趙慧芳,吳文龍,馬 麗,滕杰輝,姚 蓓,李維林

(江蘇省中國(guó)科學(xué)院植物研究所,江蘇南京 210014)

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基于抗氧化活性分析的藍(lán)莓多酚提取工藝

趙慧芳,吳文龍,馬 麗,滕杰輝,姚 蓓,李維林*

(江蘇省中國(guó)科學(xué)院植物研究所,江蘇南京 210014)

基于對(duì)藍(lán)莓不同極性溶劑(水、正丁醇、甲醇、70%乙醇、乙酸乙酯)提取物以及甲醇提取、大孔樹(shù)脂純化后的乙酸乙酯、正丁醇和水萃取物抗氧化活性(DPPH和ABTS)的分析測(cè)定,優(yōu)化并確定了藍(lán)莓多酚的提取工藝。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,藍(lán)莓不同溶劑提取物對(duì)DPPH、ABTS自由基具有良好的清除能力,其活性成分主要集中在大極性的70%乙醇、甲醇和正丁醇部位,經(jīng)過(guò)大孔樹(shù)脂純化后萃取得到藍(lán)莓不同極性多酚抗氧化活性強(qiáng)弱順序?yàn)?正丁醇>水>乙酸乙酯。藍(lán)莓提取物和萃取物的抗氧化能力與多酚含量有顯著的相關(guān)性,與花色苷含量無(wú)關(guān)。較大極性的提取和萃取溶劑有利于藍(lán)莓強(qiáng)效多酚的獲取。以抗氧化活性為導(dǎo)向的藍(lán)莓多酚提取工藝為:藍(lán)莓果實(shí)以含0.3%三氟乙酸的70%乙醇提取,提取液經(jīng)LS-305大孔樹(shù)脂吸附,先用0.3%三氟乙酸水溶液沖洗去雜,再用含0.3%三氟乙酸的甲醇溶液洗脫,洗脫液在40℃下減壓濃縮除去甲醇后用水溶解,以乙酸乙酯萃取去雜,再以正丁醇萃取,萃取液在60℃下減壓濃縮后冷凍干燥。

藍(lán)莓,抗氧化,多酚,花色苷

藍(lán)莓(Vacciniumspp.)為杜鵑花科越橘屬植物[1],其果實(shí)中含有豐富的糖、有機(jī)酸、氨基酸、花色苷、鞣花酸、維生素E、天然視紫質(zhì)、類(lèi)黃酮等特殊物質(zhì)[2],酸甜適口,并有清爽宜人的香氣。近年來(lái)國(guó)內(nèi)外臨床實(shí)驗(yàn)表明,藍(lán)莓多酚成分具有很強(qiáng)的抗氧化活性,能夠促進(jìn)視紅素再合成,具有改善循環(huán)、抗?jié)?、抗炎、提高機(jī)體免疫力、增強(qiáng)心臟功能、抗心血管疾病、延緩衰老、抗癌、抗突變[3-5]以及抑制細(xì)胞氧化損傷[6]、降低肝細(xì)胞脂肪積累[7]等功效。

近年來(lái),關(guān)于藍(lán)莓花色苷色素的提取方法已有研究報(bào)道,包括乙醇溶液浸提[8]和乙醇超聲提取[9],對(duì)藍(lán)莓多酚粗提物及其抗氧化活性的研究也有報(bào)道[10-11],劉翼翔等[6]進(jìn)一步對(duì)藍(lán)莓果實(shí)甲醇提取后XAD-7大孔樹(shù)脂和Sephadex LH-20葡聚糖凝膠樹(shù)脂純化、結(jié)合乙酸乙酯萃取的方法得到的不同組分多酚進(jìn)行了研究。鑒于多酚類(lèi)物質(zhì)包括花色苷色素的熱不穩(wěn)定性,在此類(lèi)物質(zhì)提取過(guò)程中,凍果破碎后直接提取的方法應(yīng)用較為廣泛,但也有人主張采用熱燙工藝處理鈍化多酚氧化酶后以防止果汁的褐變,但結(jié)果發(fā)現(xiàn)加熱的同時(shí)也造成多酚物質(zhì)的氧化及抗氧化活性的降低[12]。

