李 益 灑玉萍

(青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院中醫(yī)系，西寧，810001)

實(shí)驗(yàn)研究

穴位埋線對肥胖模型大鼠脂聯(lián)素及其受體的影響

李 益 灑玉萍

(青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院中醫(yī)系，西寧，810001)

目的：探討穴位埋線對單純性肥胖的作用機(jī)理。方法：采用高脂飲食喂養(yǎng)建立肥胖模型大鼠，將造模成功大鼠進(jìn)行埋線治療干預(yù)后，觀察大鼠體重、體長、Lee's指數(shù)的變化及檢測血清脂聯(lián)素及其受體的含量。結(jié)果：經(jīng)治療后，埋線組大鼠的體重、Lee's指數(shù)均明顯低于對照組而高于正常組(P<0.01，P<0.05)。雌雄埋線組大鼠治療前后體重差值的比較，其結(jié)果顯示雄性大鼠減肥療效優(yōu)于雌性(P<0.01)。對照組、埋線組大鼠血清ADP、AdipoR1的含量均明顯低于正常組(P<0.01)，而AdipoR2的含量高于正常組(P<0.01)；經(jīng)埋線治療后，肥胖大鼠血清ADP、AdipoR1的含量升高(P<0.01，P<0.05),而AdipoR2的含量降低(P<0.01)。結(jié)論：穴位埋線對肥胖機(jī)體脂聯(lián)素及其受體水平的良性調(diào)節(jié)作用可能是埋線療法減肥的作用機(jī)制之一。

穴位埋線；單純性肥胖；脂聯(lián)素；脂聯(lián)素受體

隨著飲食結(jié)構(gòu)及生活方式的改變，幾乎所有國家肥胖病的發(fā)生率都在同步增長[1]，不僅影響形體美觀，而且易引發(fā)高血壓病、心血管病、代謝綜合征等致死率很高的嚴(yán)重疾病，肥胖已成為本世紀(jì)一個世界性關(guān)注的公共衛(wèi)生問題[2-3]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)對肥胖的治療主要表現(xiàn)在加強(qiáng)個體鍛煉，控制高能量食物的攝入，藥物治療以及手術(shù)減脂等方面，但因其易反彈、難以堅(jiān)持、不良反應(yīng)較多等不能取得滿意的療效[4]。針灸減肥是目前用于減肥的流行方法之一。穴位埋線療法作為針灸學(xué)發(fā)展和延伸的一種新療法，近幾年來，已被廣泛用于治療肥胖癥的臨床中，并取得滿意療效。然而有關(guān)穴位埋線減肥機(jī)理的實(shí)驗(yàn)研究甚少，機(jī)理多處于臨床探討中[5]。

本實(shí)驗(yàn)采用高脂飼料誘導(dǎo)方法制備單純性肥胖大鼠模型，通過穴位埋線治療干預(yù)后，觀察大鼠體重、體長及Lee's指數(shù)的變化，及采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)方法檢測血清脂聯(lián)素(Adiponectin，APN)及脂聯(lián)素受體(Adiponectin Receptor，AdipoR)的含量，觀察對減肥效應(yīng)的影響，初步探討穴位埋線方法的作用機(jī)理，為穴位埋線治療肥胖病癥的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物 取剛斷乳且健康SD SPF級大鼠56只，雌雄各半，體重在60～80 g，由甘肅中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供。動物許可證：SCXK(甘)2011-0001)。

1.2 藥劑儀器 ADP、ADIPOR1、ADIPOR2試劑盒(北京生物技術(shù)有限公司，批號：201404)，一次性穴位埋線針，羊腸線。湘儀離心機(jī)(TG16-WS)，電子天平(TDS1001)，酶標(biāo)分析儀(RT6000)，電熱恒溫培養(yǎng)箱(上海一恒科學(xué)儀器有限公司)。

1.3 動物分組 對大鼠稱重記錄后，隨機(jī)分為正常組(12只)和造模組(44只)，每組大鼠雌雄各半。造模結(jié)束后，將造模成功的大鼠隨機(jī)分為對照組和埋線組。

1.4 高脂飼料制作 高脂飼料參考文獻(xiàn)中飼料配方[6-7]。組成及比例為食用豬油15%、白砂糖5%、瓜子仁6%、花生仁4%、蛋黃粉5%、面粉5%，普通飼料60%，香油幾滴加工而成。

1.5 造模方法 適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d后，測量大鼠初始體重，用自制高脂飼料喂養(yǎng)9周后建立肥胖大鼠模型。造模期間，正常組和造模組分別用普通飼料和高脂飼料喂養(yǎng)，每天同一時(shí)間投放飼料，并監(jiān)測攝食、飲水等一般情況，每隔2 d同一時(shí)間段對大鼠的體重、體長進(jìn)行檢測記錄，在此次實(shí)驗(yàn)中無大鼠死亡。

