劉 健 萬基偉 高 婷 李銀虹

天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院針灸研究所(天津300193)

·實驗研究·

針刺對自發(fā)性高血壓大鼠血壓和抗氧化酶SOD、GSH-PX的影響*

劉 健△萬基偉▲高 婷▲李銀虹▲

天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院針灸研究所(天津300193)

目的：觀察針刺對自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)血壓的影響，從抗氧化酶角度探討針刺降壓機制。方法：將SHR隨機分為針刺組、模型組，以京都Wistar大鼠(WKY)作為血壓正常的對照組。針刺組取雙側(cè)人迎穴，施以捻轉(zhuǎn)手法，捻轉(zhuǎn)頻率為120～160次/min，行針1min，每日針刺1次；模型組和正常組進行與針刺組相同時間、相同程度的捉抓。每天針刺前后測量收縮壓和舒張壓。針刺20d后，取胸主動脈，用黃嘌呤氧化酶比色法測定SOD活性，化學(xué)比色法測定GSH-PX活性。結(jié)果：針刺20d后SHR收縮壓和舒張壓均較針刺前降低，且均低于模型組。針刺組SOD和GSH-PX活性較模型組均有升高的趨勢。結(jié)論：針刺可降低SHR血壓，其機制可能與提高SOD和GSH-PX活性，從而提高機體抗氧化能力有關(guān)。

高血壓病是全球范圍的重大公共衛(wèi)生問題。各種降壓藥物發(fā)展很快，但常存在不同程度的副作用，且都有各自的適應(yīng)證和禁忌證。我們前期研究已證實了針刺降壓的有效性[1]。氧化應(yīng)激在高血壓的病因?qū)W中起重要作用[2]。Harrison對氧化應(yīng)激與高血壓提出了新的概念：認(rèn)為氧化應(yīng)激對高血壓的發(fā)生發(fā)展，其相應(yīng)的靶點是血管損害[3]。本研究觀察針刺人迎穴對自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)血壓變化的影響，通過對比SHR大鼠胸主動脈抗氧化系統(tǒng)中的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)活性的變化，研究針刺是否可以通過激發(fā)大鼠體內(nèi)抗氧化應(yīng)激系統(tǒng)從而達(dá)到調(diào)控血壓的目的。

1 材料與方法

1.1 試劑 超氧化物歧化酶(SOD)測試盒(購自南京建成生物工程研究所)、谷胱甘肽過氧化酶(GSH-PX)測試盒(購自南京建成生物工程研究所)、BCA蛋白定量測試盒(購自武漢博士德生物公司)、冰乙酸、生理鹽水等。

1.2 儀器 智能無創(chuàng)鼠尾動脈血壓測量儀(日本軟隆BP-98A)、紫外分光光度計(日本島津UV2501)。

1.3 實驗動物及分組 雄性自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)20只，京都Wistar大鼠(WKY)10只，16周齡，體重190-240g，由北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司提供。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，將20只SHR大鼠(收縮壓≥180mmHg)采用Excel工作表自動生成的隨機數(shù)字表隨機分為針刺組和模型組，每組10只。將10只WKY大鼠作為血壓正常的正常組。

1.4 穴位選取及針刺方法 選取“人迎”為針刺穴位。根據(jù)人和大鼠解剖特點和人迎穴定位特點，以中國針灸學(xué)會實驗針灸研究會制訂的“動物針灸穴位圖譜”作為參考，確定大鼠人迎穴定位：頸部三角區(qū)內(nèi)，當(dāng)胸骨舌骨肌與胸鎖乳突肌上緣交點，約當(dāng)頸總動脈分叉處，體表可觸及搏動，當(dāng)直刺時可見針柄隨動脈搏動而上下振動。固定大鼠，暴露雙側(cè)頸部人迎穴部位，選用華佗牌0.3mm×40mm毫針直刺人迎穴，深度2～3mm，見針柄隨動脈搏動而上下振動，為刺中穴位。施以捻轉(zhuǎn)手法，捻轉(zhuǎn)頻率為120～160次/min，行針1min，以節(jié)拍器輔助，便于掌握捻轉(zhuǎn)的頻率和時間。針刺組每天上午針刺1次，每周針刺5d，休息2d，共治療4周。模型組和正常組均不針刺，與人迎組在同一時間進行相同抓取刺激。

