陜西省人民醫(yī)院檢驗(yàn)科(西安 710068)

袁 軍 陳立娟△ 解 娟 張利俠▲ 奚逢瑜 黨小軍

乙肝病毒大蛋白與HBV-DNA相關(guān)性分析

陜西省人民醫(yī)院檢驗(yàn)科(西安 710068)

袁 軍 陳立娟△解 娟 張利俠▲奚逢瑜 黨小軍

目的：探討血清乙肝病毒大蛋白(HBV-LP)表達(dá)與HBV復(fù)制的關(guān)系。方法：用ELISA法檢測299份HBV患者血清HBV-LP和HBV免疫標(biāo)志物，用FQ-PCR法檢測其HBV-DNA含量。結(jié)果：299份血清中HBV-LP陽性率68.6%，HBV-DNA陽性率72.9%，二者相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；299份血清132中份HBeAg陽性，167份HBeAg陰性；HBeAg陽性血清中HBV-LP陽性率93.1%，HBV-DNA陽性率97.7%，二者相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；HBeAg陰性血清標(biāo)本HBV-LP的陽性率49.1%，HBV-DNA陽性率53.3%，二者陽性率相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；在乙肝的不同表型模式上HBV-LP 和HBV-DNA的檢出率比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；在HBV-DNA≥106IU/ml時(shí)，HBV-LP陽性率較高(92.7%)；100例健康對照組血清標(biāo)本HBV-LP全部為陰性。 結(jié)論：HBV-LP與HBV-DNA有良好的相關(guān)性，是HBV復(fù)制的重要標(biāo)志，檢測HBV-LP對判斷HBV復(fù)制，特別是對基層單位指導(dǎo)HBeAg陰性患者的治療有重要的臨床意義。

乙型肝炎病毒大蛋白(HBV-LP)是乙型肝炎病毒包膜的構(gòu)成部分，它不僅存在于Dnae顆粒上，也存在于管狀病毒顆粒(亞病毒顆粒)上，其前S區(qū)具有激活病毒復(fù)制作用，當(dāng)血液中HBV-LP高滴度存在時(shí)，會(huì)導(dǎo)致病毒復(fù)制作用重新激活，在判定HBV復(fù)制與疾病活動(dòng)方面有重要意義。本研究旨在通過同步檢測299例不同病期乙型肝炎患者血清HBV-LP和HBV-DNA，揭示它們的相關(guān)性以探討HBV-LP對判斷乙型肝炎患者體內(nèi)HBV復(fù)制的臨床意義。

對象與方法

1 研究對象 選擇2013年1月～2014年1月之間陜西省人民醫(yī)院感染科門診及住院患者299例，其中男174例，女125例，年齡12～65歲，平均42.5歲。100例健康對照者來源于健康體檢者(乙肝二對半全陰)，年齡18～65歲，平均32.8歲。

2 方 法

2.1 HBV檢測： HBV乙肝兩對半試劑購于英創(chuàng)新科(廈門)科技有限公司，HBV-LP試劑購于北京熱景生物技術(shù)有限公司。

2.2 HBV-DNA檢測：試劑購于中山大學(xué)安達(dá)基因股份有限公司，HBV-DNA檢測值≥103IU/ml為陽性，檢測值<103IU/ml為陰性。PCR儀采用ABI公司的7500熒光定量儀，所有的操作均按照試劑和儀器操作說明檢測。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，計(jì)算資料以χ2檢驗(yàn)，以P<0．05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 HBV-LP和HBV-DNA的檢出率 在299份血清樣本中HBV-LP陽性率68.6%，HBV-DNA的陽性率72.9%，二者相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；299份樣本中132份HBeAg陽性， 167份HBeAg陰性； HBeAg陽性患者血清中HBV-LP陽性率93.1%(123/132)，HBV-DNA陽性率97.7%(129/132)，二者相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；HBeAg陰性患者血清標(biāo)本HBV-LP的陽性率49.1%(82/167)，HBV-DNA陽性率53.3%(89/167)，二者相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。100例健康對照血清標(biāo)本HBV-LP全部為陰性。

2 不同乙肝表型中HBV-LP和HBV-DNA的檢出率 HBV-LP和HBV-DNA在不同乙肝表型中的檢出率不同，血清學(xué)模式中以HBsAg、HBeAg、抗HBc三者均為陽性(大三陽)，其HBV-LP和HBV-DNA的檢出率相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；血清學(xué)模式HBsAg、抗HBe、抗HBc三者陽性(小三陽)，其HBV-LP和HBV-DNA的檢出率相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；其他表型及比例，見表1。

3 HBV-DNA不同含量時(shí)HBV-LP的陽性率 299例患者測定HBV-DNA拷貝數(shù)與HBV-LP陽性率成正相關(guān)，HBV-DNA≥106IU/ml時(shí)，HBV-LP陽性率的陽性率較高位92.7%，見表2。

表1 不同表型HBV-LP和HBV-DNA檢出率(%)