1.6 模型評價(jià) 在模型制備周期結(jié)束后，將體重超過普通飼料喂養(yǎng)大鼠平均體重的20%作為單純性肥胖模型實(shí)驗(yàn)大鼠[8]，實(shí)驗(yàn)共有36只造模成功，其中雄性20只、雌性16只，凡體重未達(dá)標(biāo)準(zhǔn)的造模組大鼠，予以剔除。

1.7 取穴及治療 取陰陵泉、豐隆，雙側(cè)交替取穴(穴位定位參照《實(shí)驗(yàn)動物針灸學(xué)》[9])。微創(chuàng)埋線[10]操作方法：埋線前先將醫(yī)用羊腸線置于消毒彎盤中，用消毒剪將羊腸線剪成0.5 cm左右長度若干段，取一次性埋線針，將醫(yī)用羊腸線放置于埋線針管的前端備用。將埋線組大鼠置于固定器上，對擬埋線穴位皮膚進(jìn)行碘酒常規(guī)消毒，右手持針，用舒張或提捏進(jìn)針法將針剌入所需深度，在感知得氣后，一邊推針芯，一邊退針管，將羊腸線埋于穴位下。出針后穴位區(qū)消毒，干棉球擦拭后用輸液貼敷貼，防止感染。7 d埋線1次，4次為1個療程，4次后評定療效。每次埋線時(shí)對正常組、對照組大鼠進(jìn)行干預(yù)治療，其操作是用埋線針對其穴位進(jìn)行針刺(與埋線時(shí)同等強(qiáng)度刺激)而不做埋線，以便同埋線組對比。在治療期間，3組大鼠均采用普通飼料喂養(yǎng)，各組動物自由攝食和飲水。

1.8 觀察指標(biāo) 1)一般情況觀察：注意觀察大鼠的活動程度、體形、飲食、飲水、大小便狀況。2)生長指標(biāo)測定：平時(shí)對大鼠的體重、體長、Lee's指數(shù)進(jìn)行動態(tài)觀測，治療結(jié)束后，將大鼠禁食12 h，然后在戊巴比妥鈉麻醉下，普通天平稱取所有大鼠體重，測量體長(體長測量：麻醉后測量大鼠鼻尖到肛門的長度)，計(jì)算Lee's指數(shù)[11]值(Lee's指數(shù)=體重(g)-3/體長(cm)×103)，對以上指標(biāo)測定后進(jìn)行療效評估。3)脂聯(lián)素及其受體測定：將大鼠麻醉后，取5 mL腹主動脈全血，室溫血液自然凝固10～20 min，低溫(3 000 r/min)離心15 min，取上清液作樣本，分裝于Ep管中，于-70 ℃冰箱保存待測，采用ELISA法檢測脂聯(lián)素及其受體的含量，其操作步驟嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1 穴位埋線對大鼠體重、體長、Lee's指數(shù)的影響 治療前，雌雄大鼠對照組、埋線組的體重、Lee's指數(shù)均明顯高于正常組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；雌雄大鼠對照組、埋線組的體重及Lee's指數(shù)的組間對比均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。治療后，雌雄大鼠埋線組的體重、Lee's指數(shù)均明顯低于對照組(P<0.01，P<0.05)。而治療前后，雌雄各組大鼠體長組間的分別比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1、表2。

表1 雌性各組大鼠治療前后體重、體長、Lee's指數(shù)的比較

注：B代表治療前，A代表治療后；與正常組比較，**P<0.01；與對照組比較，△△P<0.01，△P<0.05(B：B或A：A)。

2.2 雌雄埋線組大鼠治療前后體重差值分析 為了比較雌雄大鼠埋線減肥的效果，各取9只雌雄埋線組大鼠，并按公式(治療前后體重變化值=治療后體重-治療前體重)計(jì)算出每只大鼠的體重變化值，去掉最大最小值，雌雄各余7只進(jìn)行比較，經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析得出雄性大鼠體重差值均數(shù)小于雌性，經(jīng)比較有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，說明經(jīng)埋線治療后雄性大鼠體重增長比雌性緩慢，說明穴位埋線減肥雄性大鼠治療效果優(yōu)于雌性。見表3。

表2 雄性各組大鼠治療前后體重、體長、Lee's指數(shù)的比較

注:B代表治療前，A代表治療后；與正常組比較，**P<0.01；與對照組比較，△△P<0.01(B：B或A：A)。

表3 雌雄埋線組大鼠治療前后體重差值分析

注：與雌性比**P<0.01。

2.3 穴位埋線對大鼠血清ADP及AdipoR1、AdipoR2含量的影響 對照組與正常組相比，大鼠血清ADP、AdipoR1的含量均明顯降低(P<0.01)，而AdipoR2的含量升高(P<0.01)；經(jīng)埋線治療后，與正常組、對照組比較，肥胖大鼠血清ADP、AdipoR1的含量回升(P<0.01，P<0.05),但仍低于正常組(P<0.01)，而AdipoR2的含量與對照組比較降低(P<0.01)，但仍高于正常組(P<0.01)。見表4。