1.5 血壓的測量 于每天針刺前，針刺后1h，用動物智能無創(chuàng)血壓測試儀測量各組大鼠的尾動脈收縮壓和舒張壓。具體使用方法：①測壓前確保動物室環(huán)境安靜、溫度適宜，打開血壓儀器系統(tǒng)預(yù)熱，壓力值設(shè)為220mmHg；②打開鼠袋，將鼠網(wǎng)放入保溫筒，再將保溫筒放入鼠袋，確保合適；③抓取大鼠，動作輕柔的將待測大鼠置于鼠袋內(nèi)，固定鼠袋，使尾巴暴露在外，將大鼠尾部穿過加壓感應(yīng)器，使加壓感應(yīng)器距尾根3～5cm處；④打開軟件，待大鼠安靜，尾動脈血管充分預(yù)熱擴張，界面顯示動態(tài)血壓波形穩(wěn)定后開始測量血壓，連續(xù)測量2次，取平均值。前后兩次血壓值波動幅度不超過10%為度。

1.6 取材和指標(biāo)檢測 各組大鼠于治療20次結(jié)束后，用10%水合氯醛按0.35mL/100g體重的劑量麻醉大鼠，迅速開胸取胸主動脈，清除周圍的結(jié)締組織，放入凍存管中-80℃保存。檢測時取出組織，勻漿，按照試劑盒說明書，用黃嘌呤氧化酶比色法測定SOD活性，化學(xué)比色發(fā)測定GSH-PX活性。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠針刺治療4周后血壓變化 ①針刺前，針刺組和模型組之間收縮壓、舒張壓均無差異(P>0.05)，說明針刺前血壓基線一致，具有可比性。②4周后，模型組收縮壓和舒張壓均升高，雖無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，但仍可提示SHR收縮壓和舒張壓有隨周齡增長而升高的趨勢。③針刺4周后，針刺組收縮壓和舒張壓均較針刺前降低(P<0.05)，且均低于模型組(P<0.05)，提示針刺具有降低SHR收縮壓和舒張壓的作用。見表1、表2。

表1 各組針刺前和針刺4周后收縮壓比較

注：△與正常組比較，P<0.05；與同組針刺前比較，◇P<0.05；▲與針刺后模型組比較，P<0.05。

表2 各組針刺前和針刺4周后舒張壓比較

注：△與正常組比較，P<0.05；與同組針刺前比較，◇P<0.05；▲與針刺后模型組比較，P<0.05。

2.2各組大鼠SOD、GSH-PX活性的變化 SHR胸主動脈中SOD活性較正常組低(P<0.05)，雖然針刺可以使其升高，但尚未顯示出統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。分析其原因，可能與樣本量少有關(guān)(n=6)。因此我們推測若擴大樣本量檢測，有可能得出針刺可提高SHR體內(nèi)SOD活性的結(jié)論。同樣，由于樣本量較少(n=6)，針刺組和模型組的GSH-PX活性有低于正常組的趨勢，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。針刺可以使其升高，但尚未顯示出統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。若擴大樣本量檢測，有可能得出針刺可提高SHR體內(nèi)GSH-PX活性的結(jié)論。見表3。

表3 各組大鼠針刺4周后胸主動脈SOD、GSH-PX活性

注：△與正常對照組比較，P<0.05。

3 討 論 人迎穴是治療高血壓的有效穴位。其位于胸鎖乳突肌的前緣頸總動脈搏動處，深面緊鄰頸動脈竇，內(nèi)有壓力感受器。當(dāng)其受刺激，反射性引起迷走神經(jīng)興奮性增高，而交感神經(jīng)緊張度降低，導(dǎo)致頸部周圍大多數(shù)血管平滑肌松弛，外周阻力減小，從而達(dá)到改善動脈血流的目的。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)證實，針刺頸動脈竇能迅速產(chǎn)生顯著的雙向調(diào)節(jié)血壓的作用[4]。國外相關(guān)研究也證實人迎穴是治療高血壓病確有療效的穴位。在美國有一項采用非藥物療法治療難治性高血壓的小規(guī)模Ⅱ期臨床試驗。試驗以脈沖形式刺激毗鄰兩側(cè)頸動脈竇的人迎穴部位，結(jié)果顯示，此方法降壓效果顯著、有助于改善心臟的結(jié)構(gòu)和功能，許多患者在血壓控制后生活質(zhì)量明顯提高[5]。

