程 玥 陳淑嫻 張 雪 張曉雙 劉繼平▲

陜西中醫(yī)學(xué)院藥理實(shí)驗(yàn)中心(咸陽(yáng) 712046)

·實(shí)驗(yàn)研究·

姜黃素對(duì)2型糖尿病腎病大鼠腎臟的保護(hù)作用*

程 玥 陳淑嫻△張 雪△張曉雙△劉繼平△▲

陜西中醫(yī)學(xué)院藥理實(shí)驗(yàn)中心(咸陽(yáng) 712046)

目的：觀察姜黃素對(duì)2型糖尿病腎病(DN)大鼠腎臟的保護(hù)作用。方法：雄性SD大鼠，除空白組外均給予高脂高糖飼料，50d后腹腔注射STZ 30mg/kg建立2型DN大鼠模型，造模成功后，隨機(jī)分為模型組、姜黃素低、高劑量組，給藥30d，稱(chēng)重、檢測(cè)大鼠血糖及血清肌酐(CRE)和尿素氮(BUN)水平；取右腎做HE染色，觀察大鼠腎組織病理學(xué)變化。結(jié)果：姜黃素各劑量組可顯著性增加大鼠的體重(P<0.05或P<0.01)；姜黃素高劑量組血糖顯著降低(P<0.01)；姜黃素低、高劑量組CRE和BUN值顯著性降低(P<0.05或P<0.01)；HE染色顯示，與模型組比較，姜黃素低、高劑量組大鼠腎臟組織形態(tài)有顯著性改善。結(jié)論：姜黃素可增加2型糖尿病腎病模型大鼠的體重，降低血糖、CRE和BUN，改善模型大鼠腎臟病理?yè)p傷，有一定腎臟保護(hù)作用。

糖尿病腎病(DN)是糖尿病最常見(jiàn)的微血管并發(fā)癥之一，也是糖尿病最主要的致死原因。其病理實(shí)質(zhì)為血管損害為主的腎小球硬化癥。臨床上目前尚缺乏DN的有效治療手段，為了提高患者生活質(zhì)量、延長(zhǎng)壽命，積極尋找治療或者延緩DN發(fā)展的有效藥物具有重要意義。姜黃素是一種多效的酚類(lèi)物質(zhì)，由姜科植物姜黃、郁金等中藥根莖中提取得到，其來(lái)源較廣，毒性也很低，故此在臨床上具有廣泛使用價(jià)值。近年來(lái)研究表明其具有抗氧化、清除自由基、抗炎、降脂、抗腫瘤、抗微生物等多方面藥理作用[1-3]，而且一直以來(lái)被印度傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)用來(lái)治療糖尿病等疾患，研究表明姜黃素能降低糖尿病大鼠的蛋白尿[4]，所以有關(guān)其防治2型糖尿病腎病的確切效果和機(jī)制值得繼續(xù)探討。本課題組旨在探討姜黃素對(duì)DN大鼠腎臟的保護(hù)作用進(jìn)行評(píng)價(jià)，為姜黃素進(jìn)一步研究及臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材 料 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 雄性SD大鼠，清潔級(jí)，體重250～300g，由第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：SCXK(軍)2012-006；飼養(yǎng)環(huán)境：陜西中醫(yī)學(xué)院藥理實(shí)驗(yàn)中心，動(dòng)物分籠飼養(yǎng)，保持12h晝夜節(jié)律，室溫(22±1)℃，自由飲水?dāng)z食。

1.2 藥品與試劑 姜黃素購(gòu)自南京澤朗有限公司，純度99%，使用前用5‰羧甲基纖維素鈉配制成混懸液；鏈脲佐菌素(STZ)，購(gòu)自Sigma公司；羧甲基纖維素，上海試劑總廠；肌酐(CRE)試劑盒，批號(hào)：20140606；尿素氮(BUN)試劑盒，批號(hào)：20140603，均購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.3 儀 器 BT224S電子天平，賽多利斯科學(xué)儀器有限公司；DMBH200顯微鏡，舜宇光學(xué)科技有限公司；752紫外分光光度計(jì)；Thermo-86超低溫冰箱；微量移液器，上海求精生化試劑儀器有限公司；三諾安穩(wěn)血糖儀，三諾生物傳感股份有限公司。

2 方 法 2.1 造模與分組 雄性SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng) 1 周，除空白組給予基礎(chǔ)飼料外，其余大鼠給予高脂高糖飼料(基礎(chǔ)飼料59%、豬油18%、蔗糖20%、蛋黃3%)，喂養(yǎng)50d后，禁食不禁水12h以上，腹腔注射STZ30mg/kg(臨用前溶于0.1mol/L、pH4.2的檸檬酸緩沖液中配置成1%的濃度)，72 h后尾靜脈采血測(cè)血糖，以血糖濃度≥16.7mmol/L 為模型成功標(biāo)準(zhǔn)[5]。模型成功的大鼠隨機(jī)分為模型組、姜黃素低劑量組、姜黃素高劑量組，姜黃素用5‰羧甲基纖維素鈉配成混懸液200mg/kg、300mg/kg灌胃，模型組和空白組均給予等體積5‰羧甲基纖維素鈉，1次/d，給藥時(shí)間為30d，每周各組大鼠稱(chēng)重一次，實(shí)驗(yàn)期間動(dòng)物自由進(jìn)食進(jìn)水，未使用胰島素及其它降糖藥物。

