王永力,哈麗代·熱合木江,劉 晨,萬江春,艾比布拉·伊馬木
(新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)草業(yè)與環(huán)境科學(xué)學(xué)院,新疆草地資源與生態(tài)重點實驗室,新疆烏魯木齊 830052)
烏拉爾甘草莖葉粉替代混播牧草干草粉對綿羊瘤胃體外發(fā)酵特性的影響
王永力,哈麗代·熱合木江,劉 晨,萬江春,艾比布拉·伊馬木*
(新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)草業(yè)與環(huán)境科學(xué)學(xué)院,新疆草地資源與生態(tài)重點實驗室,新疆烏魯木齊 830052)
本試驗采用體外產(chǎn)氣法研究了不同比例烏拉爾甘草莖葉粉替代混播牧草干草粉對綿羊瘤胃體外產(chǎn)氣和發(fā)酵特性的影響,探討甘草莖葉飼料添加的適宜比例。烏拉爾甘草(Glycyrrhiza nralensis)莖葉粉替代混播牧草干草粉按0∶100(G0)、20∶80(G20)、40∶60(G40)、60∶40(G60)、80∶20(G80)與100∶0(G100)的比例組合進行體外發(fā)酵試驗,分別培養(yǎng)2、4、8、12、24、36、48 h,研究體外培養(yǎng)發(fā)酵48 h后其對綿羊瘤胃發(fā)酵參數(shù)(產(chǎn)氣量、體外干物質(zhì)消化率、發(fā)酵液pH、揮發(fā)性脂肪酸濃度)的影響。結(jié)果表明:累積產(chǎn)氣量及產(chǎn)氣速率隨著烏拉爾甘草莖葉粉在發(fā)酵底物中比例的增加而減少,甘草莖葉粉占60%以上的試驗組與G0、G20和G40處理間差異顯著(P<0.05);G0、G20、G40試驗組間的體外干物質(zhì)消化率極顯著高于G60、G80、G100(P<0.01);隨著甘草莖葉粉添加比例的增加,發(fā)酵液的總揮發(fā)性脂肪酸濃度下降而pH值上升。結(jié)果顯示,本試驗條件下,烏拉爾甘草莖葉替代一般牧干草的比例超過60%時,對綿羊瘤胃發(fā)酵具有一定抑制作用,按20%~40%比例添加則無負面影響。
甘草莖葉;產(chǎn)氣量;瘤胃發(fā)酵;綿羊
甘草(Glycyrrhiza uralensis Fisch.)是新疆荒漠區(qū)最主要的植被資源之一,野生甘草有153.3萬多公頃,主要有烏拉爾甘草(Glycyrrhiza uralensis)、光果甘草(G.glabra)、脹果甘草(G.inflata)等[1]。截止2009年,新疆野生甘草遭到過度開采,甘草資源退化嚴重,已引起各方關(guān)注。為保護甘草資源,穩(wěn)定甘草產(chǎn)量,新疆正大力發(fā)展人工規(guī)?;N植甘草,種植面積已達數(shù)十萬公頃;種植區(qū)域分布基本呈北疆種植烏拉爾甘草為主,南疆圍欄護育脹果甘草為主[2]。甘草地上部分莖葉繁茂,隨著甘草種植面積逐年擴大,若能將其作為飼料開發(fā)則對新疆飼草短缺瓶頸問題具有重大現(xiàn)實意義。張繼等[3]對烏拉爾甘草、光果甘草和脹果甘草莖葉中各類營養(yǎng)成分進行了比較分析研究。郭雪峰等[4]研究發(fā)現(xiàn),添加一定比例的甘草提取物有利于瘤胃體外發(fā)酵。另外,用甘草莖葉飼喂羔羊及其替代苜蓿飼喂奶?;蛴玫攘康母什萸o葉草粉與紫花苜蓿草粉配合飼喂等研究報告均說明甘草莖葉具有類似于苜蓿的飼喂效果。如上所述,甘草莖葉的飼料化利用主要集中在營養(yǎng)成分分析及其飼喂試驗,但甘草莖葉飼料對綿羊瘤胃發(fā)酵特性的影響以及合理添加比例方面鮮有研究報道。本試驗旨在通過體外產(chǎn)氣法評定烏拉爾甘草莖葉按不同比例替代混播牧草時的發(fā)酵產(chǎn)氣特性,探討甘草莖葉飼料添加的適宜比例,為開發(fā)甘草莖葉資源作為反芻動物飼料提供科學(xué)依據(jù)。
1.1 試驗材料及營養(yǎng)水平分析表 本試驗用烏拉爾甘草莖葉取自新疆康隆農(nóng)業(yè)科技發(fā)展有限公司, 2011年種植(2年生),2013年8月刈割其地上部分;牧干草來源為新疆伊犁昭蘇馬場混播人工草地,選用鴨 茅 (Dactylis glomerata)、 無 芒 雀 麥(Bromus innermis)、貓尾草(Phleum pratense)等禾本科牧草和紅豆草(Onobrychis viciaefolia)、紫花苜蓿(Medicago sativa)、紅三葉(Trifolium oratense)等豆科牧草進行混播。每份草樣均粉碎過40目篩,備用。供試甘草莖葉和混播牧草的粗蛋白質(zhì)(CP)、粗灰分(Ash)、中性洗滌纖維(NDF)和酸性洗滌纖維(ADF)等營養(yǎng)成分相對接近(表1)。