表4 實(shí)驗(yàn)各組大鼠ADP及AdipoR1、AdipoR2含量的比較

注：與正常組比較，**P<0.01；與對照組比較，△△P<0.01，△P<0.05(雌：雌或雄：雄)。

3 討論

肥胖是一種常見病，中醫(yī)自古有其記載，如《丹溪心法》中寫道：“肥人多痰濕?！标愋迗@說：“大抵素稟之盛，從無所苦，惟是痰濕頗多”?！稄堩睬噌t(yī)案》中也有：“形體豐者多濕多痰”的描述。均強(qiáng)調(diào)形體肥胖之人，其體質(zhì)類型多偏于痰濕。本研究從痰濕角度出發(fā)，取陰陵泉、豐隆，雙側(cè)交替取穴。陰陵泉為足太陰脾經(jīng)之合穴，有運(yùn)脾化濕之功；豐隆為足陽明胃經(jīng)之絡(luò)穴，別走足太陰，兩經(jīng)同治，有和胃氣、化痰濕的作用，取以上兩穴，以觀察其減肥效果、探索其作用機(jī)制。在針灸的眾多施術(shù)方法里，穴位埋線療法是稟著《內(nèi)經(jīng)》“深納而久留之”的思想而產(chǎn)生的一種復(fù)合性的治療方法，其療法是將能被機(jī)體吸收的羊腸線植入相應(yīng)的穴位，羊腸線在體內(nèi)被溶解、吸收，使線體對穴位產(chǎn)生持續(xù)有效的刺激作用，這種“長效針感”可持續(xù)15 d或更長時(shí)間直至線體被溶解吸收，其刺激感應(yīng)維持時(shí)間是其他針刺方法所不能企及的，穴位埋線是針灸學(xué)發(fā)展和延伸出的一種療法，是改良式外灸，具有其獨(dú)特的臨床實(shí)用價(jià)值[12]。

研究證實(shí)，脂聯(lián)素與糖尿病、肥胖、高胰島素血癥等疾病密切相關(guān)[13-15]，脂聯(lián)素需要與脂聯(lián)素受體相結(jié)合發(fā)揮其反饋調(diào)節(jié)、改善代謝等相關(guān)作用[16]。在本研究中，雌雄大鼠埋線組的體重、Lee's指數(shù)明顯低于對照組，說明取陰陵泉、豐隆兩穴埋線有良好的減肥作用。雌雄埋線組大鼠治療前后體重差值的分析，其結(jié)果顯示雄性大鼠減肥療效優(yōu)于雌性，這可能是埋線對穴位的持續(xù)刺激作用使雄性大鼠前列腺素的分泌發(fā)生了改變而引起的某種減肥機(jī)制，或與地處高海拔環(huán)境有關(guān)，也可能與雌性大鼠的生理機(jī)能有某種聯(lián)系，有待進(jìn)一步研究。對照組與正常組相比，大鼠血清ADP、AdipoR1的含量均明顯降低，而AdipoR2的含量升高；經(jīng)埋線治療后，與正常組、對照組比較，肥胖大鼠血清ADP、AdipoR1的含量回升，而AdipoR2的含量與對照組比較降低，提示埋線療法對肥胖大鼠脂聯(lián)素及其受體水平的調(diào)整作用可能是埋線療法減肥的重要作用機(jī)制，也可能是肥胖、脂聯(lián)素及其受體同受另一因素的影響。由于樣本量較小而沒有在治療前處死大批大鼠，因而不能做治療前后等比較，希望下次大樣本量對其跟進(jìn)研究并對研究結(jié)果加以證實(shí)。

結(jié)論：取陰陵泉、豐隆穴進(jìn)行埋線，能明顯減輕大鼠的體重、降低Lee's指數(shù)值，且雄性大鼠減肥療效優(yōu)于雌性；血清脂聯(lián)素及其受體含量的異?？赡苁切纬煞逝值奈ｋU(xiǎn)因素，穴位埋線對血清脂聯(lián)素及其受體的含量具有良性調(diào)整作用，這可能是埋線療法減肥的作用機(jī)制之一。

[1]Swinburn BA,Sacks G,Hall KD,et al.The global obesity pandemic:shaped by global drivers and local environments[J].Lancet,2011,378(9793):804-814.

[2]Malena Monteverde,Kenya Noronha,Alberto Palloni,etal.Obesityand excess mortality amongthe elderly in the United States and Mexico[J].Demography,2010,47(1):79-96.

