張 婭，欒曉文

(1.云南省中醫(yī)中藥研究院，云南 昆明 650223；2.成都軍區(qū)昆明總醫(yī)院，云南 昆明 650032)

夏枯草在云南山地仿野生撫育后其迷迭香酸含量的變化

張 婭1，欒曉文2△

(1.云南省中醫(yī)中藥研究院，云南 昆明 650223；2.成都軍區(qū)昆明總醫(yī)院，云南 昆明 650032)

筆者在云南文山西疇縣山地仿野生撫育夏枯草后，針對其不同子代藥材中主要有效成分(迷迭香酸)含量的變化展開研究。方法 用HPLC，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-0.1%三氟乙酸溶液(42：58)為流動相，檢測波長為330nm，測定夏枯草種苗、仿野生撫育一年后子代、仿野生撫育二年后子代中迷迭香酸的含量，并進行對比分析。結(jié)果 經(jīng)過含量測定及對比分析可知，夏枯草種苗、仿野生撫育一年后子代、仿野生撫育二年后子代藥材內(nèi)迷迭香酸含量呈現(xiàn)增長趨勢。

夏枯草；仿野生種植；含量變化

藥用植物野生撫育是野生藥用植物采集與藥用植物栽培的有機結(jié)合，是藥用植物農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)經(jīng)營的新模式，是解決中醫(yī)藥可持續(xù)發(fā)展的正確和關(guān)鍵的決策之一。藥用植物野生撫育突破了傳統(tǒng)的野生藥用植物生產(chǎn)經(jīng)營模式，將藥用植物大田栽培和野生采集的優(yōu)勢有機地結(jié)合了起來，較好解決了當前野生藥用植物資源面臨的產(chǎn)出量不足、藥材質(zhì)量差、資源瀕危和生態(tài)環(huán)境惡化的四大難題，實現(xiàn)了生態(tài)環(huán)境保護、資源再生和綜合利用及野生藥材可持續(xù)利用的三重并舉，將開辟一個富有生命力的野生中藥材生態(tài)產(chǎn)業(yè)新模式[1]。

目前我國仍有80%左右的中藥材來自野生，保證野生中藥資源的可持續(xù)利用，保證野生藥材采集與生態(tài)環(huán)境保護的協(xié)調(diào)，實現(xiàn)人與自然的和諧共處，是中醫(yī)藥可持續(xù)發(fā)展必須解決的關(guān)鍵問題之一[2]。另一方面，如何提高栽培藥材質(zhì)量，使其與野生藥材相近，保證生產(chǎn)藥材的天然性，也倍受人們關(guān)注。

藥用植物野生撫育具有如下特征：①具有明顯的經(jīng)濟學特點。撫育的目的是增加目標藥材種群數(shù)量，給人類提供可采集利用的中藥資源，由此區(qū)別于單純的生物多樣性保護、自然保護區(qū)建設(shè)或植被恢復；②野生撫育的場地是野生藥用植物原生環(huán)境，不同于在退耕還林等人工林下栽培中藥材；③野生撫育種群數(shù)量增加可以在種群遭到破壞或沒有遭到破壞的基礎(chǔ)上進行，而植被恢復指已遭到破壞的植被重新生長和恢復；④野生撫育種群數(shù)量的增加方式有兩種，一是人工栽植，二是創(chuàng)造條件，令原有野生種群自然繁殖更新；⑤野生撫育增加了目標藥材種群的數(shù)量，改變了群落中各物種的數(shù)量組成，但群落的基本特性未改變。

目前，國內(nèi)已有數(shù)種藥用植物野生撫育取得了很好的效果，如：茅蒼術(shù)野生撫育[3]、貓爪草野生撫育[4]、寧前胡仿野生栽培[5]、川貝母野生撫育[6]、林下栽培野山參[7]、天麻仿野生栽培[8]、冬蟲夏草半野生撫育[9]、林下栽培黃連[10]等。

對野生撫育后產(chǎn)出的藥材進行與引種種苗有效成分的含量比對和對二代藥材品質(zhì)的評價方法的系統(tǒng)研究還很欠缺，從而導致了使用其產(chǎn)出的藥材沒有可靠的實驗依據(jù)，這將嚴重地制約了藥用植物野生撫育技術(shù)的應用及長遠發(fā)展。因此，需要大力的推進對這些方面的研究工作，以保證藥材及其制劑的品質(zhì)及安全性。