表1 甘草莖葉與混播牧草的基本營養(yǎng)成分(風干基礎(chǔ))%
1.2 瘤胃液采集與培養(yǎng)液配制 于晨飼前分別從3只綿羊的瘤胃中采集瘤胃內(nèi)容物混合,4層紗布過濾,取得瘤胃液,灌入經(jīng)預(yù)熱達39℃的保溫瓶中,蓋嚴瓶口,迅速回到實驗室,與預(yù)先準備好的人工唾液按照1∶2比例混合作為瘤胃微生物培養(yǎng)液,持續(xù)通入CO2,置于39℃的水浴槽中,直至培養(yǎng)液的顏色先變成粉紅色,最終變成無色后即可使用。人工唾液參照Menke等[5]的方法配制。
1.3 試驗設(shè)計 對烏拉爾甘草莖葉粉(以下簡稱甘草)與混播牧草干草粉(以下簡稱混播草)分別以0∶100、20∶80、40∶60、60∶40、80∶20、100∶0的比例組合進行體外發(fā)酵試驗,以評定其營養(yǎng)價值。準確稱取(400±10)mg已按要求粉碎的待發(fā)酵底物于已經(jīng)升溫至39℃發(fā)酵瓶中,然后加入上述配好的混合培養(yǎng)液30 mL,再向產(chǎn)氣瓶中通入CO2氣體至飽和,發(fā)酵瓶用橡膠塞和鋁蓋封口后,置于39℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h。每個處理設(shè)3個重復(fù),同時設(shè)1個空白對照組。
1.4 樣品采集 分別在體外培養(yǎng)2、4、8、12、24、36、 48 h時測定產(chǎn)氣量(GP),48 h后終止發(fā)酵,收集發(fā)酵液,4層紗布過濾,即時測定pH,隨后于-20℃凍存并在1周內(nèi)完成揮發(fā)性脂肪酸(VFA)的測定。將過濾后的發(fā)酵殘留物沖洗后烘干,待測發(fā)酵底物的體外干物質(zhì)消化率(IVDMD)。
1.5 測定指標及方法 GP∶分別在發(fā)酵的2、4、8、12、24、36、48 h觀察記錄注射器活塞刻度值。每次產(chǎn)氣試驗至少3個空白對照做校正用,至少在不同時間重復(fù)測定2次,如每次測定結(jié)果標準差大于0.8 mL,再重復(fù)測定。某一時間段培養(yǎng)管凈產(chǎn)氣量計算公式∶
式中,GPT為樣品在t時刻的產(chǎn)氣量(mL);Vt為樣品發(fā)酵t后,培養(yǎng)管刻度讀數(shù);V0為樣品在開始培養(yǎng)時,空白培養(yǎng)管刻度讀數(shù);W為樣品干物質(zhì)重(mg)。
取10 mL發(fā)酵液3 500 r/min離心10 min,取上清液,采用D-51pH測定儀測定其pH值。VFA測定采用LC9811型高效液相色譜儀進行測定。色譜柱∶Kromnsil C18 S-DVB gel Column,檢測器∶SPDM10AVP,流動相∶3 mmol/L高氯酸,流速∶1 mL/min,柱溫30℃,檢測波長210 nm,進樣量∶20 μL。IVDMD測定,瘤胃體外發(fā)酵結(jié)束后將全部發(fā)酵液用尼龍袋過濾,保留殘渣,60℃烘干48 h稱重,記錄數(shù)值。
1.6 產(chǎn)氣動力學(xué) 將所有發(fā)酵底物在2、4、8、12、24、36、48 h各時間點的產(chǎn)氣量代入產(chǎn)氣模型公式Φrskov。計算公式∶
式中,p為t時間的產(chǎn)氣量(mL);a為快速發(fā)酵部分的瞬時產(chǎn)氣量(mL);b為慢速發(fā)酵部分的產(chǎn)氣量(mL);c為每小時潛在可消化組分的消失率(%/h); a+b為潛在產(chǎn)氣量,t為發(fā)酵時間,即自開始發(fā)酵至記錄產(chǎn)氣的時間,本研究中為0~48 h。根據(jù)非線性最小二乘法原理,求出a、b、c值。
1.7 統(tǒng)計分析 數(shù)據(jù)采用Excel 2003和SPSS17.0進行數(shù)據(jù)整理與統(tǒng)計分析。
