龍凱花 王春柳 臧巧真 唐 濤 焦文文 李 曄●

陜西中醫(yī)學(xué)院(咸陽712046)

·方藥縱橫·

穿心蓮內(nèi)酯油水分布系數(shù)和溶解度的測定*

龍凱花 王春柳△臧巧真 唐 濤 焦文文▲李 曄△●

陜西中醫(yī)學(xué)院(咸陽712046)

目的：測定穿心蓮內(nèi)酯的油水分布系數(shù)(P)和溶解度，為體內(nèi)吸收及新劑型研究提供參考。方法：采用高壓液相色譜法測定穿心蓮內(nèi)酯的濃度，以飽和法測定穿心蓮內(nèi)酯的溶解度，采用搖瓶法測定穿心蓮內(nèi)酯的油水分布數(shù)。結(jié)果：穿心蓮內(nèi)酯溶解度較大的乳化劑為Labrasol、吐溫80、RH40，助乳化劑為Transcutol HP、1,2-丙二醇、乙醇，油相為Maisine 35-1；穿心蓮內(nèi)酯油水分布系數(shù)為(35.6399±0.2953)，lgP為(1.5520±0.0036)。結(jié)論：穿心蓮內(nèi)酯為親脂性化合物，該實驗結(jié)果可為穿心蓮內(nèi)酯進(jìn)一步的研究提供依據(jù)。

穿心蓮內(nèi)酯為爵床科植物穿心蓮的主要有效成分，為二萜類內(nèi)酯化合物，具有祛熱解毒，消炎止痛之功效，對細(xì)菌性與病毒性上呼吸道感染及痢疾有特殊療效[1]，被譽為天然抗生素藥物。

平衡溶解度與表觀油水分配系數(shù)是新劑型研發(fā)中2個重要的理化性質(zhì)參數(shù)，影響藥物胃腸道吸收性能，是藥效發(fā)揮的物質(zhì)基礎(chǔ)[2]。因此，對溶解度與油水分配系數(shù)的研究，有助于預(yù)測藥物在體內(nèi)的溶解、吸收、分布與轉(zhuǎn)運特點，了解藥物經(jīng)胃腸道與黏膜的吸收情況[3]。本試驗測定穿心蓮內(nèi)酯的油水分配系數(shù)及在不同新型制劑輔料中的溶解度，可為穿心蓮內(nèi)酯的新劑型開發(fā)、工藝設(shè)計、體內(nèi)吸收代謝及生物利用度評價等研究提供參考。

1 儀器與試藥 Agilent 1260(四元泵G1311B；自動進(jìn)樣器G1329B；柱溫箱G1316A；二極管陣列檢測器G4212B；LAB open 色譜數(shù)據(jù)工作站)；Sartorius BP211D 型十萬分之一電子分析天平(德國賽多利斯天平有限公司)；超純水系統(tǒng)(Millipore，法國)；KQ-250DE型超聲波清洗器(昆山超聲波儀器有限公司)；SHA-C恒溫振蕩器(常州國華電器有限公司)；TGL-16G離心機(上海安亭科學(xué)儀器廠)。

穿心蓮內(nèi)酯原料藥(西安天一生物科技有限公司，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98.0%，批號:TYM140216)；穿心蓮內(nèi)酯對照品(中國食品藥品檢定研究院，質(zhì)量分?jǐn)?shù)> 98.7%，批號:110797-201108)。甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果 2.1 溶液的制備 水溶液飽和的正辛醇及正辛醇飽和的水溶液：將正辛醇和水等比例混合后，在振蕩器上振蕩24 h，使其相互飽和，靜置分層后，兩相分離，分別保存?zhèn)溆?。對照品溶液的配制：稱取穿心蓮內(nèi)酯2.55 mg 置10 mL 容量瓶中，加入甲醇使溶解并稀釋至刻度，即得。用甲醇溶液作空白對照溶液。供試品溶液的配制：稱取1mg的穿心蓮內(nèi)酯原料藥，用甲醇定容于10mL的容量瓶中，得供試品溶液。

2.2 穿心蓮內(nèi)酯HPLC-DAD測定方法的建立

時間/min Agilent ZORBAX Extend-C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動相：甲醇-水(40∶60)，等度洗脫。檢測波長：225.0 nm。柱溫：30 ℃，流速：1.0 mL·min-1，進(jìn)樣量：10 μL。記錄30 min色譜圖，見圖1。

A 穿心蓮內(nèi)酯對照品溶液；B 穿心蓮內(nèi)酯原料藥溶液

2.3 方法學(xué)考察 2.3.1 線性關(guān)系考察:分別精密吸取對照品混標(biāo)溶液儲備液0.05、0.1、0.2、0.5、1、2、5 mL，置10 mL棕色容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。分別精密量取10 μL，注入液相色譜儀，測定峰面積，以穿心蓮內(nèi)酯質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，得穿心蓮內(nèi)酯回歸方程為Y=20.394X-5.3577(R=0.9999)，線性范圍為1.275～255 μg·mL-1。

2.3.2 精密度試驗:精密吸取對照品溶液10μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，結(jié)果穿心蓮內(nèi)酯峰面積的RSD分別為0.73%，表明儀器精密度良好。

2.3.3 重復(fù)性試驗:精密稱取同一批穿心蓮內(nèi)酯原料藥6份，按2.1項下方法制備供試品溶液，按2.2.2項下色譜條件連續(xù)測定6次，結(jié)果穿心蓮內(nèi)酯平均質(zhì)量濃度為0.9955 mg·g-1，即純度為99.55%，RSD為1.51%，表明該方法重復(fù)性良好，穿心蓮內(nèi)酯原料藥純度符合要求。