超聲提取利用超聲波特有的空化現(xiàn)象以及空化中產(chǎn)生的極大壓力促進(jìn)細(xì)胞壁破裂及細(xì)胞內(nèi)有效成分的快速溶出,可以極大地提高提取效率,縮短提取時(shí)間[9]。本文在采用超聲波輔助提取的基礎(chǔ)上,比較了不同極性溶劑提取以及提取物大孔樹(shù)脂純化后再用不同極性溶劑萃取所得藍(lán)莓多酚的抗氧化活性,并以活性為導(dǎo)向確定了藍(lán)莓多酚的提取工藝,以期為藍(lán)莓多酚的開(kāi)發(fā)提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

藍(lán)莓園藍(lán)(Garden blue)品種鮮果于2012年購(gòu)于江蘇省溧水縣藍(lán)莓種植農(nóng)戶,清洗后-18℃速凍,在江蘇泰州興野食品廠加工成凍干果。DPPH(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼) Sigma公司;ABTS(2,2′-氨基-二(3-乙基-苯并噻唑啉磺酸-6)銨鹽) Sigma公司;沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)品 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;Folin-Ciocalteu’s 試劑 Sigma公司;其他試劑均為分析純。

PL-5-B型低速離心機(jī) 上海安亭科學(xué)儀器廠;KQ-100DE數(shù)控超聲波清洗儀 昆山市超聲儀器有限公司;Infinite M200型酶標(biāo)儀 TECAN公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 提取方法 藍(lán)莓粗提物:藍(lán)莓凍干果粉25g,分別以含0.3%三氟乙酸的5種溶劑(水、正丁醇、甲醇、70%乙醇、乙酸乙酯),料液比1∶5(g/mL),在30℃下超聲輔助提取(功率180W)3次,每次30min,第2、3次料液比減半。合并提取液,4500r/min離心5min,取上清,40～60℃減壓濃縮除去溶劑,浸膏冷凍干燥,得到樣品水提物(WE)、正丁醇提取物(BE)、甲醇提取物(ME)、乙醇提取物(EE)、乙酸乙酯提取物(AE)。

藍(lán)莓萃取物:藍(lán)莓凍干果粉100g,以含0.3%三氟乙酸的甲醇為溶劑,遵循上述提取步驟得到浸膏樣提取物,用500mL純凈水溶解、過(guò)濾,取300mL濾液上LS-305大孔樹(shù)脂柱(柱直徑2.5cm,流速約1.5BV/L),用0.3%三氟乙酸水溶液(約400mL)沖洗除去糖、酸等雜質(zhì),再用0.3%三氟乙酸甲醇溶液(約100mL)洗脫,收集洗脫液,40℃減壓濃縮至浸膏狀,用純凈水溶解并定容至150mL。取該樣品溶液25mL,40℃減壓濃縮至浸膏狀,冷凍干燥后得到藍(lán)莓總提取物(RP)。將其余125mL樣液依次用乙酸乙酯和正丁醇萃取。乙酸乙酯萃取3次,第1次用等體積,后2次用二分之一體積,合并萃取液,40℃減壓濃縮除去溶劑,冷凍干燥后得到藍(lán)莓乙酸乙酯萃取物(ARP);正丁醇萃取4次,第1次用等體積,后3次用二分之一體積,60℃減壓濃縮除去溶劑,冷凍干燥后得到藍(lán)莓正丁醇萃取物(BRP),剩余水部位50℃減壓濃縮除去溶劑,冷凍干燥后得到藍(lán)莓水萃取物(WRP)。

1.2.2 抗氧化活性的測(cè)定

1.2.2.1 ABTS抗氧化實(shí)驗(yàn) ABTS工作液:稱(chēng)取13.4mg ABTS,加入3930μL水溶解保存;ABTS儲(chǔ)存液:將5mL 7mmol/L ABTS和88μL 140mmol/L過(guò)硫酸鉀混合,在室溫避光條件下放置12～16h,形成ABTS儲(chǔ)備液。ABTS工作液吸光度值為0.5±0.02。取上述各種提取物,以二甲基亞砜(DMSO)溶解,配制成20mg/mL的母液。先進(jìn)行樣品抗氧化活性的粗篩,在96孔板中,分別加入樣品母液2.5μL,用無(wú)水乙醇補(bǔ)至每孔50μL,然后再加入200μL ABTS工作液,反應(yīng)體系250μL,30℃條件下振蕩1min,6min后測(cè)定其734nm下的吸光度(Ai);取50μL DMSO代替樣品溶液測(cè)得空白吸光度(AC);以200μL無(wú)水乙醇代替ABTS混合液測(cè)得樣品本底吸光度(Aj),計(jì)算樣品的清除率,清除率高于50%再進(jìn)行IC50的測(cè)定。測(cè)定IC50時(shí)每個(gè)樣品設(shè)置4個(gè)以上的濃度,每個(gè)濃度重復(fù)3次,取平均值。以VC做對(duì)照,按公式(1)計(jì)算清除率,并計(jì)算出IC50值[13]。

