邵衛(wèi)平，劉永立

(浙江大學(xué)農(nóng)業(yè)與生物技術(shù)學(xué)院，浙江杭州 310058)

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獼猴桃實(shí)生苗抗性鑒定與砧木篩選

邵衛(wèi)平，劉永立*

(浙江大學(xué)農(nóng)業(yè)與生物技術(shù)學(xué)院，浙江杭州 310058)

[目的]篩選獼猴桃抗性砧木。[方法]通過(guò)接種病菌、抗病性篩選以及CAT、POT酶活性測(cè)定篩選抗病性植株。[結(jié)果]‘徐香’實(shí)生苗2號(hào)和‘布魯諾’實(shí)生苗3號(hào)，可以作為獼猴桃抗性砧木使用。[結(jié)論]‘徐香’實(shí)生苗2號(hào)和‘布魯諾’實(shí)生苗3號(hào)將作為獼猴桃砧木加以利用，為獼猴桃的抗病栽培提供新的方法。

獼猴桃；實(shí)生苗；砧木

獼猴桃不同品種間對(duì)病害的抵抗能力不同，選育抗性品種和砧木是防治獼猴桃病害的一個(gè)重要措施。研究表明，利用獼猴桃‘金魁’抗病品種的枝條作接穗進(jìn)行嫁接繁殖、栽培，能夠有效減少潰瘍病的發(fā)生[1]。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)獼猴桃抗病品種機(jī)理方面的研究較少，且抗性機(jī)制評(píng)價(jià)不一，抗性鑒定指標(biāo)不夠完善。因此，為進(jìn)一步明確獼猴桃生理指標(biāo)與抗性的關(guān)系和篩選抗性砧木，筆者通過(guò)對(duì)‘徐香’和‘布魯諾’的實(shí)生苗擴(kuò)繁后代進(jìn)行病菌侵染、抗病性分級(jí)、篩選抗性砧木，并測(cè)定侵染前后相關(guān)生理參數(shù)的變化，評(píng)價(jià)其與不同品種獼猴桃抗性的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試材料為‘徐香’獼猴桃實(shí)生苗的13個(gè)株系和‘布魯諾’獼猴桃實(shí)生苗的13個(gè)株系，2月苗齡。病原菌為青枯假單胞桿菌，在LB培養(yǎng)基上培養(yǎng)。

1.2 病菌的侵染

選取2個(gè)品種的每個(gè)株系中長(zhǎng)勢(shì)相近的獼猴桃各3株，用109cfu/ml的病菌菌液對(duì)葉片進(jìn)行活體接種。接種方法為針刺法，用針頭分別在每株獼猴桃5片較大的葉片上扎4下。接種后把組培苗繼續(xù)放在組培室內(nèi)培養(yǎng)，溫度(25±2)℃，光周期16 h/8 h(光/暗)。觀察植株感病情況，14 d后統(tǒng)計(jì)病情指數(shù)。病情指數(shù)=∑(病葉數(shù)×病級(jí))/(接種葉片數(shù)×最高級(jí)別)×100

1.3 抗性生理參數(shù)的測(cè)定

‘徐香’和‘布魯諾’獼猴桃的各13個(gè)株系且每個(gè)株系各3株獼猴桃葉片接種病菌5 d后，摘取葉片進(jìn)行CAT、POT酶活性的測(cè)定。另取每個(gè)株系各3株長(zhǎng)勢(shì)相近的獼猴桃，不經(jīng)侵染直接測(cè)定其酶活性。CAT和POD酶液提取及酶活性測(cè)定方法參考尹燕枰等[2]和石志軍等[3]的方法，并稍作改變。

1.3.1 酶液的提取。稱量健康和染病獼猴桃葉片鮮樣0.5 g，放在預(yù)冷的研缽中，先加2 ml提取液和約0.01 g PVPP，冰浴研磨成勻漿后倒入7 ml離心管中，再續(xù)加3 ml提取液清洗研缽并倒入離心管內(nèi)，6 000 r/min 4 ℃離心15 min，上清液備用。提取液為pH 7.8的磷酸緩沖液。

