張惠清

羊水細(xì)胞染色體核型分析在孕婦產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用分析

張惠清

目的 分析羊水細(xì)胞染色體核型分析在孕婦產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用價(jià)值。方法 選取產(chǎn)檢的孕婦40例，均為孕18～24周。在孕婦本人知情同意下，在B超介導(dǎo)情況下給予羊膜腔穿刺抽取羊水，并進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，仔細(xì)觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀況，準(zhǔn)確收獲細(xì)胞后進(jìn)行核型分析。結(jié)果 40例孕婦均成功進(jìn)行羊水穿刺細(xì)胞培養(yǎng)，成功率為100%。其中染色體核型正常36例，染色體核型異常4例；2例21-三體綜合征孕婦在確診后進(jìn)行引產(chǎn)手術(shù)終止妊娠，2例2N/4N四倍體核型孕婦接受進(jìn)一步臍帶血檢查后診斷為核型正常。28例年齡＜35歲孕婦均未檢出異常染色體核型。另外12例年齡＞35歲孕婦中檢出4例染色體核型異常。結(jié)論 目前，產(chǎn)前診斷異常胎兒必不可少的方法就是羊水細(xì)胞染色體核型分析，該診斷方法能幫助及早發(fā)現(xiàn)和診斷異常胎兒，對(duì)優(yōu)生優(yōu)育、提高我國(guó)人口素質(zhì)具有重要意義。

羊水細(xì)胞；染色體核型分析；產(chǎn)前診斷；應(yīng)用價(jià)值

染色體疾病作為一種常見遺傳病，約占遺傳性疾病的10%。這類先天性疾病不能治愈，對(duì)家庭、社會(huì)都帶來沉重負(fù)擔(dān)[1]。產(chǎn)前診斷尤其重要，自1956年羊膜腔穿刺技術(shù)的研發(fā)以來，羊水細(xì)胞染色體核型分析作為一種有效的產(chǎn)前診斷手段已被廣泛應(yīng)用于臨床產(chǎn)檢中，能有效診斷一系列染色體異常性疾病，包括染色體數(shù)量異常、染色體異位或倒位、染色體重復(fù)或缺失、染色體變異、胎兒畸形等[2]。本研究對(duì)羊水細(xì)胞染色體核型分析在產(chǎn)前診斷中的實(shí)際應(yīng)用情況進(jìn)行分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年1月～2013年12月在廣西貴港市婦幼保健院優(yōu)生遺傳科產(chǎn)檢的40例孕婦，年齡20～40歲，平均年齡（26.8±1.2）歲；孕周18～24周，平均孕周（18.5± 1.5）周。所有入組孕婦均經(jīng)本人知情同意。

1.2 研究方法 在B超引導(dǎo)下通過羊膜腔穿刺，先使用無菌注射器抽取2mL羊水棄去，再用2支無菌注射器（10mL）抽吸20mL羊水標(biāo)本，實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。在超凈臺(tái)中使用無菌離心管對(duì)羊水標(biāo)本進(jìn)行分裝，以1200r/min速度離心10min后去除上清液，保留0.5mL羊水和細(xì)胞沉淀物，混勻后分別接種于盛有2mL羊水培養(yǎng)液的斜面培養(yǎng)管中，37℃、5%CO2環(huán)境的培養(yǎng)箱中靜態(tài)培養(yǎng)6d。在顯微鏡下觀察有成堆或散在梭形細(xì)胞緊貼壁生長(zhǎng)，換液繼續(xù)培養(yǎng)，隔天觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)情況，若細(xì)胞增殖非常旺盛、分裂細(xì)胞較多時(shí)則可收獲。若細(xì)胞增殖不同步，有7～9個(gè)大克隆時(shí)即可傳代，第2天在顯微鏡下觀察帶細(xì)胞密度合適、梭形細(xì)胞胞體發(fā)亮且折光性好、細(xì)胞間連接不密，及時(shí)收獲。加入1滴秋水仙素（25μg/mL）繼續(xù)培養(yǎng)4h后收獲細(xì)胞。首先將培養(yǎng)液緩慢倒入離心管內(nèi)，滴入0.2mL左右的0.25%胰酶-EDTA消化液，再加入0.85%氯化鈉溶液至2mL，放入37℃的恒溫箱中恒溫5min，在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞脫壁后吸出液體至離心管內(nèi)，之后使用37℃預(yù)熱生理鹽水沖洗瓶壁至離心管中，以1200r/min速度離心10min，去除上清液，保留0.5mL，輕彈管底，加入1mL已經(jīng)預(yù)熱的低滲液（0.4%拘櫞酸鈉∶0.4%氯化鉀= 1∶1），低滲6min后加入10滴固定液（甲醇∶冰乙酸=3∶1）混勻，精致6min后再次以1200r/min速度離心10min，去除上清液，加入4mL固定液混勻固定25min，再次離心去除上清液，重復(fù)上一固定步驟再固定1次，離心去除上清液后觀察沉淀細(xì)胞量，加入固定液，調(diào)整滴片濃度，常規(guī)G顯帶。顯微鏡下技術(shù)分散良好的30個(gè)中期分裂相，異常核型技術(shù)50個(gè)分裂相，進(jìn)行核型分析。