2.1 累積產(chǎn)氣量、產(chǎn)氣參數(shù) 由圖1可知,各試驗組的產(chǎn)氣量隨著發(fā)酵時間的延長均呈上升趨勢,其中發(fā)酵初期增長較快,后期趨于平緩。在同一時間點,產(chǎn)氣初級階段混播草含量高的組合產(chǎn)氣量高于混播草含量低的組合,即G20>G0>G40>G60>G80>G100,說明混播草在產(chǎn)氣速率上快于甘草。產(chǎn)氣參數(shù)方面,快速產(chǎn)氣a與產(chǎn)氣速率c則隨甘草在整個混合發(fā)酵底物中比例的增加而降低,G20和G40組間快速產(chǎn)氣參數(shù)a差異不顯著(>0.05),但顯著高于G80、G100(<0.05)。各組間產(chǎn)氣速率(c)差異顯著(<0.05)。G20組慢速產(chǎn)氣b與潛在產(chǎn)氣量(a+b)顯著高于G60、G80、G100組(<0.05)。
圖1 不同比例組合甘草和混播草體外發(fā)酵48 h的GP動態(tài)變化曲線
2.2 IVDMD 從圖2可以看出,在整個混合發(fā)酵底物中IVDMD基本隨著甘草比例的增加而逐漸下降。發(fā)酵48 h后,橫向比較中G0的IVDMD最高,G0、G20、G40極顯著高于其他組合(<0.01)。
圖2 不同比例組合甘草和混播草體外發(fā)酵48 h的IVDMD
2.3 發(fā)酵液的pH值和VFA濃度 由表3可知,試驗組體外發(fā)酵液pH值都在6.03~6.23,沒有明顯差異,屬于瘤胃微生物特別是纖維分解菌生長較為適宜的環(huán)境。隨著發(fā)酵時間的延長到培養(yǎng)結(jié)束后48 h,pH值隨著甘草含量的增加而隨之變高;總VFA濃度基本隨著甘草比例的增加呈下降趨勢,乙酸濃度以及丙酸濃度縱向變化規(guī)律基本相似;甘草和混播草不同比例乙酸/丙酸比值基本保持在2.94~3.34,隨著甘草替換比例的增加而增加,各試驗組間差異不顯著(>0.05)。另外,發(fā)現(xiàn)揮發(fā)性脂肪酸濃度高的試驗組則相應(yīng)的pH值低。
表3 不同比例組合甘草和混播草體外發(fā)酵48 h的pH和VFA
有研究表明,NDF代表著飼草容積,決定著動物的飽腹度,與家畜的采食量呈負相關(guān);ADF很難被動物消化,與消化率呈負相關(guān),其含量越高,消化率越低[6]。目前,國內(nèi)外關(guān)于烏拉爾甘草莖葉營養(yǎng)成分分析的研究表明,烏拉爾甘草莖葉中糖、蛋白質(zhì)、脂肪含量較高,并且含有豐富的礦質(zhì)元素[3]。本試驗中,烏拉爾甘草莖葉中性洗滌纖維、酸性洗滌纖維含量高于混播牧草,但其粗蛋白含量接近混播牧草,適合替代一定比例牧草作為飼料供給家畜。
反芻動物對飼料營養(yǎng)物質(zhì)的消化以瘤胃消化為主,瘤胃消化實質(zhì)上是碳水化合物在瘤胃微生物的作用下發(fā)酵分解為VFA和氣體的過程。瘤胃內(nèi)GP、IVDMD、pH和VFA是反映瘤胃微生物的生長和其對飼料的利用程度的重要參數(shù)。一定時間體內(nèi)發(fā)酵產(chǎn)氣量可綜合反映底物被分解利用的程度,許多學(xué)者報道體外產(chǎn)氣量與體內(nèi)干物質(zhì)降解率呈高度正相關(guān),其可以說明飼料的整體降解情況。胡偉蓮等[7]報道,纖維素、半纖維素在瘤胃內(nèi)經(jīng)過揮發(fā)性脂肪酸代謝被降解為VFA,其是反芻動物能量的重要來源,占反芻動物吸收能量的70%~80%,其中最多的為乙酸,說明VFA在反芻動物能量代謝過程中發(fā)揮著重要的作用。因此,通過各項發(fā)酵指標可以相對反映瘤胃發(fā)酵狀況正常與否,同時可作為體外發(fā)酵試驗的評價體系。從試驗中可以看出,各試驗組在發(fā)酵48 h后產(chǎn)氣量有所不同,G20、G40組的產(chǎn)氣量相對較高,與對照組(G0)之間差異不顯著,而其他試驗組出現(xiàn)顯著降低。本試驗結(jié)果顯示,添加不同比例甘草一定程度上抑制了產(chǎn)氣量的升高,影響了飼料碳水化合物的消化。這可能是由于甘草莖葉中有效成分抑制了發(fā)酵液中細菌、酵母菌、真菌等瘤胃微生物的生長[8],影響到發(fā)酵底物的消化,降低產(chǎn)氣量。Liu等[9]、張吉鹍等[10-11]研究發(fā)現(xiàn),不同比例組合的禾本科牧草與稻草、碳酸氫銨處理的稻草與稻草或苜蓿與玉米秸稈混合發(fā)酵時,產(chǎn)氣量與產(chǎn)氣速率均隨前者在混合發(fā)酵基質(zhì)中比例的增加而增加,這與本研究結(jié)論相反,說明甘草與混播草混合發(fā)酵時可減少最大產(chǎn)氣量。