楊秦雁 李 博

陜西省中醫(yī)醫(yī)院(西安 710003)

飛天蜈蚣七透皮貼劑的藥效學(xué)研究

楊秦雁 李 博

陜西省中醫(yī)醫(yī)院(西安 710003)

目的：研究飛天蜈蚣七透皮貼劑的藥效作用。方法：通過熱板法和扭體法考察飛天蜈蚣七透皮貼劑的鎮(zhèn)痛作用；通過醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性試驗(yàn)、二甲苯所致小鼠耳廓腫脹抑制試驗(yàn)和大鼠棉球肉芽腫試驗(yàn)考察飛天蜈蚣七透皮貼劑的抗炎作用。結(jié)果：飛天蜈蚣七透皮貼劑可以明顯降低熱板和醋酸所致的小鼠疼痛感，改善醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性，顯著抑制小鼠耳腫脹和大鼠棉球肉芽腫。結(jié)論：本研究所使用的飛天蜈蚣七透皮貼劑具有良好的抗炎鎮(zhèn)痛作用。

飛天蜈蚣七(Aralia Chinensis L.)，著名的“太白七藥”之一，是五加科楤木屬(Aralia)植物太白楤木的根皮。資源主要分布在秦嶺、巴山各縣山區(qū)，因其小枝密布黃棕色的針刺，形象蜈蚣飛天而得名[1-2]，具有祛風(fēng)除濕、利尿消腫、活血止痛、疏肝解郁、溫中和胃的功效，主要用于治療風(fēng)濕，跌打損傷，肝炎，癰，民間還可治療兒童、咳嗽等[3-5]。本研究使用飛天蜈蚣七正丁醇極性部位提取物，采用現(xiàn)代制劑技術(shù)研發(fā)獲得可用于鎮(zhèn)痛抗炎的新型透皮給藥制劑—飛天蜈蚣七透皮貼劑。透皮給藥系統(tǒng)(Transdermal drug delivery system, TDDS)是一種經(jīng)皮給藥方式，將含藥貼劑敷貼于皮膚之上，藥物以一定的速度滲透入皮膚，然后經(jīng)由毛細(xì)血管吸收從而進(jìn)入體循環(huán)發(fā)揮全身或局部的治療作用[6]。TDDS可以控制藥物作用時(shí)間和作用強(qiáng)度，減少給藥頻率，保證最佳血藥濃度，并且可以避免口服給藥造成的藥效降低和不良反應(yīng)，比如肝臟的“首過效應(yīng)”和胃腸道的破壞[7]。同時(shí)，透皮給藥還可以提高患者的依從性。在前期研究中，本課題組已經(jīng)對(duì)飛天蜈蚣七提取物的活性進(jìn)行了考察，發(fā)現(xiàn)其正丁醇提取物有明顯的抗炎鎮(zhèn)痛作用。本實(shí)驗(yàn)旨在制備飛天蜈蚣七透皮貼劑，并對(duì)其鎮(zhèn)痛、抗炎等藥理作用進(jìn)行了研究，以期為飛天蜈蚣七藥材的開發(fā)利用提供依據(jù)。

1 儀器與試藥 1.1 飛天蜈蚣七透皮貼劑 取聚丙烯酸酯作為骨架材料及膠粘劑，用70%甲醇溶解，加入處方量的粘膠增塑劑葵二酸二丁酯、交聯(lián)劑丁二酸、增粘劑聚乙二醇400，促透劑氮酮，混合均勻，60℃水浴振蕩2h，加入飛天蜈蚣七提取物，水浴振蕩至混勻，趁熱將含藥壓敏膠涂布于防粘層，置于60℃烘箱中，揮去有機(jī)溶劑，覆蓋上背襯層，切割成合適的大小，密閉，封裝即得。阿司匹林腸溶片(批號(hào):130209)；二甲苯(99% )；乙酸(99.5%)；伊文思藍(lán)(99% )；HH-4數(shù)顯恒溫?zé)岚逅″?國(guó)華電器有限公司)；AUY200電子天平(日本島津株式會(huì)社)；722型分光光度計(jì)(上海精密科學(xué)儀器有限公司)；8mm打孔器。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 Wistar種大鼠，雌雄兼用，280±20g；昆明種小鼠，雌雄兼用，20±2g，均購于第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心；動(dòng)物合格證號(hào)：陜動(dòng)準(zhǔn)字第01號(hào)。