1.3.2 CAT酶活性測(cè)定。先加入2 ml 50 mmol/L PBS(pH 7.0)，再加入5 ul 30%H2O2和50 ul酶液，最后再加入1 ml 50 mmol/L PBS(pH 7.0)混勻。3 ml 50 mmol/L PBS(pH 7.0)作空白調(diào)零，迅速測(cè)定OD240。每60 s讀數(shù)一次，測(cè)4 min。

CAT總活性=OD240V/(aw)

式中,V為酶液總體積(ml)，a為測(cè)定酶液體積(ml)，w為樣品鮮重(g)。

1.3.3 POD酶活性測(cè)定。 先加入2 ml POD反應(yīng)液，再加入30 ul酶液，最后加1 ml POD反應(yīng)液混勻。POD反應(yīng)液作空白調(diào)零，迅速測(cè)定OD470。每60 s讀數(shù)一次，測(cè)4 min。酶活力單位為OD470/(min·gFW)。POD反應(yīng)液：0.125 ml愈創(chuàng)木酚+0.255 ml 30%H2O2，50 mmol/L PBS(pH 7.0)定容至250 ml。

POD總活性=OD470V/(aw)

式中,V為酶液總體積(ml)，a為測(cè)定酶液體積(ml)，w為樣品鮮重(g)。

1.4 感病程度分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)

獼猴桃染病程度分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)為0級(jí)：不表現(xiàn)癥狀；1級(jí)：葉片接種處或周圍出現(xiàn)白化病斑；3級(jí)：葉片黃化并出現(xiàn)較多褐化病斑；5級(jí)：葉片大面積焦枯，少量莖部腐爛；7級(jí)：葉片脫落，莖部腐爛，甚至植株死亡。按照葉片的感病程度從低到高分為0～7級(jí)。抗性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)為：高抗(HR)，病情指數(shù)<5；抗病(R)，5≤病情指數(shù)<15；耐病(T)，15≤病情指數(shù)<35；感病(S)，35≤病情指數(shù)<55；高感(HS)，55≤病情指數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同株系的病情指數(shù)和抗性評(píng)價(jià)

由表1可知，‘徐香’實(shí)生苗的抗性強(qiáng)于‘布魯諾’，同一品種不同株系間抗病性也有差別?！煜恪?3個(gè)株系中2、6、11、13號(hào)屬于高抗株系，3、4、8、9號(hào)屬于抗病株系，1、5、7、10、12號(hào)屬于耐病株系，沒(méi)有感病和高感株系，‘徐香’實(shí)生苗總體抗性較強(qiáng)?！剪斨Z’的13個(gè)株系中沒(méi)有高抗株系，3、4、5、8號(hào)屬于抗病株系，6、10、11、12號(hào)屬于耐病株系，1、2、9、13號(hào)屬于感病株系，7號(hào)屬于高感株系，‘布魯諾’獼猴桃總體抗性較弱?！煜恪瘜?shí)生苗2、6、11、13號(hào)抗性強(qiáng)，以病情指數(shù)為標(biāo)準(zhǔn)，抗性強(qiáng)弱為2>6>13>11；而‘布魯諾’實(shí)生苗3、4、5、8號(hào)抗性強(qiáng)，以病情指數(shù)為標(biāo)準(zhǔn)，抗性強(qiáng)弱為3>4=8>5。為了提高嫁接苗的抗病能力，可以選擇“徐香”實(shí)生苗2號(hào)，“布魯諾”實(shí)生苗3號(hào)作為抗性砧木。

表1 不同株系獼猴桃的病情指數(shù)及抗性評(píng)價(jià)

2.2 CAT、POD酶活性與獼猴桃抗性的關(guān)系

由表2可知，感病后‘徐香’和‘布魯諾’的酶活性均大幅增加，2個(gè)品種感病前后CAT、POD酶活性的變化趨勢(shì)大致相同。感病前‘徐香’實(shí)生苗葉片內(nèi)的CAT、POD酶活性小于‘布魯諾’獼猴桃，感病后CAT、POD酶活性大于‘布魯諾’，且‘徐香’實(shí)生苗的CAT、POD酶活性的增加量遠(yuǎn)大于‘布魯諾’的增加量。

