胡巢鳳，孫麗萍，周　晗，楊欽河，陸大祥△(暨南大學(xué)醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)系，國(guó)家中醫(yī)藥管理局重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東廣州506;暨南大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院深圳市人民醫(yī)院腎內(nèi)科，廣東深圳5800;暨南大學(xué)醫(yī)學(xué)院中醫(yī)系，廣東廣州506)

?

活血降脂方對(duì)小鼠脂肪肝的防治作用*

胡巢鳳1▲，孫麗萍2▲，周晗1，楊欽河3，陸大祥1△
(1暨南大學(xué)醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)系，國(guó)家中醫(yī)藥管理局重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東廣州510632;2暨南大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院深圳市人民醫(yī)院腎內(nèi)科，廣東深圳518020;3暨南大學(xué)醫(yī)學(xué)院中醫(yī)系，廣東廣州510632)

［摘要］目的:探討活血降脂方對(duì)小鼠脂肪肝的防治作用及機(jī)制。方法:高脂飼料喂養(yǎng)小鼠，分別用不同劑量的活血降脂方(由人參、三七、天麻組成，命名為GST)給小鼠灌胃2周，檢測(cè)血脂、肝組織甘油三酯(TG)含量，并觀察肝指數(shù)和肝臟病理變化，篩選出藥物的最佳用藥劑量。此外，小鼠分為正常對(duì)照(NC)組，喂基礎(chǔ)飼料;模型組喂高脂飼料。12周后將模型小鼠隨機(jī)分為高脂(HF)組，正常飲食(ND )組和GST組。除HF組飼高脂飼料外，其余各組飼基礎(chǔ)飼料; GST組給予GST灌胃2周，其余各組以同等容積蒸餾水灌胃。檢測(cè)血清總膽固醇(TC)、TG、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)及肝組織TC、TG含量，觀察肝指數(shù)、肝組織超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量，肝組織病理變化及過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPARα)、細(xì)胞色素P450 2E1(CYP2E1)的mRNA表達(dá)。結(jié)果: GST可顯著降低血脂、肝脂和MDA水平，增加SOD活性，明顯降低肝指數(shù)并改善肝組織脂肪變性，增加肝組織PPARα mRNA表達(dá)、抑制CYP2E1 mRNA的表達(dá)。結(jié)論: GST具有有效防治脂肪肝的作用，其機(jī)制可能與上調(diào)肝組織PPARα mRNA的表達(dá)、降低血清和肝組織TG含量、下調(diào)CYP2E1 mRNA的表達(dá)以及抗脂質(zhì)過氧化反應(yīng)有關(guān)。

［關(guān)鍵詞］脂肪肝;活血降脂方;甘油三酯;脂質(zhì)過氧化反應(yīng)

［修回日期］2015-05-15

▲并列第1作者

Role of Huoxue Jiangzhi Recipe in preventing and treating fatty liver in mice

HU Chao-feng1，SUN Li-ping2，ZHOU Han1，YANG Qin-he3，LU Da-xiang1
(1Department of Pathophysiology，Key Laboratory of State Administration of Traditional Chinese Medicine，School of Medicine，Jinan University，Guangzhou 510632，China;2Department of Nephrology，Shenzhen People’s Hospital，Second Clinical Medical College of Jinan University，Shenzhen 518020，China;3Department of traditional Chinese Medicine，Guangzhou 510632，China.E-mail: ldx@ jnu.edu.cn)