2 方 法 2.1 小鼠熱板致痛試驗(yàn)[8]選取昆明種小鼠，體重為20±2g，雌性，將小鼠提前3d放置在實(shí)驗(yàn)環(huán)境中。對(duì)雌性昆明種小鼠進(jìn)行篩選，將小鼠放入55±0.5℃)水浴熱板上，小鼠痛閾值需處于5～30s之間的范圍，否則即舍棄。篩選后可供實(shí)驗(yàn)用小鼠60只。將小鼠隨機(jī)分為6組，即空白對(duì)照組、空白基質(zhì)組、陽性藥對(duì)照組(阿司匹林0.2g/kg)、飛天蜈蚣七透皮貼劑高、中、低劑量組(分別為10、5、2.5 g/kg)。給藥前1d，小鼠腹部褪毛，將藥物貼于小鼠腹部褪毛處，以不致敏膠布固定，每天給藥1次，每次貼敷1 h?？瞻讓?duì)照組和陽性對(duì)照組小鼠灌胃給藥。連續(xù)給藥7d，于第七天給藥后的0.5h，1h，2h，4 h對(duì)各組小鼠痛閾值進(jìn)行測(cè)定。

2.2 小鼠醋酸致痛試驗(yàn)[8]選取昆明種小鼠60只，雌雄均用，并且數(shù)量各半，小鼠的分組及給藥方法同“2.1”項(xiàng)，連續(xù)給藥7d，末次給藥后 1h，對(duì)小鼠腹腔注射0.8%乙酸溶液，給藥量按0.1mL/10g體重，記錄小鼠在15min內(nèi)出現(xiàn)扭體反應(yīng)的次數(shù)和出現(xiàn)扭體反應(yīng)之前的潛伏時(shí)間，并計(jì)算各組用藥對(duì)小鼠扭體的抑制百分率。抑制率(%)=(1-給藥組扭體反應(yīng)次數(shù)/空白對(duì)照組扭體反應(yīng)次數(shù))×100%

2.3 小鼠醋酸致腹腔毛細(xì)血管通透性實(shí)驗(yàn)[9]選取昆明種小鼠60只，雌雄均用，并且數(shù)量各半，小鼠的分組及給藥方法同“2.1”項(xiàng)，連續(xù)給藥7d，末次給藥后 1h，對(duì)小鼠進(jìn)行1%伊文斯蘭溶液靜脈注射，給藥量為0.1mL/10g體重量，同時(shí)對(duì)小鼠進(jìn)行0.6%醋酸溶液腹腔注射，每只小鼠注射0.2mL，注射后20min處死小鼠，用5mL的生理鹽水對(duì)小鼠腹腔進(jìn)行沖洗，收集沖洗液并離心，3000 rpm/min離心15 min，取離心后的上清液，在590 nm處測(cè)定其吸光度。

2.4 小鼠耳腫脹抑制實(shí)驗(yàn)[9]選取昆明種小鼠60只，雌雄均用，并且數(shù)量各半，小鼠的分組及給藥方法同“2.1”項(xiàng)，連續(xù)給藥7d，末次給藥1h后，于小鼠右耳上均勻的涂二甲苯，每只用藥0.05mL，致炎15min后，將小鼠脫頸椎處死，用打孔器沖下左右耳廊，直徑為8mm，分別將小鼠左右耳廊在電子天平上進(jìn)行稱重，計(jì)算各組用藥對(duì)小鼠耳腫脹的抑制率。抑制率=(空白模型組平均腫脹度-給藥組平均腫脹度)/空白模型組平均腫脹度×100%

2.5 大鼠棉球肉芽腫試驗(yàn)[10]取雄性Wistar種大鼠60只，體重為280±20g，大鼠分組和用藥劑量同“2.1”項(xiàng)，乙醚淺麻醉，將已滅菌并稱重的10mg 左右的棉球植入大鼠右側(cè)腋窩下，縫合，于手術(shù)當(dāng)日給藥，給藥前1h，大鼠腹部褪毛。連續(xù)給藥 7天，最后一次給藥 1h后處死大鼠，將棉球取出，在 60℃烘箱中干燥至衡重。對(duì)棉球進(jìn)行稱重，所得重量減去實(shí)驗(yàn)前棉球重量即得肉芽腫的重量，計(jì)算各組用藥對(duì)增生的抑制率。

增生抑制率=(空白對(duì)照組肉芽平均重-給藥組肉芽平均重)/空白對(duì)照組肉芽平均重×100%

2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 試驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析(One-Way ANOVA)和組間t檢驗(yàn)。

3 結(jié) 果 3.1 熱板刺激所致小鼠疼痛反應(yīng)的作用 飛天蜈蚣七貼劑各劑量組與空白對(duì)照組和空白基質(zhì)組相比，均能明顯增加小鼠的痛閾值。0.5h時(shí)飛天蜈蚣七貼劑對(duì)小鼠痛閾值有一定延長(zhǎng)，但是與陽性對(duì)照藥阿司匹林組相比，效果略差。在給藥1h，2h時(shí)，與空白對(duì)照組相比，高、中劑量組均能延長(zhǎng)小鼠的痛閾值，且延長(zhǎng)效果顯著(P<0.05)，且有一定的量效關(guān)系。隨著時(shí)間的推移，藥物的作用有減弱的趨勢(shì)(結(jié)果見表1)。結(jié)果說明飛天蜈蚣七透皮貼劑具有明顯的鎮(zhèn)痛作用。

