楊勝晗，王蕾香，韓春薇

近年來，子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率逐漸上升，嚴重威脅著婦女的健康和生命。盡管大部分子宮內(nèi)膜癌患者早期可通過組織活檢而被確診，但是仍有許多患者，臨床癥狀不明顯，就診時已是晚期。目前子宮內(nèi)膜癌最常用的診斷方法為診斷性刮宮，但這種方法對疾病的臨床分期意義不大，難以指導治療和預測預后，腫瘤標志物的檢測可以彌補這一缺陷。人附睪蛋白4(human epididymis gene product 4，HE4)基因的cDNA 最早由Kirchhoff 等［1］從人的附睪中克隆得到，可編碼HE4 蛋白。目前有許多研究已經(jīng)證明HE4 與人類卵巢腺癌的發(fā)生、發(fā)展及預后密切相關［2-5］，近來研究［6-9］表明HE4 在子宮內(nèi)膜癌中高表達。本實驗應用化學發(fā)光微粒子免疫分析法(CMIA)檢測正常子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜不典型增生、子宮內(nèi)膜癌患者血清HE4 表達情況，分析血清HE4 水平與子宮內(nèi)膜癌的病理類型、臨床分期、病理學分級、肌層浸潤深度及盆腔淋巴結轉移情況的關系，探討HE4 在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展中的作用，為子宮內(nèi)膜癌的早期診斷、指導臨床治療及預測預后尋找新的分子生物學依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 資料 選取2010年3月－2010年12月在蚌埠醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院婦科腫瘤科及三院婦產(chǎn)科住院手術治療的15例正常子宮內(nèi)膜患者，10 例子宮內(nèi)膜不典型增生患者，40 例子宮內(nèi)膜癌患者。正常子宮內(nèi)膜組:年齡32～54 歲，共15例。其中子宮肌瘤7 例、子宮內(nèi)膜息肉2 例、卵巢漿液性囊腺瘤3 例、功能失調(diào)性子宮出血3 例。子宮內(nèi)膜不典型增生組:年齡35～57 歲，共10 例。其中輕度子宮內(nèi)膜不典型增生3例，中度及重度子宮內(nèi)膜不典型增生7 例。子宮內(nèi)膜癌組:年齡33～72 歲，共40 例。按國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)手術病理－分期:Ⅰ期18 例，Ⅱ期9 例，Ⅲ期8 例，Ⅳ期5 例;組織學分級:高分化23 例，中分化10 例，低分化7 例;肌層浸潤深度≤1/2 者28 例，肌層浸潤深度＞1/2 者12 例;術后證實無淋巴結轉移者21 例，有淋巴轉移者8 例，未做淋巴結清掃者11例;子宮內(nèi)膜樣腺癌32 例，透明細胞癌3 例，漿液性乳頭狀癌3 例，腺鱗癌2 例。

1.2 方法(1)主要儀器和試劑:①化學發(fā)光微粒子免疫分析儀ARCHITECT－i2000(美國雅培公司生產(chǎn));②HE4 試劑盒(美國雅培公司生產(chǎn));③HE4 定標液(美國雅培公司生產(chǎn));④HE4 標準品(美國雅培公司生產(chǎn)，批號:88K00909)。(2)實驗步驟:術前抽取患者肘靜脈血3 ml，置于未加抗凝劑的試管中，無需處理，立即送檢。實驗開始前，將標本放入標記編號的玻璃試管內(nèi)，3 000 轉/min，離心5 min，將吖啶酯類專利衍生物示蹤劑和HE4 抗體包被的類磁微粒子放入ARCHITECT－i2000 化學發(fā)光微粒子免疫分析儀試劑倉相應位置，將待測標本排序后放入反應倉，i2000SR 全自動免疫發(fā)光檢測儀自動檢測HE4 濃度。(3)質量控制:每批做高、中、低值質量控制。