［ABSTRACT］AIM: To explore the role of Huoxue Jiangzhi Recipe in preventing and treating fatty liver in mice and its underlying mechanisms.METHODS: Healthy Kunming mice were fed with high-fat diet and treated intragastrically with different doses of Huoxue Jiangzhi Recipe (compound of ginseng，panax notoginseng and rhizoma gastrodiae，named as GST) for 2 weeks.The levels of blood lipids and triglyceride (TG) in hepatic tissues were measured.Meanwhile，liver index and hepatic pathology were observed.The optimized dosage of Huoxue Jiangzhi Recipe was determined by the experiments.The mice were divided into normal control group (NC group，fed with normal diet) and model group (fed with highfat diet).The model mice were subdivided into 3 subgroups 12 weeks later: HF group (fed continuously with high-fat diet)，ND group (fed with normal diet)，GSL group (fed with normal diet and treated intragastrically with GSL).The mice in NC，HF and ND groups were given distilled water by gastric perfusion.Two weeks later，all mice were killed，and blood was collected for measuring serum total cholesterol (TC)，TG，high-density lipoprotein-cholesterol (HDL-C)，low-density lipoprotein-cholesterol (LDL-C) contents，hepatic TC，TG，malondialdehyde (MDA) levels and superoxide dismutase (SOD) activity were detected.Moreover，liver index and hepatic pathology were also observed.The mRNA expression of peroxisome proliferator-activated receptor alpha (PPARα) and cytochrome-P450 2E1 (CYP2E1) in the liver was examined by RT-PCR.RESULTS: GST significantly decreased serum lipid，hepatic lipid and MDA levels and elevated SOD activi-ty.Furthermore，GST markedly reduced liver index，improved hepatic adipose infiltration，increased PPARα mRNA expression and inhibited CYP2E1 mRNA expression.CONCLUSION: GST is effective in the treatment of fatty liver in mice by up-regulating PPARα，thus reducing serum and hepatic TG levels，down-regulating CYP2E1 and inhibiting lipid peroxidation.

［KEY WORDS］Fatty liver; Huoxue Jiangzhi recipe; Triglyceride; Lipid peroxidation

脂肪肝是由一種或者多種原因引發(fā)的以肝臟脂類物質(zhì)，主要是甘油三酯(triglyceride，TG)蓄積為病變特征的肝臟疾病。隨著生活習(xí)慣和飲食結(jié)構(gòu)的改變，檢測(cè)手段的進(jìn)步，脂肪肝的發(fā)病率和檢出率日漸增多，發(fā)病年齡呈現(xiàn)年輕化趨勢(shì)。并且脂肪肝可在較短期內(nèi)發(fā)展為不可逆的肝損害［1］。

西醫(yī)治療學(xué)方面迄今為止，臨床上尚無滿意治療脂肪肝的藥物。近年來有關(guān)運(yùn)用中醫(yī)藥治療脂肪肝的報(bào)道逐漸增多，眾多學(xué)者均認(rèn)為脂肪肝是肝失疏泄、脾失健運(yùn)、濕熱內(nèi)蘊(yùn)、痰濁郁結(jié)、瘀血阻滯而最終形成濕痰瘀阻互結(jié)，痹阻肝臟脈絡(luò)而形成脂肪肝?；谀壳暗难芯口厔?shì)，尋找更有效治療脂肪肝的中藥，并探討其具體作用靶點(diǎn)及作用機(jī)制是一項(xiàng)十分有意義和有應(yīng)用前景的研究。根據(jù)中藥理論，我們自擬了具有活血降脂的中藥復(fù)方(由人參、三七、天麻組成，命名為GST)，并采用小鼠高脂性脂肪肝模型，探討該中藥復(fù)方治療脂肪肝的作用和機(jī)制，為臨床尋找有效防治脂肪肝的藥物提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

材料和方法

1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康昆明小鼠101只，SPF級(jí)，雄性，體重18～22 g，由廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2材料人參、三七、天麻的中藥免煎顆粒劑購(gòu)自三九醫(yī)藥股份有限公司;膽酸鈉(杭州微生物試劑有限公司) ;膽固醇(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司) ;丙硫氧嘧啶(廣東華南藥業(yè)有限公司) ;豬油(廣州市加益食品有限公司) ;異丙醇(天津市化學(xué)試劑一廠) ;超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、丙二醛(malondialdehyde，MDA)及考馬斯亮藍(lán)蛋白測(cè)定試劑盒購(gòu)自南京建成生物公司; Trizol(Invitrogen) ; dNTP和Oligo(TaKaRa) ; Taq酶(上海申能博彩公司) ; RNAsin和M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶(Promega)。