2 結(jié)果

2.1 羊水培養(yǎng)與核型分析結(jié)果 40例孕婦均成功進(jìn)行羊水穿刺細(xì)胞培養(yǎng)，成功率為100%。40例孕婦細(xì)胞培養(yǎng)核型分析結(jié)果表明，36例染色體核型正常，4例染色體核型異常，其中2例21-三體綜合征孕婦在確診后進(jìn)行引產(chǎn)手術(shù)終止妊娠，2例2N/4N四倍體核型孕婦接受進(jìn)一步臍帶血檢查后診斷為核型正常。

2.2 年齡因素與染色體非整倍體 40例孕婦中28例年齡＜35歲，均未檢出異常染色體核型。另外12例年齡＞35歲孕婦中檢出4例染色體核型異常。

3 討論

新生兒出生缺陷指的是在其出生時(shí)就已經(jīng)存在的外在、內(nèi)在結(jié)構(gòu)或功能異常，先天畸形、代謝性疾病、智力障礙等都屬于出生缺陷，多數(shù)是由于遺傳或環(huán)境或兩者共同作用導(dǎo)致的，其遺傳因素中最常見的就是染色體異常[3]。研究數(shù)據(jù)表明我國(guó)每年約有10萬新生兒存在染色體異常，活產(chǎn)新生兒中染色體核型異常約為0.5%，其中唐氏綜合征發(fā)病率占0.12%～0.17%，性染色體異常發(fā)病率約占0.1%，具有產(chǎn)前診斷指征高風(fēng)險(xiǎn)孕婦妊娠胎兒染色體核型異常檢出率更是高達(dá)3.8%～7.7%[4]。有效準(zhǔn)確的產(chǎn)前診斷染色體核型異常的胎兒能及時(shí)終止妊娠，有利于優(yōu)生優(yōu)育[5]。羊水細(xì)胞染色體核型分析能起到產(chǎn)前明確診斷作用，該方法操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確性高、并發(fā)癥少，是目前最經(jīng)典的檢查染色體異常的方法。本組40例孕婦經(jīng)羊水細(xì)胞核型分析發(fā)現(xiàn)4例染色體異常，其中2例為21-三體綜合征，2例為2N/4N四倍體核型。同時(shí)研究還發(fā)現(xiàn)4例染色體檢出異常孕婦均為35歲以上的高齡孕婦。21-三體綜合征在胎兒畸形中比較常見，有研究發(fā)現(xiàn)其發(fā)病率與孕婦年齡呈正比，尤其是35歲以上孕婦發(fā)病率明顯升高[6-7]。臨床產(chǎn)檢中要注意35歲以上孕婦務(wù)必進(jìn)行羊水穿刺染色體檢查，這也是羊水穿刺、細(xì)胞培養(yǎng)的確切指征之一[8]。

綜上所述，開展產(chǎn)前診斷工作非常必要，應(yīng)建議所有孕婦在孕中期進(jìn)行產(chǎn)前篩查，普及產(chǎn)前篩查知識(shí)，提高產(chǎn)婦自身對(duì)妊娠的認(rèn)識(shí)，以期達(dá)到優(yōu)生優(yōu)育的目的。

[1] 趙欣榮，程蔚蔚，王慧，等.2635例羊膜腔穿刺產(chǎn)前診斷臨床研究[J].中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志，2009，17(9)：60．

[2] 戚其瑋，王雪倩，張紅巖，等.羊水細(xì)胞染色體在高危妊娠產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用[J].中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志，2011，28（4）：462-464．

[3] 高雪峰，邵敏杰，楊麗萍，等.羊水細(xì)胞培養(yǎng)染色體核型分析在產(chǎn)前診斷中的意義[J].中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志，2009，17(2)：46．

[4] 楊燦鋒，耿金花，王峻峰，等.羊水細(xì)胞染色體分析在產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用[J].中國(guó)婦幼保健雜志，2009，24（32）：4602-4604．

[5] 韋美德，蘇國(guó)生，趙桓，等.羊水檢查在產(chǎn)前診斷中的臨床應(yīng)用價(jià)值[J].中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志，2009，17(2)：131．

[6] 高菲菲，王酉，項(xiàng)靜英.產(chǎn)前診斷分子遺傳學(xué)方法進(jìn)展[J].同東醫(yī)藥，2010，50(40)：110.

[7] 胡美紅，劉雨生，何國(guó)平，等.羊水細(xì)胞培養(yǎng)及染色體核型分析在產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用[J].臨床輸血與檢驗(yàn),2011，13(1)：23-25.

[8] 石鑫瑋，劉海意，喬福元，等.熒光原位雜交技術(shù)及染色體核型分析在產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用價(jià)值[J].中國(guó)實(shí)用婦科與產(chǎn)科雜志，2011，27（2）：125-127．

10.3969/j.issn.1009-4393.2015.5.071

廣西 537100 廣西貴港市婦幼保健院優(yōu)生遺傳科 （張惠清）