表1 熱板刺激所致小鼠疼痛反應(yīng)作用(n=10)

3.2 醋酸致痛小鼠的鎮(zhèn)痛作用 飛天蜈蚣七透皮貼劑可有效增長(zhǎng)小鼠扭體潛伏期，減少扭體次數(shù)。給藥組的扭體潛伏期有明顯的延長(zhǎng)，且高、中劑量組的扭體抑制率分別達(dá)到了51.5%和49.0%，與陽性藥阿司匹林組(50.0%)相當(dāng)；說明與空白對(duì)照組比較，飛天蜈蚣七透皮貼劑有顯著的鎮(zhèn)痛作用(P<0.05)，且存在一定的量效關(guān)系，結(jié)果見表2。

表2 醋酸致痛小鼠的鎮(zhèn)痛作用(n=10)

3.3 對(duì)腹腔注射醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響 飛天蜈蚣七透皮貼劑在高、中、低劑量下均能降低小鼠毛細(xì)血管通透性，與對(duì)照組相比作用顯著(P<0.05)，與陽性對(duì)照藥阿司匹林相比作用相當(dāng)。這表明飛天蜈蚣七透皮貼劑可以減少炎性介質(zhì)的滲出，具有顯著的抗炎作用，結(jié)果見表3。

表3 小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響(n=10)

3.4 對(duì)小鼠耳腫脹和大鼠棉球肉芽腫的抑制作用 飛天蜈蚣七透皮貼劑在高、中、低劑量下均能對(duì)小鼠耳腫脹發(fā)揮明顯的抑制作用，并且與對(duì)照組相比，抑制作用顯著(P<0.05)，高劑量組對(duì)小鼠耳腫脹的抑制作用(61.0%)要大于陽性對(duì)照藥阿司匹林組(53.5%)，中劑量組、低劑量組對(duì)小鼠耳腫脹的抑制作用則于陽性對(duì)照藥阿司匹林組相當(dāng)。這表明飛天蜈蚣七透皮貼劑能顯著抑制由二甲苯致炎而引起的小鼠耳腫脹，具有良好的抗炎活性。結(jié)果見表4。與空白對(duì)照組相比，飛天蜈蚣七透皮貼劑在高、中、低劑量下均能對(duì)大鼠棉球肉芽腫發(fā)揮抑制作用，且該抑制作用顯著(P<0.05)。空白對(duì)照組和空白基質(zhì)組大鼠肉芽組織增生較明顯，并且在對(duì)大鼠肉芽組織進(jìn)行剝離時(shí)，在該組織周圍或內(nèi)部可以觀察到有大量炎性液滲出。飛天蜈蚣七透皮貼劑各劑量和陽性對(duì)照藥阿司匹林組大鼠肉芽組織周圍或內(nèi)部炎性滲出液較少。這進(jìn)一步表明飛天蜈蚣七透皮貼劑有明顯的抗炎作用，結(jié)果見表4。

表4 小鼠耳腫脹和大鼠棉球肉芽腫的

4 討 論 目前，透皮給藥系統(tǒng)(TDDS)由于其獨(dú)特優(yōu)勢(shì)已成為藥物制劑研究開發(fā)的新熱點(diǎn)，我國(guó)中藥資源豐富，并且中藥具有毒副作用小的優(yōu)點(diǎn)，因此成為了TDDS研究的一個(gè)重要領(lǐng)域。但是，在臨床上使用的中藥大多數(shù)為復(fù)方制劑，中藥成分較為復(fù)雜，給中藥經(jīng)皮給藥新制劑的研究與開發(fā)帶來許多問題。本研究將中藥飛天蜈蚣七中的有效成分進(jìn)行提取分離，使用飛天蜈蚣七提取物作為透皮貼劑的主要成分來制備中藥透皮貼劑，保持了飛天蜈蚣七的療效,藥效學(xué)試驗(yàn)表明制備的透皮貼劑具有明顯的鎮(zhèn)痛抗炎作用，且其抗炎鎮(zhèn)痛活性大小與劑量正相關(guān)。本試驗(yàn)的藥效學(xué)研究為飛天蜈蚣七藥材的開發(fā)應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)，同時(shí)也為其進(jìn)一步應(yīng)用于臨床提供理論依據(jù)。但對(duì)于其抗炎鎮(zhèn)痛的機(jī)理探討，尚有待于進(jìn)一步研究。

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(收稿2015-08-20；修回2015-09-30)

藥效學(xué) @飛天蜈蚣七透皮

R282

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2015.12.057