2中藥GST防治小鼠脂肪肝最佳劑量的篩選

2.1高脂飼料配制用2%膽固醇、10%豬油、0.2%丙硫氧嘧啶、0.5%膽酸鈉配制，其余為基礎(chǔ)飼料。

2.2實(shí)驗(yàn)分組將中藥免煎顆粒劑溶于雙蒸水，配成高劑量(人參、三七、天麻終濃度均為130 g/L)、中劑量(人參、三七、天麻終濃度均為65 g/L)及低劑量(人參、三七、天麻終濃度均為32.5 g/L) 3種濃度的中藥GST溶液。將50只小鼠隨機(jī)分為5組，(1)正常對(duì)照(normal control，NC)組:喂基礎(chǔ)飼料，每天用蒸餾水灌胃(0.1 mL/10 g) ; (2)高脂(high-fat diet，HF)組:喂高脂飼料，每天用蒸餾水灌胃(0.1 mL/10 g) ; (3) GST低劑量(low-dose)組:喂高脂飼料，每天用低劑量GST溶液灌胃; (4) GST中劑量(mediandose)組:喂高脂飼料，每天用中劑量GST溶液灌胃; (5) GST高劑量(high-dose)組:喂高脂飼料，每天用高劑量GST溶液灌胃，中藥組灌胃量均為0.1 mL/10 g;各組連續(xù)處理2周。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，所有動(dòng)物禁食12 h，稱體重，摘眼球取血，用于測(cè)血脂含量。取血后迅速剖腹，將完整的肝臟取出，濾紙吸干表面水分后稱重。

2.3觀察指標(biāo)及測(cè)定方法(1)肝指數(shù):稱肝重，肝指數(shù)=肝濕重/體重×100%; (2)血脂測(cè)定:全自動(dòng)生化分析儀測(cè)血清總膽固醇(total cholesterol，TC)、甘油三酯(triglyceride，TG)、高密度脂蛋白膽固醇(high-density lipoprotein-cholesterol，HDL-C)和低密度脂蛋白膽固醇(low-density lipoprotein-cholesterol，LDL-C)含量; (3)肝脂測(cè)定:取肝組織100 mg，按1∶9加異丙醇，在冰水中制成10%勻漿，提取上清液，全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定TG、TC含量; (4)肝組織形態(tài)學(xué)觀察:分別從對(duì)照組和高脂組肝左、中、右葉相同部位各取1塊肝組織進(jìn)行HE染色。

3中藥GST對(duì)小鼠脂肪肝的治療作用

3.1模型建立及實(shí)驗(yàn)分組51只小鼠，實(shí)驗(yàn)前小鼠自由飲水進(jìn)食，在實(shí)驗(yàn)環(huán)境中適應(yīng)6 d，隨機(jī)分為2組，NC組12只，喂基礎(chǔ)飼料;模型組39只，喂高脂飼料。12周后將39只模型小鼠隨機(jī)分為3組:高脂(high-fat diet，HF)組12只;正常飲食(normal diet，ND)組13只;中藥GST組14只;用GST中劑量，按0.1 mL/10 g體重灌胃，其余各組以同等容積蒸餾水灌胃。高脂組繼續(xù)喂高脂飼料，其余各組均喂基礎(chǔ)飼料飼養(yǎng)，連續(xù)2周。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，所有動(dòng)物禁食12 h，稱體重，摘眼球取血。取血后迅速剖腹，將完整的肝臟取出，濾紙吸干表面水分后稱重。