式(1)

1.2.2.2 DPPH抗氧化實(shí)驗(yàn) 取上述各種提取物,以DMSO溶解,配制成20mg/L母液。DPPH用無(wú)水乙醇配制成0.16mmol/L,置于棕色瓶中備用。先進(jìn)行樣品抗氧化活性的粗篩,在96孔板中分別加入樣品母液2μL,用無(wú)水乙醇補(bǔ)至100μL,再加100μL DPPH工作液,30℃下振蕩1min,10min后測(cè)定其517nm下的吸光度(Ai);取100μL無(wú)水乙醇代替樣品溶液測(cè)得空白吸光度(AC);以100μL無(wú)水乙醇代替DPPH工作液測(cè)得樣品本底吸光度(Aj),按公式(1)計(jì)算清除率,清除率高于50%再進(jìn)行IC50的測(cè)定。測(cè)定IC50時(shí)每個(gè)樣品設(shè)置4個(gè)以上的濃度,每濃度重復(fù)3次,取平均值。

1.2.3 總花色苷和總多酚含量測(cè)定

1.2.3.1 總花色苷含量測(cè)定 花色苷在pH1.0下,510nm處有最大吸收,而當(dāng)pH為4.5時(shí),花色苷轉(zhuǎn)變?yōu)闊o(wú)色查爾酮形式,在510nm處無(wú)吸收,據(jù)此可以用示差法計(jì)算溶液中的總花色苷含量[14]。取上述各種提取物,以DMSO溶解,配制成20mg/L母液。吸取2mL樣品液,分別用pH1.0[0.2mol·L-1KCl∶0.2mol·L-1HC1=25∶67(V/V)]和pH4.5[0.2mol·L-1NaAc·3H2O∶0.2mol·L-1HAc=1∶1(V/V)]的緩沖液稀釋至20mL,混勻,以2mL溶劑加18mL相應(yīng)緩沖液作空白,分別在510nm和700nm處測(cè)定吸光值,并按下式計(jì)算稀釋樣品的吸光度(A):

A=(A510-A700)pH1.0-(A510-A700)pH4.5

式(2)

然后按下式計(jì)算樣品液中花色苷色素的濃度(以矢車(chē)菊色素-3-葡萄糖苷計(jì))(C):

式(3)

果實(shí)總花色苷含量(ACY)按以下公式計(jì)算:

式(4)

其中:DF-稀釋因子,V-提取液的總體積,mL;m-取樣量,g;26900-矢車(chē)菊色素-3-葡萄糖苷的摩爾消光系數(shù);449.2-矢車(chē)菊色素-3-葡萄糖苷的摩爾分子質(zhì)量。

1.2.3.2 總多酚含量測(cè)定 標(biāo)準(zhǔn)曲線制作:準(zhǔn)確稱(chēng)取500.0mg沒(méi)食子酸,用純凈水溶解,定容至1000mL,分別移取2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、9.0、10.5、12.5、14.5mL到50mL容量瓶中,加水定容,其中沒(méi)食子酸的濃度分別為20、25、30、35、40、45、90、105、125、145mg·L-1。分別取不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液1.0mL,加入5.0mL 0.2mol·L-1Folin-Cioealteu’s試劑混合,在0.5～8min內(nèi)加入4mL 7.5%(w/v)飽和碳酸鈉溶液,充分混合。將上述混合標(biāo)準(zhǔn)溶液在25℃下避光放置2h后,在765nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光值。以吸光度Y為縱坐標(biāo),沒(méi)食子酸濃度X為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