表2 不同獼猴桃品種感染病菌前后CAT和POD活性的變化

3 討論

該研究表明，‘徐香’實(shí)生苗的抗性強(qiáng)于‘布魯諾’，這與石志軍等[3]對(duì)離體枝條的接種試驗(yàn)結(jié)果一致。而前人的田間病害調(diào)查也證明了‘徐香’實(shí)生苗的抗性比‘布魯諾’獼猴桃的抗性強(qiáng)。因此對(duì)獼猴桃實(shí)生苗無(wú)菌苗的病菌接種可以用作研究品種間抗性，而且還能篩選出抗性砧木，提高嫁接苗的抗性。

CAT、POD能夠清除植物體內(nèi)活性氧，從而起到生物防御作用。CAT和POD酶活性與植物的抗病性有密切關(guān)系，并在煙草、黃瓜、獼猴桃等植物病害中得到驗(yàn)證，二者可以作為植物的抗性鑒定指標(biāo)來(lái)評(píng)價(jià)不同品種的抗性強(qiáng)弱。該試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，抗性強(qiáng)的健康獼猴桃實(shí)生苗其CAT、POD酶活性較小，感病后抗性強(qiáng)的獼猴桃CAT、POD酶活性大，且抗性強(qiáng)的品種酶活性的增加量遠(yuǎn)大于抗性弱的品種，這與李淼等[4]對(duì)獼猴桃侵染前后酶活性測(cè)定結(jié)果大致相同。

4 結(jié)論

為了提高嫁接苗的抗病能力，可以選擇‘徐香’實(shí)生苗2號(hào)和‘布魯諾’ 實(shí)生苗3號(hào)作為抗性砧木。CAT、POD酶活性也可以作為不同品種砧木間的抗性鑒定指標(biāo)。

[1] 陶金平，馮華，呂燕.獼猴桃潰瘍病的發(fā)生特點(diǎn)和綜合防治技術(shù)植保技術(shù)與推廣[M].北京：科學(xué)出版社，2003.

[2] 尹燕枰，董學(xué)會(huì).種子學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)[M].北京：中國(guó)林業(yè)出版社，2008：60-66.

[3] 石志軍，張慧琴，肖金平，等.不同獼猴桃品種對(duì)潰瘍病抗性的評(píng)價(jià)[J].浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2014，26(3)：752-759.

[4] 李淼，檀根甲，李瑤，等.獼猴桃品種葉片組織結(jié)構(gòu)與抗?jié)儾〉年P(guān)系[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2002，30(5)：740-742.

Selection and Inoculative Identification of Kiwifruit Resistance Rootstock

SHAO Wei-ping, LIU Yong-li*

(College of Agriculture & Biotechnology, Zhejiang University, Hangzhou, Zhejiang 310058)

[Objective] The aim was to study selection of kiwifruit rootstock with Actinidia bacterial canker resistance. [Method] Acquiring kiwifruit resistance rootstock by pathogen inoculating, resistance screening, CAT and POT activity assay was studied. [Result] No 2‘xuxiang’and No 3‘Bruno’seedlings were better resistance rootstock. [Conclusion] No 2‘xuxiang’and No 3‘Bruno’seedlings can be used in cultivation of kiwifruit disease resistance.

Kiwifruit; Seedling; Rootstock

浙江省科技廳科技攻關(guān)重大農(nóng)業(yè)項(xiàng)目“獼猴桃分子標(biāo)記輔助育種研究”(J31334)。

邵衛(wèi)平(1989- )，女，河南杞縣人，碩士研究生，研究方向：園藝植物生物技術(shù)。*通訊作者，教授，博士，碩士生導(dǎo)師，從事園藝植物生物技術(shù)研究。

2015-10-31

S 603.6

A

0517-6611(2015)35-214-01