楊 波 岳 明 陜西省咸陽市中心醫(yī)院(咸陽 712000)

酸棗仁湯對(duì)睡眠剝奪大鼠認(rèn)知功能及海馬NA，GABA，5-HT的影響*

楊 波 岳 明 陜西省咸陽市中心醫(yī)院(咸陽 712000)

目的：觀察復(fù)方酸棗仁湯(SZRT)對(duì)睡眠剝奪(SD)大鼠認(rèn)知功能及海馬NA，GABA，5-HT含量的影響。方法：行為學(xué)篩選合格的雄性大鼠50只分為對(duì)照組、睡眠剝奪組、酸棗仁湯(SZRT)21.0g/kg，10.50g/kg，5.25 g/kg劑量組，建立睡眠剝奪大鼠動(dòng)物模型，進(jìn)行7d連續(xù)睡眠剝奪，1d1次，Y-型電迷宮測定學(xué)習(xí)記憶，Elisa法檢測海馬中去甲腎上腺素(NA)，γ-氨基丁酸(GABA)，5-羥色胺(5-HT) 的含量。結(jié)果：與睡眠剝奪組相比，SZRT 21.0g/kg組大鼠的學(xué)習(xí)記憶的能力改善，NA的含量降低，GABA和5-HT 含量升高。結(jié)論：酸棗仁湯(SZRT)可改善睡眠剝奪大鼠認(rèn)知功能，與改變單胺類遞質(zhì)作用有關(guān)。

睡眠和覺醒是人類所必須的生理現(xiàn)象，睡眠是恢復(fù)精力體力所必須的休息。睡眠剝奪(sleep deprivation，SD)由于自身生理、病理因素或環(huán)境的影響而喪失了生理所需要的睡眠，睡眠剝奪可導(dǎo)致機(jī)體認(rèn)知功能的損害[1]。酸棗仁湯出自張仲景的《金匱要略》，具有養(yǎng)心安神等功效，廣泛用于治療心悸、失眠、焦慮等。本課題考察復(fù)方酸棗仁湯(SZRT)對(duì)睡眠剝奪模型大鼠認(rèn)知功能的影響。

1 材 料

1.1 藥物及試劑 酸棗仁湯(SZRT)水煎劑由陜西中醫(yī)學(xué)院中藥藥理研究室(三級(jí)實(shí)驗(yàn)室)制備。去甲腎上腺素(NA)，γ-氨基丁酸(GABA)，5-羥色胺(5-HT) Elisa 試劑盒(上海森雄科技實(shí)業(yè)有限公司)。

1.2 動(dòng) 物 Sprague Dawley大鼠，SPF級(jí)，體質(zhì)量250～270g，♂。購于西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物質(zhì)量許可證號(hào)：SCXK(陜)2007-001。

1.3 儀 器 睡眠剝奪箱(自制)，Y-迷宮(張家港市生物儀器廠)。電動(dòng)玻璃勻漿器(上?？等A生化儀器)，KDC-160HR高速冷凍離心機(jī)(科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司)。

2 方 法

2.1 分組和造模[2]釆用改良多平臺(tái)法造模，成年♂大鼠70只，體質(zhì)量250±20g，2月齡。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，經(jīng)過站水平臺(tái)訓(xùn)練及Y-電迷宮的篩選，選出合格大鼠50只，按體重隨機(jī)分為5組，每組10只，對(duì)照組、睡眠剝奪組、酸棗仁湯(SZRT)21.0g/kg，10.50g/kg，5.25 g/kg劑量組。連續(xù)7d進(jìn)行睡眠剝奪，在睡眠剝奪箱(長90cm×寬70cm×高50cm)中放置10個(gè)小平臺(tái)(直徑6.5cm，高8.0cm)，平臺(tái)之間距離15cm，平臺(tái)周邊注滿水，水面距平臺(tái)面約1.0 cm，水溫20～22℃，每天更換水1次，大鼠在平臺(tái)上可飲食飲水，如果入睡就會(huì)落入水中，大鼠只能爬上平臺(tái)，這樣反復(fù)多次可達(dá)到睡眠剝奪的效果。對(duì)照組采用大平臺(tái)(直徑12cm，高8.0cm)作為對(duì)照，大鼠可以在大平臺(tái)上睡眠，入睡不會(huì)落入水中，其它環(huán)境與其余SD組相同。