樣品的測(cè)定:取上述各種提取物,以DMSO溶解,配制成20mg/L母液。樣品液稀釋適當(dāng)?shù)谋稊?shù)(4～8)進(jìn)行測(cè)定。吸取1.0mL待測(cè)液至10mL試管中,加入5.0mL 0.2mol·L-1的Folin-Ciocalteu’s試劑,充分混勻,在0.5～8min內(nèi)加入4mL 7.5%(w/v)飽和碳酸鈉溶液,25℃下放置2h后測(cè)定765nm下吸光度。根據(jù)回歸方程計(jì)算總多酚含量(以沒(méi)食子酸計(jì))[15-16]。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用Excel2003分析軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)與分析,并用Excel2003分析軟件繪制藍(lán)莓提取物對(duì)自由基的清除曲線。

2 結(jié)果與分析

2.1 對(duì)ABTS的清除作用

藍(lán)莓不同溶劑提取物和萃取物對(duì)ABTS自由基均有一定的清除能力(圖1、圖2)。不同溶劑提取物的ABTS自由基清除能力大小順序?yàn)?0%乙醇(EE)>甲醇(ME)>正丁醇(BE)>乙酸乙酯(AE)>水(WE),其中水提物(WE)在200～1200μg/mL的濃度范圍內(nèi)清除ABTS自由基能力隨濃度的升高而升高,IC50為837.77μg/mL,清除能力較弱,其余溶劑提取物均在較低的濃度范圍內(nèi)即具有較高的清除能力,由此認(rèn)為70%乙醇和甲醇是提取藍(lán)莓抗氧化活性成分的最優(yōu)溶劑。經(jīng)過(guò)甲醇提取、大孔樹(shù)脂純化后的藍(lán)莓總提取物(RP)清除ABTS自由基能力顯著增強(qiáng),IC50僅為純化前甲醇提取物(ME)的17%。不同溶劑萃取物中正丁醇萃取物(BRP)清除ABTS自由基能力最強(qiáng),IC50為1.41μg/mL,其次為水萃取物(WRP),乙酸乙酯萃取物(ARP)清除ABTS自由基能力稍弱,IC50為4.33μg/mL。

圖1 藍(lán)莓不同溶劑提取物對(duì)ABTS自由基的清除率Fig.1 ABTS free radical scavenging percentage of different solvent extracts from blueberry(Garden blue)

圖2 藍(lán)莓不同溶劑萃取物對(duì)ABTS自由基的清除率Fig.2 ABTS free radical scavenging percentage of liquid-liquid extracts after macroporous resin enrichment from blueberry(Garden blue)

2.2 對(duì)DPPH·的清除作用

藍(lán)莓各種提取物對(duì)DPPH自由基清除能力較弱(圖3),除甲醇提取物(ME)IC50為128.18μg/mL外,其余均未測(cè)得(表1)。經(jīng)過(guò)甲醇提取、大孔樹(shù)脂純化后的藍(lán)莓總提取物(RP)清除DPPH自由基能力顯著增強(qiáng),IC50僅為純化前甲醇提取物(ME)的27%。不同溶劑萃取物中正丁醇萃取物(BRP)的清除DPPH自由基能力最強(qiáng),IC50為18.28μg/mL,乙酸乙酯萃取物(ARP)清除能力最弱,剩余水部位(WRP)清除DPPH自由基的IC50為45.75μg/mL,介于兩者之間(表1)。

圖3 藍(lán)莓不同提取物和萃取物對(duì)DPPH自由基的清除率Fig.3 DPPH free radical scavenging percentage of different extracts from blueberry(Garden blue)

2.3 各提取物中的總花色苷和總多酚含量

標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定結(jié)果發(fā)現(xiàn)總多酚含量(以沒(méi)食子酸計(jì),Y)與吸光度(765nm,X)的回歸方程為:y=0.01089x-0.23431,R2=0.9989,表明沒(méi)食子酸濃度在20～145mg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,據(jù)此計(jì)算樣品的總多酚含量。由表2可以看出,藍(lán)莓不同溶劑粗提取物中總花色苷含量的高低順序?yàn)?0%乙醇>正丁醇>甲醇>乙酸乙酯>水,總多酚含量的高低順序?yàn)榧状?70%乙醇>乙酸乙酯>正丁醇>水。由此可見(jiàn),選用70%的乙醇、甲醇作為藍(lán)莓果實(shí)抗氧化活性物質(zhì)的提取溶劑較好。根據(jù)所得提取物干重占原料干果粉重的百分比計(jì)算得率見(jiàn)表2，從提取物得率上來(lái)看甲醇>70%乙醇，但考慮到甲醇的毒性,生產(chǎn)中可用70%乙醇作提取溶劑，本文后續(xù)實(shí)驗(yàn)則選擇了提取效率最高的甲醇作提取溶劑。