3.2 SOD活性、MDA含量的測(cè)定稱取適量肝組織，加生理鹽水，在冰水中制成10%勻漿，提取上清液，按試劑盒說明檢測(cè)SOD活性及MDA水平;考馬斯亮藍(lán)法測(cè)肝組織蛋白含量。

3.3細(xì)胞色素P450 2E1 (cytochrome-P450 2E1，CYP2E1)及過氧化物酶體增殖物激活受體α(peroxisome proliferator-activated receptor α，PPARα) mRNA表達(dá)檢測(cè)取適量肝組織，加入TRIzol裂解液，提取總RNA。引物由上海生物工程公司合成，CYP2E1 及PPARα引物序列見表1。PCR反應(yīng)條件為: 95℃2 min; 94℃30 s，55℃30 s，72℃40 s，30個(gè)循環(huán); 72℃10 min。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳，用全自動(dòng)凝膠數(shù)碼成像及分析儀進(jìn)行分析，計(jì)算CYP2E1、PPARα mRNA與GAPDH mRNA條帶的相對(duì)吸光度(A)值。

表1　引物序列Table 1.Sequences of the primers

4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

使用SPSS 13.0對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析和處理，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，多組間比較采用單因素方差分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

1 GST對(duì)小鼠脂肪肝的防治作用及最佳劑量的篩選

1.1不同劑量GST對(duì)小鼠血脂的影響如表2所示，小鼠喂高脂飼料2周，HF組血清TC、HDL-C、LDL-C含量及TC/HDL-C較NC組明顯升高，雖然HDL-C含量增加，但TC/HDL-C比值也明顯升高，而TG含量與NC組比較無顯著差異;上述血脂改變符合小鼠飲食性高脂血癥的特點(diǎn)，屬于Ⅱa型高脂血癥。GST中劑量及高劑量組能顯著降低血清TG含量;但血清TC、HDL-C、LDL-C含量及TC/HDL-C比值與HF組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義; GST低劑量組血脂各項(xiàng)指標(biāo)與HF組比較無顯著差異。

表2　 GST對(duì)高脂飲食小鼠血脂的影響Table 2.The effect of GST on serum lipid in mice fed with high-fat diet (Mean±SD.n=10)

表3　 GST對(duì)高脂飲食小鼠肝指數(shù)及肝組織TC和TG水平的影響Table 3.The effect of GST on liver index and levels of hepatic TC and TG in mice fed with high-fat diet (Mean±SD.n=10)

1.2不同劑量GST對(duì)小鼠肝指數(shù)及肝脂水平的影響結(jié)果如表3所示，與NC組比較，HF組肝指數(shù)及TC、TG水平明顯升高;而GST中劑量及高劑量組肝指數(shù)明顯低于高脂組; GST低劑量組肝指數(shù)與HF組無顯著差異。HF組肝組織TC及TC水平顯著高于NC組;而GST中劑量及高劑量組肝組織TG水平明顯低于HF組; GST低劑量組肝組織TG水平與HF組無顯著差異;各用藥組肝組織TG水平與HF組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.3小鼠肝組織病理變化NC組肝細(xì)胞排列整齊; HF組出現(xiàn)明顯的肝細(xì)胞脂肪變性，以小泡性脂肪變性為主; GST低劑量組也出現(xiàn)明顯的肝細(xì)胞脂肪變性，與HF組病理改變相似; GST中劑量及高劑量組肝細(xì)胞排列較整齊，肝小葉比較清晰，僅見散在脂肪變性，脂肪變性比高脂組明顯減輕，見圖1。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，GST中劑量是防治小鼠脂肪肝的最佳劑量。

Figure 1.The pathological changes of hepatic tissues in mice with different treatments (HE staining，×400).A: NC; B: HF; C: GST (low-dose) ; D: GST (median-dose) ; E: GST (high-dose).圖1各組小鼠肝組織病理變化

