(xué)研究進(jìn)展[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2006,18(4):691-694.

        [7] 王輝,田呈瑞,馬守磊,等.綠原酸的研究進(jìn)展[J]. 食品工業(yè)科技,2009,30(5):341-345.

        [8] 林雄平,陳曉清,蘇育才,等. 金銀花和苦丁茶多糖提取物抗菌活性研究[J]. 亞熱帶植物科學(xué),2008,37(1):51-53.

        [9] 蘇香萍,龔大春,張亞雄,等. 二氧化碳超臨界萃取金銀花揮發(fā)油化學(xué)成分的研究[J]. 時(shí)珍國醫(yī)國藥,2007,18(11):2643-2644.

        [10]錢志偉,王會(huì)曉,楊海蛟,等.酶法提取馬齒莧多糖[J].中國農(nóng)學(xué)通報(bào),2011,27(5):475-478.

        [11]白海波,王劍飛,周蒂.金銀花提取條件對(duì)綠原酸含量的影響[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志,2003,20(2):130-132.

        [12]游慶紅,尹秀蓮,朱昱.金銀花中綠原酸的提取純化方法研究[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2009,37(24):11549-11550.

        [13]包衛(wèi)華.不同產(chǎn)地的金銀花中綠原酸含量的研究比較[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥,2007,18(7):5071-5072.

        [14]羅毅,潘細(xì)貴,劉剛,等.苯酚-硫酸法測(cè)定多糖含量顯色方式的優(yōu)選[J]. 中國中醫(yī)藥信息雜志,2005,12(1):45-46.

        [15]寧永成. 有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)鑒定與有機(jī)波譜學(xué)[M]. 北京:科學(xué)出版社,2002.

        猜你喜歡
        綠原金銀花多糖
        金銀花“香溢”致富路
        金銀花
        蔓三七葉中分離綠原酸和異綠原酸及其抗氧化活性研究
        綠原酸對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化的抑制作用
        中成藥(2018年11期)2018-11-24 02:56:46
        米胚多糖的組成及抗氧化性研究
        熟三七多糖提取工藝的優(yōu)化
        中成藥(2018年3期)2018-05-07 13:34:45
        金銀花中綠原酸含量不確定度的評(píng)定
        中成藥(2017年10期)2017-11-16 00:50:42
        金銀花又開
        夏日良藥金銀花
        酶法降解白及粗多糖
        中成藥(2014年11期)2014-02-28 22:29:50
        黑人巨茎大战欧美白妇| 精品嫩模福利一区二区蜜臀| 麻豆精品国产av在线网址| 97久久超碰国产精品旧版| 91精品一区国产高清在线gif| 亚洲色拍拍噜噜噜最新网站| 精品精品国产一区二区性色av| 国产99久久久国产精品~~牛| 国产97色在线 | 日韩| 国产91福利在线精品剧情尤物| 亚洲av一区二区三区网站 | 国产91成人精品高潮综合久久| 亚洲精品色午夜无码专区日韩| 欧美极品美女| 色优网久久国产精品| 中文字幕一区二区综合| 麻豆精品久久久久久中文字幕无码| 一本色综合亚洲精品蜜桃冫| 久久91精品国产91久久麻豆| 久草视频这里只有精品| 毛片无码国产| 伊人一道本| av网站韩日在线观看免费| 69国产成人精品午夜福中文| 性色av无码一区二区三区人妻| 日韩精品久久久中文字幕人妻| 精品麻豆一区二区三区乱码| 伊人精品久久久久中文字幕| 毛片免费全部无码播放| 日本五十路熟女在线视频| 成年人观看视频在线播放| 野外少妇愉情中文字幕| 久久频这里精品99香蕉| 男女啪啪动态视频在线观看 | 国产色无码精品视频国产| 亚洲色欲久久久综合网| 国产一区二区三区在线影院| 国产果冻豆传媒麻婆精东| 极品熟妇大蝴蝶20p| 有码中文字幕一区二区| 综合偷自拍亚洲乱中文字幕|