2.2 取材與標(biāo)本處理 給藥30d后，各組大鼠稱(chēng)重，禁食不禁水12h，尾靜脈采血測(cè)血糖，用3%戊巴比妥鈉1mL/kg麻醉，腹主動(dòng)脈取血至離心管中，室溫靜置1h后，3000r/min離心10min，收集上清液，-80℃凍存?zhèn)溆?，?yán)格按照試劑盒說(shuō)明測(cè)定血清CRE和BUN各項(xiàng)指標(biāo)。取右腎用4%多聚甲醛固定，固定完全后，常規(guī)石蠟包埋，切片，進(jìn)行HE染色。

3 結(jié) 果 3.1 姜黃素對(duì)2型糖尿病腎病模型大鼠體重的影響 分別于給藥第1d、7d、14d、21d、28d、31d稱(chēng)量大鼠體重，給藥第1d、7d各組間大鼠體重?zé)o顯著性差異，給藥第14d、21d，與空白組比較，模型組大鼠體重顯著減輕(P<0.05)，與模型組比較，姜黃素各劑量組大鼠體重?zé)o顯著性差異；給藥第28d、31d，與空白組比較，模型組大鼠體重顯著減輕(P<0.01)，與模型組比較，姜黃素各劑量組大鼠體重顯著增加(P<0.01或P<0.05)(見(jiàn)表1)。

3.2 姜黃素對(duì)2型糖尿病腎病大鼠模型大鼠血糖、血清CRE和BUN的影響 結(jié)果顯示，與空白組比較，模型組血糖、血清CRE和BUN值明顯升高(P<0.01)；與模型組比較，姜黃素高劑量組血糖顯著性降低(P<0.01)，姜黃素低、高劑量組CRE和BUN值顯著性降低(P<0.05或P<0.01)，見(jiàn)表2。

表1 姜黃素對(duì)2型糖尿病腎病模型大鼠體重的影響±s，n=8)

注：與空白組比較，△P<0.05，◇P<0.01；與模型組比較，▲P<0.05，◆P<0.01

表2 姜黃素對(duì)2型糖尿病腎病模型大鼠血糖、CRE和BUN指標(biāo)的影響±s，n=8)

注：與空白組比較，△P<0.05，◇P<0.01；與模型組比較，▲P<0.05，◆P<0.01

3.3 姜黃素對(duì)各組大鼠腎組織病理改變的影響 HE染色結(jié)果顯示，與空白組比較，模型組大鼠腎臟組織形態(tài)差異顯著，部分腎小管上皮細(xì)胞脫落，發(fā)生空泡變性，腎小球肥大而形態(tài)不規(guī)則，伴有間質(zhì)散在的淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)和灶性炎癥分布，系膜區(qū)基質(zhì)中、重度增多，系膜細(xì)胞中、重度增生，姜黃素低、高劑量組與模型組比較，大鼠腎臟組織形態(tài)上述病變明顯減輕，圖1。

圖1 姜黃素對(duì)2型糖尿病腎病模型大鼠HE染色的影響

4 討 論 DN在中醫(yī)被認(rèn)為主要是因消渴久治不愈，耗氣傷陰，痰熱郁瘀互結(jié)而使絡(luò)脈受阻，最終導(dǎo)致氣陰兩虛，瘀血內(nèi)阻。而瘀血又作為新的致病因素貫穿于DN始終[6]。故此中醫(yī)對(duì)該病的治療強(qiáng)調(diào)辨證的重點(diǎn)應(yīng)在早期，既能取得較佳療效，又可防止變癥的出現(xiàn)。中藥姜黃具有行氣破瘀、通經(jīng)止痛、清心解毒等功效，姜黃素作為其主要活性成分，在DN早期使用應(yīng)有較好的療效。

2型糖尿病腎病動(dòng)物模型的建立方法很多，目前主要有：自發(fā)型、化學(xué)藥物誘導(dǎo)型和手術(shù)型。手術(shù)型造模有死亡率高、成功率低的缺點(diǎn)，化學(xué)藥物STZ具有高特異性殺傷胰島β細(xì)胞的作用，造成β細(xì)胞大量破壞，胰島素合成和分泌減少，引起糖代謝紊亂，從而導(dǎo)致糖尿病，對(duì)肝腎的損害比較小，是近年來(lái)誘導(dǎo)糖尿病建立DN動(dòng)物模型發(fā)生的首選藥物，基于以上考慮，本實(shí)驗(yàn)采取保留大鼠雙側(cè)腎臟，高脂高糖飼料喂養(yǎng)誘導(dǎo)體內(nèi)葡萄糖和脂質(zhì)代謝紊亂，注射小劑量STZ輕度破壞胰島β細(xì)胞以制備與人類(lèi)相似的Ⅱ型糖尿病腎病模型，本實(shí)驗(yàn)造模成功，與臨床DN病理特征較一致。