2 GST對(duì)小鼠脂肪肝的治療作用及機(jī)制研究

2.1各組小鼠肝組織病理改變NC組肝細(xì)胞排列整齊; HF組出現(xiàn)明顯的肝細(xì)胞脂肪變性，部分肝細(xì)胞壞死，細(xì)胞核固縮，并有炎癥細(xì)胞浸潤(rùn);由于脂肪肝有自愈現(xiàn)象，本研究在高脂喂養(yǎng)小鼠12周建立脂肪肝模型后，給予小鼠正常飲食，ND組肝細(xì)胞出現(xiàn)大泡性脂肪變性，與HF組比較肝細(xì)胞脂肪變性程度減輕; GST組與HF和ND組比較，肝細(xì)胞脂滴減少，脂肪變性明顯改善，見圖2。

Figure 2.The pathological changes of hepatic tissues in mice with different treatments (HE staining，×400 ).圖2各組小鼠肝組織病理變化

2.2各組小鼠血脂含量的比較HF組血清TC、HDL-C、LDL-C含量及TC/HDL-C較NC組明顯升高，而TG含量與NC組比較無顯著差異; ND組血清TC含量及TC/HDL-C顯著高于NC組，HDL-C、 LDL-C及TG含量恢復(fù)至NC組水平; GST組能明顯降低血清TG含量，而其余各項(xiàng)指標(biāo)與ND組比較無顯著差異，見表4。

表4　 GST對(duì)小鼠血脂含量的影響Table 4.The effect of GST on serum lipid levels in mice(Mean±SD)

2.3各組小鼠肝指數(shù)、肝脂、SOD活性和MDA水平的比較結(jié)果如表5所示，與NC組比較，HF組肝指數(shù)及TC、TG水平明顯高于NC組; ND組肝指數(shù)及TC、TG水平也顯著高于NC組，但低于HF組; GST組與HF組和ND組比較，其肝指數(shù)和TG含量均明顯降低;而TC水平則無顯著差異。HF組肝組織SOD活性顯著低于NC組，MDA含量明顯高于NC 組; ND組SOD活性也顯著低于NC組，卻明顯高于HF組;而MDA含量高于NC組，但低于HF組; GST組與HF組和ND組比較，SOD活性顯著上升，MDA含量明顯下降。

表5　各組肝指數(shù)、肝脂、SOD活性和MDA水平的比較Table 5.Comparison of liver index，hepatic lipid，SOD activity and MDA level among different groups (Mean±SD)

2.4小鼠肝組織CYP2E1和PPARα mRNA的表達(dá)

與NC組比較，HF組肝組織CYP2E1的mRNA表達(dá)明顯升高; ND組肝組織CYP2E1的mRNA水平也高于NC組，但低于HF組; GST組與ND和HF組比較，肝組織CYP2E1的mRNA表達(dá)顯著降低。與NC組比較，HF組肝組織PPARα的mRNA表達(dá)明顯降低; ND組肝組織PPARα mRNA水平也低于NC組，但明顯高于HF組; GST組與ND和HF組比較，肝組織PPARα的mRNA表達(dá)顯著升高，見圖3。

Figure 3.The mRNA expression of CYP2E1 (A) and PPARα(B) in hepatic tissues of mice among different groups.Mean±SD.n=12～14.＊＊P＜0.01 vs NC group;△△P＜0.01 vs HF group;#P＜0.05，##P＜0.01 vs ND group.圖3各組小鼠肝組織CYP2E1和PPARα mRNA的表達(dá)