1 實驗材料及儀器

1.1 實驗材料 夏枯草種苗、夏枯草一年后子代、夏枯草兩年后子代：采自云南省西疇縣把獨村仿野生中藥材種植基地。

1.2 實驗儀器 BSA124S-CW電子天平(賽多利斯科學儀器北京有限公司)；ZF-I型三用紫外分析儀(上海顧村電光儀器廠)；電熱恒溫水浴鍋(北京市永光明醫(yī)療儀器廠)；CQ250超聲清洗儀(上海超聲波儀器廠)；202-1A(PCD-3000serials)烘箱(上海喬躍電子有限公司)；戴安UltiMate3000高效液相色譜儀(美國戴安公司)；Gemini5uC1811oA4.6×250mm色譜柱(美國phenomenex公司)；PhernomexC18保護柱(美國phenomenex公司)。

2 實驗方法

2.1 水分檢查

2.1.1 夏枯草(種苗)水分測定 取夏枯草供試品4.2987 g，放入干燥至恒重的扁形稱瓶(27.3498 g)，在105℃下干燥5h，取出，移至干燥器冷卻30 min，精密稱定重量(31.2753 g)，再在105℃下干燥1 h，冷卻，稱重(31.2750 g)，至連續(xù)兩次稱重的差異不超過5 mg為止。根據(jù)減失重量，計算供試品中含水量(%)。

2.1.2 夏枯草(一年后子代)水分測定 取夏枯草供試品3.9263 g，放入干燥至恒重的扁形稱瓶(27.0542 g)，在105℃下干燥5h，取出，移至干燥器冷卻30 min，精密稱定重量(30.4911 g)，再在105℃下干燥1h，冷卻，稱重(30.4894 g)，至連續(xù)兩次稱重的差異不超過5mg為止。根據(jù)減失重量，計算供試品中含水量(%)。

2.1.3 夏枯草(兩年后子代)水分測定 取夏枯草供試品3.8465 g，放入干燥至恒重的扁形稱瓶(27.6043 g)，在105℃下干燥5 h，取出，移至干燥器冷卻30 min，精密稱定重量(30.9152 g)，再在105℃下干燥1 h，冷卻，稱重(30.9135 g)，至連續(xù)兩次稱重的差異不超過5 mg為止。根據(jù)減失重量，計算供試品中含水量(%)。

2.2 含量測定 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 以十八垸基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0.1%三氟乙酸溶液(42：58)為流動相；檢測波長為330 mn。理論板數(shù)按迷迭香酸峰計算應不低于6000。

2.2.1 對照品溶液的制備 取迷迭香酸對照品適量，精密稱定，加稀乙醇制成每l mL含0.5 mg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品粉末(過二號篩)約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加人稀乙醇50 mL，超聲處理(功率90W，頻率59kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μL，注人液相色譜儀，測定，即得。

本品按干燥品計算，含迷迭香酸不得少于0.20%。

3 實驗結(jié)果

3.1 水分檢查結(jié)果

3.1.1 夏枯草(種苗)水分檢查結(jié)果 見表1。

表1 夏枯草(種苗)水分檢查情況

藥典規(guī)定水分不超過14.0%，因此符合要求。

3.1.2 夏枯草(一年后子代)水分檢查結(jié)果 見表2。

表2 夏枯草(一年后子代)水分檢查情況

藥典規(guī)定水分不超過14.0%，因此符合要求。

3.1.3 夏枯草(2年后子代)水分檢查結(jié)果 見表3。

表3 夏枯草(2年后子代)水分檢查情況

藥典規(guī)定水分不超過14.0%，因此符合要求。

3.2 HPLC含量測定結(jié)果

3.2.1 夏枯草種苗中迷迭香酸的含量測定結(jié)果 見表4。

表4 HPLC法測定迷迭香酸與夏枯草種苗數(shù)據(jù)及計算結(jié)果

3.2.2 夏枯草1年后子代中迷迭香酸的含量測定結(jié)果 見表5。

表5 HPLC法測定迷迭香酸與夏枯草(1年后子代)數(shù)據(jù)及計算結(jié)果

3.2.3 夏枯草2年后子代中迷迭香酸的含量測定結(jié)果 見表6。

表6 HPLC法測定迷迭香酸與夏枯草(2年后子代)數(shù)據(jù)及計算結(jié)果

綜上，可知：

表7 3種不同年限夏枯草中迷迭香酸含量比對

4 小結(jié)

本實驗通過采用HPLC法對夏枯草野生種苗及其仿野生種植后子代藥材的有效成分迷迭香酸進行含量比對分析?？芍悍乱吧目莶莘N苗、一年后子代、二年后子代內(nèi)迷迭香酸含量呈現(xiàn)增長趨勢。

研究目的在于通過對引種后仿野生種植的不同年限的子代藥材進行采挖，并對其進行有效成分的含量比對，以期得到含量最接近野生藥材的第二代藥材。

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張婭(1981-)，女，昭通巧家，碩士，理化檢驗師，主要從事中藥資源學、藥物分析等研究工作。E-mail：352506221@qq.com。

△通信作者：欒曉文，Email：1295048072@qq.com.

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