[3]湯曉冬,張鑫鑫,李偉紅.電針結(jié)合埋線療法治療單純性肥胖病20例[J].針灸臨床雜志,2013,29(1):27-29.

[4]于向華,何齊芳,陳文通.穴位埋線治療單純性肥胖的研究現(xiàn)狀[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊,2013,31(1):94-95.

[5]阮雅麗,陽仁達(dá).近十年針灸減肥的臨床研究進(jìn)展[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2010,16(2):73-75.

[6]王澍欣,李艷慧.穴位埋線對肥胖模型大鼠瘦素水平及血月旨的影響[J].天津中醫(yī)藥,2009,26(1):63-65.

[7]高磊,孔顯娟,石現(xiàn).電針和穴位埋線對單純性肥胖大鼠脂質(zhì)代謝基因PPAR-CmRNA表達(dá)及相關(guān)脂代謝酶的影響[J].中國針灸,2011,31(6):535-538.

[8]宋文蔚,潘智敏,王英虎.調(diào)脂積沖劑對高脂誘導(dǎo)肥胖大鼠脂聯(lián)素、抵抗素影響的研究[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊,2014,32(5):1074-1076.

[9]李忠仁.實(shí)驗(yàn)動物針灸學(xué)[M].北京:中國中醫(yī)藥出版社,2003:329-331.

[10]孫文善.微創(chuàng)埋線臨床操作規(guī)范[J].上海針灸雜志,2012,31(1):69.

[11]楊水鳳,王延武.埋線療法對肥胖大鼠大腦紋狀體NO和NOS含量的影響[J].浙江中醫(yī)雜志,2008,43(7):380-381.

[12]夏瑋.辨證針刺取穴與埋線治療青年單純性肥胖的臨床療效觀察[J].中國臨床研究,2014,27(3):349-352.

[13]胡曉菡,王麗,潘婕,等.脂聯(lián)素的研究進(jìn)展及與多種疾病的關(guān)系[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2014,23(45):4563-4565.

[14]馬建華,王昱政,趙琳.針刺對2型糖尿病肥胖大鼠瘦素、胰島素抵抗和脂聯(lián)素水平影響的實(shí)驗(yàn)研究[J].新中醫(yī),2012,44(11):134-137.

[15]何東,李驪華.脂聯(lián)素與抵抗素對動脈粥樣硬化的作用及其與血管緊張素受體拮抗劑關(guān)系[J].中國老年學(xué)雜志,2014,34(4):1142-1144.

[16]黃言瑾,陳金水.脂聯(lián)素國內(nèi)外研究進(jìn)展[J].中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志,2014,12(2):234-236.

(2015-03-20收稿 責(zé)任編輯：張文婷)

Effect of Catgut Implantation at Acupoint on Adiponectin and Its Receptors for Obese Rat Model

Li Yi, Sa Yuping

(DepartmentofTraditionalChineseMedicineofMedicalCollegeofQinghaiUniversity,Xining810001,China)

Objective:To investigate the mechanism of catgut implantation at acupoint on simple obesity. Methods:To establish the model of obesity rats by providing high lipid diet. To observe the change of rats' body weight, body length, Lee 's index and test the content of serum adiponectin and its receptors after its intervention of catgut embedding therapy. Results: after treatment, the rats of catgut embedding group's body weight, Lee 's index were all markedly lower than the control group but still higher than the normal group(P<0.01,P<0.05). Comparison between the weight of male and female catgut embedding group rats before and after treatment shows that male rats weight loss efficacy is superior to female(P<0.01). The levels of serum ADP and AdipoR1 in the control and catgut embedding groups were all markedly lower than that in the normal group(P<0.01), but the level of serum AdipoR2 was higher than normal(P<0.01). After treatment of catgut embedding, the levels of obese rats' serum ADP and AdipoR1 were rised(P<0.01,P<0.05), while it saw a decrease of AdipoR2(P<0.01). Conclusion: Catgut implantation at acupoint can have benign effect on adiponectin and its receptor levels of obese bodies, and this may be one of the mechanism of catgut embedding therapy of losing weight.

Catgut implantation at acupoint; Simple obesity; Adiponectin; Adiponectin receptor

2013年度青海大學(xué)大學(xué)生科技創(chuàng)新基金項(xiàng)目(編號：2013-QX-04)

李益(1987—)，女，碩士研究生，研究方向：中西醫(yī)結(jié)合治療代謝性疾病，E-mail：807360352@qq.com

灑玉萍(1969—)，女，教授，碩士生導(dǎo)師，主要從事中西醫(yī)結(jié)合教學(xué)與臨床工作，E-mail：Sayuping@yahoo.com.cn

R245-3

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2015.11.031