控制血糖是治療DN的防治關(guān)鍵之一，由于胰島素絕對(duì)或相對(duì)缺乏或胰島素抵抗，機(jī)體不能充分利用葡萄糖產(chǎn)生能量，致脂肪和蛋白質(zhì)分解加強(qiáng)，消耗過(guò)多，呈負(fù)氮平衡，體重逐漸下降，乃至出現(xiàn)消瘦，本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ痛笫笤炷：?，逐漸出現(xiàn)“三多一少”等現(xiàn)象，給藥后，姜黃素各劑量組大鼠第21d前與模型組表現(xiàn)相似；但用藥21d后，姜黃素低、高組大鼠體重明顯增加；姜黃素低、高劑量組均能不同程度降低DN大鼠空腹血糖，其可能機(jī)理為促進(jìn)組織器官對(duì)葡萄糖的利用，增加胰島素的敏感性，促進(jìn)胰島素的分泌。

CRE、BUN均為腎功能受損的特異性指標(biāo)，兩者分別為含氮的有機(jī)物和蛋白質(zhì)代謝的終末產(chǎn)物，在腎功能正常的情況下，這些小分子物質(zhì)從腎小球?yàn)V出，故可用作腎小球?yàn)V過(guò)功能的診斷和過(guò)篩指標(biāo)。DN可分為5期，Ⅰ-Ⅲ期基本為早期DN，主要表現(xiàn)為腎臟肥大和腎小球高濾過(guò)，尿白蛋白排泄率正常或出現(xiàn)微量白蛋白尿；Ⅳ期出現(xiàn)大量白蛋白尿，腎小球?yàn)V過(guò)率開(kāi)始下降，血CRE和BUN因潴留而增高，腎功能逐漸減退；Ⅴ期為尿毒癥期，多數(shù)腎單位閉鎖，血CRE和BUN升高，血壓升高[7]。本實(shí)驗(yàn)研究數(shù)據(jù)顯示，姜黃素各劑量組均能顯著降低CER和BUN水平，具有明顯提高腎小球?yàn)V過(guò)率的作用。

綜上所述，姜黃素可增加DN大鼠體重，并可降低DN大鼠空腹血糖及CRE、BUN的水平，不同程度改善DN大鼠的腎臟組織形態(tài)，提示姜黃素對(duì)DN模型大鼠的腎臟存在一定程度的保護(hù)作用，以上研究結(jié)果可為姜黃素臨床治療提供參考依據(jù)。

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(收稿2014-09-02；修回2014-10-12)

致作者

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Protection kidney of curcumin in type 2 diabetic nephropathy rats

Laboratory of Pharmacology，Shaanxi University of Chinese Medicine ( 712046，China)

Cheng Yue Chen Shuxian Zhang Xue et al

Objective:To observe the influence of curcumin on kidney protection in type 2 diabetic nephropathy (DN).Methods:Male SD rats, except the blank group,and the rest were induced to be diabetic nephropathy (DN) via injection of STZ with 30 mg/kg after feeding high fat and sugar for 50 days. Model rats were divided into 3 groups randomly: model group, low dosage and high dosage of curcumin group. Medicine was given for 30 dates, measuring weight once a week. To measure weight and detect rats blood glucose , creatinine (CRE) and urea nitrogen (BUN) level in 31stday. After HE staining the right kidney, observe the changes of renal histopathological. Results: Curcumin low and high dose group could significantly increase the weight of the rats (P<0.05 orP<0.01); curcumin low blood sugar, high dose group significantly lower (P<0.05 orP<0.01), significantly lower serum levels of CRE (P<0.05 orP<0.01); curcumin high dose group of serum BUN level significantly lower (P<0.01); HE dyed curcumin was low, the high dose group compared with model group, kidney tissue morphology have significant difference. Conclusion: Curcumin can increase body weight of type 2 diabetic nephropathy model rat, reduce blood sugar, serum level of BUN and CRE, improve the model of rat kidney pathological damage, on DN rats model of kidney has a protective effect.

Diabetic nephropathies/traditional Chinese medicine therapy Curcumin/therapeutic uses Animal experimentation Rats

*陜西省科技廳自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(2012JM4013)

糖尿病腎病/中醫(yī)藥療法 姜黃素/治療應(yīng)用 動(dòng)物實(shí)驗(yàn) 大鼠

R587.2

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2015.01.055

△陜西中醫(yī)學(xué)院中藥藥理實(shí)驗(yàn)室(咸陽(yáng) 712046)

▲通訊作者