2.3.4 穩(wěn)定性試驗:取同一樣品，按2.1項下方法制備供試品溶液，放置0、2、4、6、8、12和24 h分別進(jìn)樣10 μL后測定，穿心蓮內(nèi)酯的峰面積RSD為0.7829%，表明供試品溶液在24 h以內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.5 加樣回收試驗:準(zhǔn)確稱取已知含量的穿心蓮內(nèi)酯樣品適量，加入定量的穿心蓮內(nèi)酯對照品溶液，按2.1項下方法制備供試品溶液，按2.2.2項下色譜條件測定，計算平均加樣回收率。穿心蓮內(nèi)酯的加樣率分別為100.25 %，見表1。

表1 穿心蓮內(nèi)酯加樣回收率結(jié)果(n=6)

稱樣量(mg)樣品中含量(mg)加入量(mg)測得量(mg)回收率(%)平均回收率(%)RSD(%)0．450．44800．50150．9576101．560．520．51770．50151．010498．190．560．55750．50151．0698102．080．450．44800．50150．9529100．630．460．45790．50150．943496．750．470．46790．50150．9811102．27100．252．2676

2.4 穿心蓮內(nèi)酯在自微乳制劑不同輔料中溶解度的測定 取過量的穿心蓮內(nèi)酯分別加入到裝有適量的不同新劑型輔料的具塞試管中，攪拌均勻后密封超聲30 min，使藥物均勻分布，于37 ℃恒溫振蕩24 h，平衡后，4000 r·min-1離心15 min，取上清液100 μL置于10 mL量瓶中，用甲醇定容，HPLC法測定溶解度。可知穿心蓮內(nèi)酯在不同新劑型輔料中的溶解度，見表2。

表2 穿心蓮內(nèi)酯在不同介質(zhì)中的溶解度

種類名稱溶解度(mg/mL)名稱溶解度(mg/mL)油相EO0．1256±0．08Maisine35?10．4498±0．03GTCC0．2661±0．05油酸0．2512±0．04LabrafilM1944CS0．2828±0．01IPM0．1017±0．06乳化劑吐溫802．4737±0．28Labrasol3．9448±0．09EL?351．4717±0．04F68?△RH401．8201±0．59TopcithinSB?△PlurololeiqueCC4970．4883±0．14HS?155．1599±0．19助乳化劑1，2?丙二醇8．7291±0．21PEG?4006．9987±0．15乙醇8．5590±0．19TranscutolHP13．400±0．77

注：△“-”：不溶

2.5 穿心蓮內(nèi)酯油水分配系數(shù)的測定 2.5.1 油水分配振搖時間的確定:精密稱取穿心蓮內(nèi)酯3.0 mg，置10 mL 量瓶中，加入水溶液飽和的正辛醇使溶解并稀釋至刻度。從中精密吸取8.0 mL 至25 mL 具塞三角瓶中，加入8.0 mL 正辛醇飽和的水溶液，蓋緊塞子，置于振蕩器上振蕩，分別于振蕩0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4 h后取出，靜置30 min，分離出水相，油相經(jīng)0.45 μm 微孔濾膜過濾，注入液相色譜儀。結(jié)果見圖2。結(jié)果表明，振蕩3 h 后，體系基本已達(dá)平衡，故選擇振搖時間為3 h。

圖2 穿心蓮內(nèi)酯在不同振搖時間的油水分配系數(shù)

2.5.2 油水分布系數(shù)的測定:37℃條件下，穿心蓮內(nèi)酯的不同油水比例下油水分布系數(shù)測定結(jié)果見表3。計算公式為：P=C油相/C水相=CO/CW。

表3 穿心蓮內(nèi)酯的油/水分布系數(shù)(37 ℃)

比例(O/W)C油相(μg/mL)C水相(μg/mL)PlgP1∶1111．57543．129535．65721．55211∶2112．59023．131135．95881．55581∶3113．16063．169135．73281．55311∶9113．82763．229235．25091．5472

3 討 論 3.1 溶解度 通過對穿心蓮內(nèi)酯在常用的新劑型輔料中溶解度的考察，篩選出溶解度較大的乳化劑為Labrasol、吐溫80、RH40，助乳化劑為Transcutol HP、1,2-丙二醇、乙醇，油相為Maisine 35-1，可為穿心蓮內(nèi)酯的新劑型開發(fā)等研究提供參考。

3.2 平衡溶解度 采用不同油-水比例測得穿心蓮內(nèi)酯油水分布系數(shù)RSD為0.828%，lgP的RSD為0.232%，結(jié)果表明，不同油-水比例對油水分布系數(shù)的測定影響較小。穿心蓮內(nèi)酯的油水分布系數(shù)為(35.6399±0.2953)，lgP為(1.5520±0.0036)，說明藥物脂溶性較高。據(jù)文獻(xiàn)[5]報道，藥物最佳lgP值為-1.0

[1] 劉 意,龍曉英,何 琳,等.穿心蓮內(nèi)酯微乳的制備及含量測定[J].中成藥, 2010, 32(8):1424-1426.

[2] 康虞玲,張 娜, 張立娜,等. 葛根黃豆苷元的溶解度及油水分配系數(shù)的研究[J]．中華中醫(yī)藥雜志,2010,25(3):446-448．

[3] 陸 彬．藥物新劑型和新技術(shù)[M]．第2 版．北京:人民衛(wèi)生出版社, 2005:384．

(收稿2014-10-11；修回2014-11-09)

* 陜西省科學(xué)技術(shù)研究發(fā)展計劃項目(編號2011ZX09401-308-6)

穿心蓮內(nèi)酯 溶解度 油水分布系數(shù) 色譜法,高壓液相

R94

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2015.03.045

△陜西省中醫(yī)藥研究院(西安 710003)

▲西安培華學(xué)院(西安 710065)

●通訊作者