表1 藍(lán)莓提取物和萃取物對(duì)DPPH·和 ABTS的半數(shù)清除濃度Table 1 The IC50 of different extracts from blueberry(Garden blue)to scavenge DPPH and ABTS radicals

表2 藍(lán)莓不同提取物和萃取物總花色苷和總多酚含量Table 2 Total phenolics and total anthocyanins content of different extracts from blueberry(Garden blue)

經(jīng)過(guò)甲醇提取大孔樹(shù)脂純化后的樣品(RP)總花色苷含量達(dá)80.29mg/100g,較純化前提高了4.3倍,總多酚含量達(dá)617.25mg/g,較純化前提高了7.6倍。不同溶劑萃取物中,總花色苷含量高低順序?yàn)檎〈?水>乙酸乙酯,差異較大,總多酚含量的高低順序?yàn)樗?正丁醇>乙酸乙酯,差異較小。乙酸乙酯萃取物得率較低,其中的多酚含量較高,花色苷含量較低,可見(jiàn)乙酸乙酯部位主要為非花色苷類(lèi)的多酚,跟文獻(xiàn)比對(duì),這部分可能為黃酮組分[7]。正丁醇是富集花色苷及多酚的良好溶劑,得率較高。綜合分析上文ABTS和DPPH清除率數(shù)據(jù)可以發(fā)現(xiàn),乙酸乙酯、正丁醇和水部位的清除自由基能力強(qiáng)弱為正丁醇>水>乙酸乙酯(表1),同總花色苷含量的高低順序是一致的,因此可以考慮在以多酚為提取目標(biāo)的工藝中先用乙酸乙酯萃取,除去非花色苷類(lèi)雜質(zhì),然后用正丁醇作為溶劑富集藍(lán)莓花色苷及多酚,以獲得藍(lán)莓抗氧化活性較高的成分。

2.4 相關(guān)性分析

分別考察了藍(lán)莓提取物與抗氧化活性間的相關(guān)性及總多酚、總花色苷含量與抗氧化活性的相關(guān)性。結(jié)果發(fā)現(xiàn),藍(lán)莓提取物清除DPPH和ABTS自由基的IC50值成極顯著相關(guān)(表3),即提取物對(duì)兩種自由基的清除活性基本一致。

表3 藍(lán)莓提取物ABTS和DPPH抗氧化活性間的相關(guān)系數(shù)Table 3 Correlation coefficient of antioxidant activities of blueberry extracts between ABTS and DPPH

注:**表示在0.01水平上顯著相關(guān)。

由表4可見(jiàn),藍(lán)莓各提取物對(duì)DPPH自由基的清除能力與總多酚含量之間呈顯著相關(guān),即在一定范圍內(nèi),總多酚含量越高,對(duì)DPPH自由基的清除能力越強(qiáng);各提取物對(duì)DPPH自由基的清除能力與總花色苷含量無(wú)相關(guān)性;各提取物對(duì)ABTS自由基的清除能力與總多酚和總花色苷含量均沒(méi)有相關(guān)性。

表4 藍(lán)莓提取物抗氧化活性和總多酚、 總花色苷含量的相關(guān)系數(shù)Table 4 The correlation coefficient of the antioxidant activity and the content of total phenolics and total anthocyanins blueberry extracts

注:*表示在0.05水平上顯著相關(guān)。

3 討論與結(jié)論

藍(lán)莓提取物對(duì)DPPH、ABTS自由基有良好的清除能力,其活性成分主要集中在70%乙醇、甲醇和正丁醇部位。經(jīng)自由基清除能力與總多酚和總花色苷含量的相關(guān)性分析顯示,藍(lán)莓提取物的抗氧化活性與總多酚含量呈顯著相關(guān),與總花色苷含量沒(méi)有相關(guān)性。藍(lán)莓不同溶劑萃取物的抗氧化活性強(qiáng)弱順序?yàn)檎〈?水>乙酸乙酯,與蘋(píng)果多酚抗氧化活性的研究結(jié)果不同[17]。