本研究發(fā)現(xiàn)，SHR的收縮壓和舒張壓有隨周齡變化而不斷升高的趨勢，通過20次針刺，可降低血壓，肯定了針刺降壓的療效。氧化應(yīng)激是高血壓發(fā)病的重要機制之一。與高血壓相關(guān)的抗氧化酶主要有SOD和GSH-PX等，它們與各種抗氧化物協(xié)同清除活性氧族(ROS)、自由基，保持細(xì)胞氧化還原的動態(tài)平衡、控制細(xì)胞信號以及防止?jié)撛诘钠茐男孕袆?，減輕靶器官氧化損傷，從而抑制氧化應(yīng)激作用，在機體的抗氧化系統(tǒng)中起著重要作用。大量臨床和實驗表明，針灸可以不同程度提高心肌缺血、冠心病、高血壓和中風(fēng)患者體內(nèi)的SOD、GSH-PX活性，抑制內(nèi)皮素大量分泌，促進NO釋放，增強機體對抗氧自由基的能力[6-7]。本研究發(fā)現(xiàn)SHR體內(nèi)的抗氧化酶SOD和GSH-PX活性較WKY相對較低，針刺后，其活性升高(雖然不具有統(tǒng)計學(xué)意義，但仍可看出升高的趨勢)，說明針刺人迎穴具有一定的提高機體抗氧化能力的作用，這也是針刺降壓的作用機制之一，為臨床針刺降壓提供了科學(xué)依據(jù)。本研究因條件所限，檢測指標(biāo)樣本量較少，以后可以擴大樣本量本研究，以期為針刺降壓提供更扎實的實驗依據(jù)。

[1] 殷 春，杜宇征.針刺人迎穴為主對原發(fā)性高血壓降壓效應(yīng)觀察[J].中國針灸,2012,32(9)：776-778.

[2] 松井宏光.氧化應(yīng)激與高血壓[J].日本醫(yī)學(xué)介紹,2006,27(12)：552-553.

[3] Wang D,Strandgaard S,Iversen J,et al.Asymmetric dimethylarginine,oxidative stress,and vascular nitric oxide synthase in essential hypertension[J].Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol,2009,296(2)：195-200

[4] 張秀桐.針灸針麻研究[M].北京：科學(xué)出版社,1986：611-614.

[5] 石學(xué)敏,申鵬飛.從針刺人迎穴降壓談針灸學(xué)的原始創(chuàng)新[J].上海針灸雜志,2010,29(2)：67 -68

[6] 劉麗英,石光霞,劉存志.針灸抗氧化作用的研究概況[J].2011，52(22)：1969-1972.

[7] 衛(wèi) 彥,寇吉友,陳 軍.針刺人迎穴對高血壓患者血清中血管活性物質(zhì)影響的研究[J].針灸臨床雜志,2010，(2)：16-18.

(收稿2015-03-16；修回2015-04-20)

The effects of acupuncturing on spontaneously hypertensive rats blood pressure and antioxidant enzymes SOD&GSH-PX

Acupuncture Institute,First Teaching Hospital of Tianjin University of TCM(Tianjin300193)

Liu Jian Wan Jiwei Gao Ting et al

Objective：To observe the effects of acupuncture on SHR blood pressure,and research the mechanisms from the perspective of antioxidant enzymes.Method：To separate the SHRs into acupuncture group and model group randomly,WKYs as normal blood pressure controlled group.To acupuncture group,acupuncture with the twirling manipulation,frequency120-160/min,lasting 1min.Model group and normal group were treated by the same crawl stimulation.The systolic pressure was measured before and after the treatment every day.After 20 days of treatment,all the rats were decapitated and got the thoracic aorta.The activity of SOD and GSH-7PX was measured by xanthine oxidase colorimetric method and chemical colorimetry.Results：After 20 days acupuncture,in acupuncture group,the both systolic and diastolic blood pressure of SHR were lower than before,and lower than model.The activity of SOD and GSH-PX in acupuncture were rising trend compared with model group.Conclusion：Acupuncture can reduce SHR systolic and diastolic blood pressure and its mechanisms may be related to improve the activity of SOD and GSH-PX,thus enhance the antioxidant capacity.

Hypertension/acupuncture therapy Animal,experiment Rats

*國家自然科學(xué)基金項目(81202738)；教育部“長江學(xué)者和創(chuàng)新團隊發(fā)展計劃”創(chuàng)新團隊資助；天津市應(yīng)用基礎(chǔ)與前沿技術(shù)研究計劃(13JCZDJC31700)；天津市衛(wèi)生局中醫(yī)中西醫(yī)結(jié)合科研項目(11036)

△國家中醫(yī)藥管理局腦病針刺療法重點研究室；國家中醫(yī)藥管理局針刺量效關(guān)系三級實驗室；天津市針灸學(xué)重點實驗室(天津300193)

▲天津中醫(yī)藥大學(xué)(天津 300193)

高血壓/針刺療法 動物，實驗 大鼠

R544.1

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2015.10.088