2.2 給 藥 酸棗仁湯(SZRT)水煎液21.0g/kg，10.5g/kg，5.25g/kg組，給藥體積為l0mL/kg，給藥一周。對(duì)照組和睡眠剝奪組灌胃等容積的去離子水。

2.3 指標(biāo)檢測

2.3.1 Y-迷宮實(shí)驗(yàn)[3]實(shí)驗(yàn)步驟：先將大鼠放入迷宮中適應(yīng)3～5min，再開始正式實(shí)驗(yàn)。測試在第0d、7d進(jìn)行。采用隨機(jī)不休息法[4]：安全區(qū)以無規(guī)則的次序變換。開始時(shí)，對(duì)動(dòng)物所在支臂與另一支臂通電，動(dòng)物在電擊下逃竄至燈光區(qū)后再保持10s或30s為一次測試。然后以動(dòng)物所在支臂為下次測試的起始位置進(jìn)行下一次測試。觀察指標(biāo)：①錯(cuò)誤反應(yīng)次數(shù)：每個(gè)實(shí)驗(yàn)日進(jìn)行20次訓(xùn)練測試，統(tǒng)計(jì)錯(cuò)誤反應(yīng)的次數(shù)。②主動(dòng)回避率(%)：大鼠在燈亮后但未通電的5s內(nèi)完成逃避反應(yīng)的次數(shù)占總反應(yīng)次數(shù)的百分率。安全區(qū)燈亮，電刺激尚未開始時(shí)，大鼠即逃往安全區(qū)表明大鼠已經(jīng)形成了明暗辨別條件反射，稱為主動(dòng)回避反應(yīng)。

2.3.2 海馬神經(jīng)遞質(zhì)測定：將學(xué)習(xí)記憶測試結(jié)束后的各組大鼠，斷頭取海馬組織，在冰冷的生理鹽水中漂洗，除去血液，濾紙拭干，稱重后，加入冷生理鹽水，于勻漿管中充分研碎，制成10%的腦勻漿，以3000r·min-1離心15min取上清液，Elisa測定海馬組織勻漿中去甲腎上腺素(NA)，γ-氨基丁酸(GABA)，5-羥色胺(5-HT)含量，結(jié)果見表2。

3 結(jié) 果 3.1 對(duì)睡眠剝奪大鼠Y迷宮實(shí)驗(yàn)的影響 造模前各組大鼠的錯(cuò)誤反應(yīng)次數(shù)和主動(dòng)回避率基本一致，無顯著性差異(P>0.05)。造模第7d，與大平臺(tái)對(duì)照組比較，睡眠剝奪組錯(cuò)誤次數(shù)明顯增多，主動(dòng)回避率明顯減少，有顯著性差異(P<0.01)，與睡眠剝奪組相比，SZRT大劑量組錯(cuò)誤次數(shù)明顯減少，主動(dòng)回避率增多，有顯著性差異(P<0.05，P<0.01)。結(jié)果見表1。

表1 SZRT對(duì)睡眠剝奪大鼠Y-迷宮實(shí)驗(yàn)的影響

注：與對(duì)照組比較△P<0.05，▲P<0.01；與睡眠剝奪組比較◇P<0.05，◆P<0.01

3.2 SZRT對(duì)睡眠剝奪大鼠海馬海馬NA，GABA，5-HT含量的影響 與對(duì)照組比，睡眠剝奪組的海馬NA含量顯著升高，GABA，GABA含量顯著降低，有顯著性差異(P< 0.05，P< 0.01)。與睡眠剝奪組比較，酸棗仁湯21.0g/kg劑量組海馬的NA降低，5-HT，GABA活性升高，有顯著性差異(P<0.05)(見表2)。