由于藍(lán)莓果實(shí)的抗氧化活性與其中的多酚含量顯著相關(guān),所以可以以抗氧化活性為導(dǎo)向優(yōu)化藍(lán)莓多酚提取和純化的工藝。本研究中藍(lán)莓各種溶劑的粗提物中多酚含量較低,經(jīng)大孔樹(shù)脂富集后多酚含量大幅度提高。大孔樹(shù)脂富集后各種溶劑的萃取物中,多酚含量略有下降,抗氧化活性表現(xiàn)不一,其中正丁醇萃取物對(duì)DPPH自由基清除的IC50最低,為18.28μg/mL,表明抗氧化能力最強(qiáng)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)也顯示,正丁醇萃取物得率較高,其中的多酚含量也較高。綜合考慮提取成本和安全因素等,可以確定以抗氧化活性為導(dǎo)向的藍(lán)莓多酚提取工藝為:藍(lán)莓果實(shí)以含0.3%三氟乙酸的70%乙醇提取,提取液經(jīng)LS-305大孔樹(shù)脂吸附,先用0.3%三氟乙酸水溶液沖洗去雜后,再用含0.3%三氟乙酸的甲醇溶液洗脫,洗脫液在40℃下減壓濃縮除去溶劑后用水溶解,以乙酸乙酯萃取去雜,再以正丁醇萃取,萃取液在60℃下減壓濃縮,冷凍干燥。

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Separation of polyphenols from blueberry basedon antioxidative activities

ZHAO Hui-fang,WU Wen-long,MA Li,TENG Jie-hui,YAO Bei,LI Wei-lin*

(Institute of Botany,Jiangsu Province and the Chinese Academy of Sciences,Nanjing 210014,China)

Based on the determination of antioxidative activity,the extraction procedure of higher pure polyphenol from blueberry was optimized. The crude extracts were obtained by using different polar solvents(water,n-butyl alcohol,70% ethanol,methanol,ethyl acetate)from blueberry fruit. The ethyl acetate,n-butyl alcohol and water liquid-liquid extracts were orderly obtained from macroporous resin enrichment material after methanol extracted. The antioxidative activity of these extracts were measuredinvitroby the method of DPPH(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl)and ABTS(2,2′-azino-bis(3-ethylbenzthiazolne-6-sulfonic)). The results showed that all these extracts had antioxidative activity,the active components of the crude extracts mainly existed in methanol,70% ethanol and n-butanol parts. The antioxidative activities of liquid-liquid extracts after macroporous resin enrichment order by polyphenols extracted with n-butanol>those extracted with water>those extracted with ethyl acetate. The activity of these extracts was significantly correlated with total polyphenol content,not with total anthocyanin content. This showed that blueberry polyphenols with strong free radical scavenging effects can be obtain with polar solvent. The optimal blueberry polyphenol extraction procedure based on antioxidative activity was confirmed as:blueberry was extracted with 70% ethanol containing 0.3% trifluoroacetic acid,then absorbed with LS-305 macroporous resin,firstly eluted with aqueous solution congtaining 0.3% trifluoroacetic acid to remove impurities,then eluted with methanol containing 0.3% trifluoroacetic acid,the eluent was concentrated at 40℃ under reduced pressure to remove solvents and then redissolved in water,extracted with ethyl acetate to remove impurities again,the rest was extracted with n-butanol,concertrated the n-butanol part at 60℃ under reduced pressure and freeze-drying.

blueberry;antioxidant activities;polyphenol;anthocyanin

2014-05-28

趙慧芳(1984- )，女，碩士，助理研究員，主要從事果品加工研究工作。

*通訊作者:李維林(1966-)，男，博士，研究員，研究方向:經(jīng)濟(jì)植物引種馴化、資源評(píng)價(jià)和開(kāi)發(fā)利用。

江蘇省產(chǎn)學(xué)研聯(lián)合創(chuàng)新資金項(xiàng)目(BY2011198)；南京市科技發(fā)展計(jì)劃(201301060)；江蘇省農(nóng)業(yè)三新工程項(xiàng)目(SXGC[2013]347)。

TS255.1

B

1002-0306(2015)05-0251-05

10.13386/j.issn1002-0306.2015.05.044