Schofield等[12]發(fā)現(xiàn),產(chǎn)氣參數(shù)與用原位技術(shù)(瘤胃尼龍袋技術(shù))及體外干物質(zhì)消化率法測得的消化率高度相關(guān),其他學(xué)者亦證明產(chǎn)氣量與體內(nèi)表觀消化率高度相關(guān)[13]。因此,本研究中體外發(fā)酵的潛在產(chǎn)氣量(a+b)可以看作相應(yīng)組合的消化率參數(shù)。從本研究的結(jié)果看,產(chǎn)氣量高的組合相應(yīng)的IVDMD也高,進一步證明了飼料體外發(fā)酵產(chǎn)氣量與IVDMD存在高度正相關(guān)[14],值得注意的是G20的潛在產(chǎn)氣量(a+b)高于其他試驗組。試驗說明混播草添補40%的甘草就可以使之達到與純混播草相近的消化率,當甘草添加比例為20%時,兩者可能存在正組合效應(yīng)。
pH值是最直觀和最基本的反映瘤胃發(fā)酵是否正常的生理指標,而VFA是反芻動物能量吸收的重要來源,二者呈負相關(guān)。這與隨著發(fā)酵時間延長,瘤胃微生物不斷地分解發(fā)酵底物生成的VFA會進一步加劇酸性環(huán)境有關(guān)。反芻動物VFA的產(chǎn)量與其能量代謝密切相關(guān),乙酸/丙酸的大小又與能量利用效率成線性相關(guān)??俈FA的降低表明飼料的消化率下降,而若總揮發(fā)性脂肪酸中丙酸的比例下降,則表明消化后能量的利用率也會下降。本研究發(fā)現(xiàn),總揮發(fā)性脂肪酸、乙酸和丙酸濃度隨著甘草替換比例的增加而降低,因此添加甘草降低了總揮發(fā)性脂肪酸、乙酸和丙酸濃度。劉俊峰等[15]試驗結(jié)果證明,添加不同水平甘草提取物在一定程度上降低了VFA的酸度,與本研究結(jié)果一致,這可能也是由于甘草莖葉中有效成分對瘤胃微生物有抑制作用,影響到發(fā)酵底物的分解,降低總揮發(fā)性脂肪酸濃度。當甘草100%替代混播草時,總VFA濃度顯著降低,表明其瘤胃發(fā)酵劣于混播草。同時,乙酸/丙酸比值隨著甘草替換比例的增加而增加,表明各試驗組的能量利用率均隨甘草替換比例的增加而減少,但當甘草替換比例達到60%后下降明顯。這可能與用甘草替代混播草可抑制瘤胃微生物對發(fā)酵底物的利用率,而超過一定替代比例就會發(fā)生瘤胃微生物優(yōu)先利用甘草的取代效應(yīng),而減少對混播草中結(jié)構(gòu)性碳水化合物的利用有關(guān)。這與張吉鹍等[16]體外試驗得出的結(jié)果基本相似。本研究結(jié)果表明,替代比例的升高一定程度上抑制了瘤胃發(fā)酵,降低了產(chǎn)氣量、體外干物質(zhì)消化率和總揮發(fā)性脂肪酸濃度,因此可以通過各項發(fā)酵指標探尋一個較為合適的添加比例。
綜上所述,甘草作為中草藥之王,莖葉中含有甘草酸等三萜皂貳類化合物和甘草素、異甘草素等黃酮類化合物等有效成分,其中抗菌成分較多,具有其他牧草所不具有的雙重作用。亦有學(xué)者發(fā)現(xiàn),在動物試驗中,甘草莖葉的有效成分對腎炎有治療作用及提高動物體免疫力等諸多功效。所以,若動物飼料中添加甘草莖葉產(chǎn)品必將會影響綿羊瘤胃發(fā)酵性狀,從而影響動物生產(chǎn),其確切機制有待進一步研究。
從甘草莖葉的營養(yǎng)成分來看,其品質(zhì)介于禾本科牧草和豆科牧草之間,可作為飼草利用。體外產(chǎn)氣試驗結(jié)果表明,甘草莖葉添加比例過大將會影響綿羊瘤胃發(fā)酵,一般甘草莖葉牧草的合理替代比例為20%~40%,但此結(jié)果有待于動物試驗予以論證。
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Effects of Mixed Swards Meal Replaced by the Aerial Parts of Ural Licorice Meal on in Vitro Rumenal Fermentation Characteristics in Sheep
WANG Yong-li,HALIDAI·Rehemujiang,LIU Chen,WAN Jiang-chun,AIBIBULA·Yimamu*
(Key Laboratory of Grassland Resources and Ecology of Xinjiang,College of Grassland and Environmental Sciences, Xinjiang Agricultural University,Xinjiang Urumqi 830052,China)