表2 SZRT對(duì)睡眠剝奪大鼠海馬單胺類遞質(zhì)的影響

注：與對(duì)照組比較△P<0.05，▲P<0.01；與睡眠剝奪組比較◇P<0.05，◆P<0.01

4 討 論 睡眠剝奪會(huì)引起腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)發(fā)生一系列紊亂，影響認(rèn)知功能。與睡眠關(guān)系最大的神經(jīng)遞質(zhì)分別是5-HT，GABA以及NE。目前一般采用中樞興奮劑咖啡因等來對(duì)抗睡眠剝奪，但該類藥物較易產(chǎn)生依賴性和成癮性，從而限制了臨床使用。近年來多用中藥來干預(yù)睡眠剝奪的研究，由于其作用較持久，毒副作用較少，因此具有較好的應(yīng)用前景。為了能夠復(fù)制出與人類睡眠剝奪狀態(tài)接近的動(dòng)物模型，我們采用了改良多平臺(tái)法制作大鼠快動(dòng)眼睡眠剝奪模型，以酸棗仁湯進(jìn)行干預(yù)。酸棗仁湯方中，酸棗仁重用，其養(yǎng)肝血，安心神，使血不虛，則陰能涵陽為君藥，并以之為名，其功效毋庸置疑。茯苓健脾利濕，使三焦無阻，則陽能入陰，且寧心安神，助酸棗仁以安神。知母滋陰，清熱除煩，使心神得安，與茯苓共為臣藥，與君藥棗仁相配，以助君藥安神除煩之效。川芎條暢氣血，疏達(dá)肝氣，與酸棗仁相伍，一酸收，一辛散相反相成，以養(yǎng)血調(diào)肝安神，為佐藥。甘草清熱和藥，諸藥和用，共奏養(yǎng)血安神，清熱除煩之效，為佐使[5]。綜上所述，酸棗仁湯可改善睡眠剝奪大鼠學(xué)習(xí)記憶，可能與改變單胺類遞質(zhì)的含量有關(guān)，然而確切機(jī)制仍需進(jìn)一步探討。

[1] Giam GCK．Effeets of sleep deprivation with reference to military operations[J]．Annimals Academy of MedieiNA， 1997，26(1)：88-93.

[2] 范新六，李 峰，宋月晗，等．加味四逆散對(duì)睡眠剝奪大鼠PFC和海馬CA3區(qū)NMDA受體表達(dá)的調(diào)節(jié)作用[J]．世界中醫(yī)藥，2012，7(3)：261-262.

[3] 王躍春．Y-型電迷宮在大鼠學(xué)習(xí)記憶功能測試中的合理運(yùn)用[J]．中國行為醫(yī)學(xué)科學(xué)，2005，14(1)：69．

[4] 王躍春．大鼠Y-型迷宮測試法的篩選與優(yōu)化[J]．中國行為醫(yī)學(xué)科學(xué)，2005，14(1)：50．

[5] Corelli C．How sleep deprivation affects geNA expression in the brain：a review of recent findings[J]．J Appl Physiol，2002，92(1)：394-400．

(收稿2014-09-23；修回2014-10-11)

Suanzaoren decoction on the cognitive function and NA，GABA，

5-HT in hippocampus on sleep deprived rats

XianYang Central Hospital ( Xianyang 712000) Yang Bo Yue Ming

Objective：To investigate the effects of Suanzaoren Decoction on the cognitive function in sleep deprived rats and the content of NA，GABA，5-HT in hippocampus．Methods：After screening, selection behavior qualified in rats，50 male rats were randomly divided into control group，sleep deprivation group，SZRT 21.0g/kg，10.50g/kg，5.25 g/kg dose group，The models of sleep deprived were established with modified multiple platform method for seven days，drugs were given once daily．Determine the learning and memory of rats by Y-type maze，determine the the content of NA，GABA，5-HT in hippocampus by Elisa．Results：Compared with sleep deprivation group，SZRT 21.0g/kg dose group could improve learning and memory，decrease the content of NA，increase the content GABA，5-HT in hippocampal．Conclusion：Suanzaoren Decoction can improve the learning and memory in rats after sleep deprivation，may be related to change monoamine transmitters.

Sleep Deprivation/traditional Chinese medicine therapy Suanzaoren decoction/therapeutic uses Animal experimentation Rats

*陜西省教育廳科研計(jì)劃項(xiàng)目資助(2013JK0827)

睡眠剝奪/中醫(yī)藥療法 酸棗仁湯/治療應(yīng)用 動(dòng)物實(shí)驗(yàn) 大鼠

R256.23

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2015.01.058