表2 HBV-DNA不同含量時(shí)HBV-LP的檢出率

討 論

目前，乙型肝炎的診斷主要以血清學(xué)指標(biāo)(兩對半)及肝功能、臨床表現(xiàn)來確定。臨床常以HBeAg和HBV-DNA水平來反映患者體內(nèi)HBV復(fù)制情況。以HBV-DNA定量檢測結(jié)果作為抗病毒療效監(jiān)測及預(yù)后判斷的主要依據(jù)[1]。研究表明，在HBeAg陰性的慢性乙肝患者中，由于病毒DNA發(fā)生了C區(qū)或BCP區(qū)的變異，導(dǎo)致了HBeAg合成障礙而出現(xiàn)假陰性。HBV-LP有Pre-S1、Pre-S2和S三部分組成，是HBV Dane顆粒和亞病毒顆粒。

本研究顯示，血清HBV-LP和HBV-DNA檢測的陽性率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，與秦峰等研究的結(jié)果一致[2]; HBV-LP陽性率與HBV-DNA的拷貝數(shù)成正相關(guān)，與羅志琴等研究結(jié)果一致[3,4]，因而HBV-LP可以作為反映病毒復(fù)制的血清學(xué)指標(biāo)。

本研究提示：無論哪種HBV 表型模式都有不同程度的HBV-LP檢出，檢出率與HBV-DNA的符合率92.2%，說明二者具有良好的一致性，能夠準(zhǔn)確反映出乙肝患者體內(nèi)病毒的復(fù)制情況[5]；其次，其陽性率隨著HBV-DNA濃度(IU/ml)的升高而增加，這一點(diǎn)不僅說明HBV-LP是HBV復(fù)制的可靠指標(biāo)，同時(shí)也證明了HBV病毒包膜的形成需要HBV-LP參與的理論；再次，HBeAg陰性患者血清標(biāo)本HBV-LP的陽性率高達(dá)42.1%，表明檢測HBV-LP有助于患者體內(nèi)HBV復(fù)制程度的判定，特別對于還難以開展HBV-DNA檢測的廣大基層醫(yī)療單位，通過檢測HBV-LP有助于診斷HBeAg陰性患者的治療和療效評(píng)估。本研究還顯示：HBV-LP和HBV DNA的檢出率無差異，故HBV-LP的檢出情況在一定程度上可輔助乙肝的診斷；加之酶聯(lián)免疫檢測乙肝病毒外膜大蛋白對診斷乙肝，具有操作簡單、結(jié)果可靠、快捷方便、具有較高的臨床價(jià)值等優(yōu)點(diǎn)，適合在各級(jí)醫(yī)院推廣。

[1] 中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì). 慢性乙型肝炎防治指南[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，2005:7-8.

[2] 秦 峰，黃旭東. 乙肝患者血清中乙肝病毒大蛋白含量及其與病毒復(fù)制的關(guān)系[J].常州實(shí)用醫(yī)學(xué)，2011，27(6):353.

[3] 羅志勤，周 欣，樂愛平，等.乙肝病毒大蛋白與Hbeag、HBV-DNA相關(guān)性的臨床意義[J].江西醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)，2006，24(6):512.

[4] 王連躍，張 岱，葛顏文，等.血清乙型肝炎病毒大蛋白檢測及其臨床意義[J].中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志，2010，24(5):349-351.

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(收稿：2015-03-20)

Correlation analysis of Hepatitis B virus large proteins and HBV - DNA Department of Clinical Laboratory，Shaanxi Provincial People’s Hospital

(Xi’an 710068)

Yuan Jun Chen Lijuan Xie Juan et al

Objective: To study the serum hepatitis b virus large protein (HBV - LP) expression and the relationship between HBV replication.Methods: Enzyme linked immunosorbent test (ELISA) method for detecting the specimens of 299 patients with HBV serum HBV - LP and HBV immune markers， at the same time by fluorescence quantitative PCR (FQ - PCR) method to detect HBV - DNA content. Results: In 299 serum samples of HBV - LP positive rate was 68.6%， the HBV - DNA positive rate was 72.9%， the positive rate compared with no statistical difference，299 serum samples from 132 HBeAg positive， 167 HBeAg negative;HBV - LP in HBeAg positive serum samples the positive rate of 93.1%， HBV DNA - the positive rate of 97.7%， the positive rate compared with no statistical difference.HBeAg negative serum specimens - LP HBV positive rate 49.1%， HBV - DNA positive rate of 53.3%， the positive rate compared with no statistical difference.In different phenotypes of the hepatitis B mode of HBV - LP and HBV - DNA detection rate had no statistical difference;In HBV - DNA acuity 106IU/ml， HBV - LP higher positive rate was 92.7%;100 cases of healthy controls - LP all negative for HBV serum specimen. Conclusion: HBV - LP had good correlation with HBV - DNA， is the important symbol of HBV replication， detection of HBV - LP to determine HBV replication， especially for grass-roots unit to guide the treatment of HBe Ag negative patients has important clinical significance.

Hepatitis Bviruis HBN-DNA Vorus replication

乙肝肝炎病毒 HBN-DNA 病毒復(fù)制

R575.1

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2015.12.011

△內(nèi)蒙古自治區(qū)赤峰市敖漢旗醫(yī)院

▲通訊作者