This experiment using in vitro gas production technique was to investigate the effects of mixed swards meal replaced by the aerial parts of ural licorice (Glycyrrhiza uralensis)meal on rumen in vitro fermentation characteristics in sheep,and to obtain the optimal replacement ratio in ration.The in vitro fermentation experiment was incubated with mixed swards meal replaced by the aerial parts of ural licorice meal at ratios of 0:100(G0),20:80(G20),40:60 (G40),60:40(G60),80:20(G80)and 100:0(G100)for 2,4,8,12,24,36 and 48 h,respectively,observation and assessment of rumen fermentation parameters including gas production,in vitro dry matter digestibility,pH and volatile fatty acid concentration of fermentation liquid for 48 h fermentation in sheep.The results showed that gas volume and rate of gas production were decreased with increasing levels of the aerial parts of ural licorice meal inclusion,and significantly decreased when 60%mixed swards meal replaced by the aerial parts of ural licorice meal compared with G0,G20 and G40 (P<0.05);the in vitro dry matter digestibility of G0,G20 and G40 was extremely higher than those of G60,G80,G100 (P<0.01);the pH value increased and total volatile fatty acids concentration decreased in the fermentation liquid with increasing of the aerial parts of ural licorice meal.The results indicated that when exceed 60%mixed swards meal replaced by the aerial parts of ural licorice meal was added,it had some inhibitory effects on rumen fermentation,while it had no bad affection that replacement ratio was 20%~40%in sheep under conditions in this study.
the aerial parts of licorice;gas production;rumen fermentation;sheep
S826.5
A文獻標識碼:0258-7033(2015)11-0055-05
2014-07-12;
2014-10-31
王永力(1987-),男,河南人,碩士研究生,從事飼料與反芻動物營養(yǎng)的研究,E-mail:wang951236@sina.com
*通訊作者:艾比布拉·伊馬木(1965-),男,新疆阿圖什人,博士,教授,博士生導(dǎo)師,主要從事飼料與反芻家畜營養(yǎng)代謝研究, E-mail:aibibnla@sina.com