討論

高脂血癥是導(dǎo)致脂肪肝的重要因素之一，高脂血癥性脂肪肝形成主要由于進(jìn)食脂肪過多或各種原因引起脂肪代謝障礙，導(dǎo)致脂肪在肝細(xì)胞內(nèi)積聚而成［2］。目前脂肪肝的發(fā)生機(jī)制尚未徹底明確，西醫(yī)治療以降脂、護(hù)肝藥為主，由于許多降脂化學(xué)藥有損害肝臟的副作用，因而在脂肪肝的臨床治療中受到限制。中醫(yī)藥在對(duì)脂肪肝的臨床和實(shí)驗(yàn)研究方面已取得長(zhǎng)足的進(jìn)步，尋找更有效的脂肪肝治療中藥，并探討其具體作用靶點(diǎn)及作用機(jī)制是一項(xiàng)十分有意義和有應(yīng)用前景的研究。

人參為補(bǔ)益藥，主要功能是大補(bǔ)元?dú)?，滋補(bǔ)強(qiáng)壯，補(bǔ)脾益肺，生津安神，具有增強(qiáng)機(jī)體抵抗力、提高機(jī)體免疫力、抗氧自由基、降血糖和血脂等作用［3］。三七有活血化瘀，行氣止痛之功，并擴(kuò)張血管、降低血壓、降血脂、抗氧化、改善肝臟微循環(huán)、護(hù)肝等作用［4］。天麻能“主諸風(fēng)痹，久服益氣，輕身長(zhǎng)年”，中醫(yī)臨床用于治療驚風(fēng)抽搐、風(fēng)濕痹、頭痛、眩暈、胸痹、癲癇等病。有研究報(bào)道天麻具有抗氧化、抗炎作用［5］。三藥合用具有扶正固本、生津安神、消淤去脂之功效。

本實(shí)驗(yàn)采用高脂飼料飼養(yǎng)小鼠，建立小鼠高脂血癥和脂肪肝模型(高脂飼養(yǎng)2周)，HF組小鼠血清TC、LDL-C顯著升高，但血清TG含量與NC組比較無顯著差異［6］，屬于Ⅱa型高脂血癥。實(shí)驗(yàn)中我們觀察了中藥GST對(duì)小鼠脂肪肝的防治作用，并研究了GST的劑量-效應(yīng)關(guān)系。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，HF組血脂、肝脂、肝指數(shù)顯著高于NC組，肝細(xì)胞出現(xiàn)明顯的脂肪變性; GST中劑量及高劑量組可降低血清TG的含量，并降低肝組織TG含量，抑制肝指數(shù)升高，減輕肝細(xì)胞脂肪變性，具有防治脂肪肝的作用; GST低劑量組對(duì)脂肪肝無明顯改善作用; GST中劑量及高劑量組對(duì)脂肪肝的防治效果比較明顯，尤其是GST中劑量組效果較好，因此在中藥GST對(duì)小鼠脂肪肝的治療作用研究中我們采用GST中劑量。

本研究建立小鼠高脂性脂肪肝模型(高脂飼養(yǎng)12周)，發(fā)現(xiàn)HF組小鼠肝指數(shù)、肝組織TC、TG含量明顯升高，肝細(xì)胞脂肪變性程度嚴(yán)重; ND組肝指數(shù)、肝組織TC、TG含量雖然低于HF組，但仍維持在較高的水平。GST組肝指數(shù)、肝組織TG水平均較ND組顯著下降，肝病理切片顯示脂肪變性明顯改善。結(jié)果表明，小鼠長(zhǎng)期飼以高脂飼料可導(dǎo)致脂肪肝，恢復(fù)正常飼料喂養(yǎng)后，脂肪肝有一定的自然恢復(fù)，但效果不如治療組。GST可顯著降低肝組織TG水平，有效改善脂肪肝變性程度，但對(duì)肝組織TC合成影響不明顯。

高脂飲食可導(dǎo)致游離脂肪酸攝入增多和利用減少。游離脂肪酸能夠加強(qiáng)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，損傷肝細(xì)胞，其產(chǎn)物MDA等可使細(xì)胞膜的流動(dòng)性發(fā)生障礙，引起細(xì)胞功能障礙甚至細(xì)胞死亡［7］。在造成肝損傷的同時(shí)又進(jìn)一步引起自由基的釋放，形成惡性循環(huán)。本實(shí)驗(yàn)中HF組肝組織SOD活性明顯低于對(duì)照組，而MDA含量則顯著高于NC組，提示HF組氧化應(yīng)激反應(yīng)增強(qiáng)。反應(yīng)產(chǎn)物MDA增多，而抗氧化能力卻下降。ND組SOD活性也低于NC組，卻較HF組升高，MDA含量高于NC組，但低于高脂組，說明恢復(fù)正常飲食后脂質(zhì)過氧化反應(yīng)有一定的減弱。GST組與HF組和ND組比較，SOD活性顯著上升，MDA含量明顯下降，提示中藥GST能明顯抑制過氧化反應(yīng)，提高機(jī)體清除氧自由基的能力。

在非酒精性脂肪肝，患者長(zhǎng)期攝入高脂飲食，外源性脂肪吸收增加，肝臟攝取脂肪酸及其酯化作用增強(qiáng)，TG合成超過其運(yùn)轉(zhuǎn)，從而在肝內(nèi)沉積，使線粒體β氧化速度代償性增加，為脂質(zhì)過氧化提供了足夠的反應(yīng)基質(zhì)，產(chǎn)生了大量活性氧;并且高脂飲食能增加CYP2E1活性，CYP2E1使肝組織產(chǎn)生氧自由基引起脂質(zhì)過氧化損傷［8-9］;脂質(zhì)過氧化反應(yīng)干擾了肝內(nèi)脂類代謝，而脂質(zhì)沉積的增多又加重了過氧化反應(yīng)［10］。本研究證實(shí)，HF組肝組織CYP2E1的mRNA表達(dá)明顯高于NC組; ND組具有一定抑制CYP2E1mRNA表達(dá)的作用; GST可顯著降低肝組織CYP2E1的mRNA表達(dá)，從而抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，保護(hù)肝細(xì)胞。

PPARα的活化可誘導(dǎo)肝脂蛋白脂肪酶及載脂蛋白AⅠ、載脂蛋白AⅡ的表達(dá)，從而催化脂蛋白中的TG分解為游離脂肪酸以及增加TC的逆向轉(zhuǎn)運(yùn)。因此，PPARα是調(diào)節(jié)能量代謝的關(guān)鍵因素，在維持體內(nèi)脂質(zhì)代謝的動(dòng)態(tài)平衡中起樞紐作用。研究表明，PPARα缺乏可以引起肝臟TG沉積、脂類和碳水化合物代謝紊亂［8］。因此，PPARα表達(dá)受抑可使脂肪酸在肝臟氧化減少，脂蛋白合成代謝發(fā)生障礙，導(dǎo)致脂質(zhì)在肝臟沉積，從而加速脂肪肝的發(fā)生發(fā)展。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，HF組肝組織PPARα的mRNA表達(dá)明顯低于NC組;而ND組能一定程度上增加PPARα的mRNA水平; GST能增強(qiáng)PPARα的mRNA表達(dá)，發(fā)揮其調(diào)控脂質(zhì)代謝的作用，抑制肝臟脂質(zhì)沉積。

綜上所述，中藥GST具有有效防治脂肪肝的作用，其機(jī)制可能與下調(diào)CYP2E1的mRNA表達(dá)，抑制氧化應(yīng)激反應(yīng);并且增加肝組織PPARα的mRNA表達(dá)，發(fā)揮防治脂肪肝的作用。

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通訊作者△Tel: 020-85228071; E-mail: ldx@ jnu.edu.cn

*［基金項(xiàng)目］廣東省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.S201201000816)

［收稿日期］2015-01-07

［文章編號(hào)］1000-4718(2015)06-1087-06

［中圖分類號(hào)］R289.51; R363.2

［文獻(xiàn)標(biāo)志碼］A

doi:10.3969/j.issn.1000-4718.2015.06.021