1.3 統(tǒng)計學方法 所有數(shù)據(jù)采用SPSS17.0 軟件處理，計量資料用±s 的形式表示，因組間方差不齊，組間均數(shù)比較采用秩和檢驗。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 HE4 在正常子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜不典型增生、子宮內(nèi)膜癌患者血清中表達情況 正常子宮內(nèi)膜組血清HE4 范圍為(27.7～84.0)pmol/L，均值為(40.3 ±16.2)pmol/L;子宮內(nèi)膜不典型增生組血清HE4 范圍為(41～83)pmol/L，均值為(54.7 ±18.5)pmol/L;子宮內(nèi)膜癌組血清HE4 范圍為(33.9～1040.9)pmol/L，均值為(120.2 ±195.6)pmol/L。子宮內(nèi)膜癌組HE4 水平較正常子宮內(nèi)膜組高，差異具有顯著性(Z=－3.444，P=0.01);子宮內(nèi)膜癌組血清HE4 水平較子宮內(nèi)膜不典型增生組高，差異無統(tǒng)計學意義(Z =－0.845，P =0.398);子宮內(nèi)膜不典型增生組血清HE4 水平較正常子宮內(nèi)膜組高，差異無統(tǒng)計學意義(Z=－1.859，P=0.063)。見表1。

2.2 血清HE4 水平與子宮內(nèi)膜癌患者各臨床病理參數(shù)的關系 血清HE4 水平與子宮內(nèi)膜癌的年齡，組織分級及病理類型無關(Z =－1.671，P =0.095＞0.05;Z =－1.569，P =0.117＞0.05;Z=－1.155，P =0.248＞0.05)，而與手術－病理分期，肌層浸潤深度及淋巴結轉移密切相關(P＜0.05)。Ⅰ－Ⅱ期患者血清HE4 的均值為(67.76 ±57.37)pmol/L，Ⅲ－Ⅳ期患者血清HE4 的均值為(310.14 ±362.06)pmol/L，Ⅰ－Ⅱ期患者血清HE4 水平明顯低于Ⅲ－ Ⅳ期患者(Z =－2.583，P=0.01＜0.05);深肌層浸潤的患者血清HE4 的均值為(335.35 ±355.15)pmol/L，淺肌層浸潤的患者血清HE4 的均值為(62.09 ±30.02)pmol/L，深肌層浸潤的患者血清HE4水平明顯高于淺肌層浸潤的患者(Z =－2.500，P =0.012＜0.05)。有淋巴結轉移的患者血清HE4 的均值為(437.36 ±413.90)pmol/L，無淋巴結轉移的患者血清HE4 的均值為(74.36 ±63.94)pmol/L，有淋巴結轉移的患者血清HE4 水平明顯高于無淋巴結轉移的患者(Z =－3.088，P =0.002＜0.05)。見表2。

表1 3 組患者血清HE4 水平(pmol/L，±s)

表1 3 組患者血清HE4 水平(pmol/L，±s)

組別例數(shù)HE4HE4范圍正常子宮內(nèi)膜組1540.32 ±16.1627.7～84.0子宮內(nèi)膜不典型增生組 1054.73 ±18.4941.1～83.2子宮內(nèi)膜癌組40120.16 ±195.6633.9～1040.9

表2 血清HE4 水平與子宮內(nèi)膜癌患者各臨床病理參數(shù)的關系(pmol/L，±s)

表2 血清HE4 水平與子宮內(nèi)膜癌患者各臨床病理參數(shù)的關系(pmol/L，±s)

臨床病理參數(shù)例數(shù)HE4 水平Z 值P值年齡(歲):≤501156.57 ±26.43－1.671 0.095＞5029150.69 ±232.61手術－病理分期:Ⅰ－Ⅱ2767.76 ±57.37－2.583 0.010Ⅲ－Ⅳ13310.14 ±362.06組織學分級:高23118.75 ±162.29－1.569 0.117中低17125.46 ±230.00肌層浸潤:≤1/22862.09 ±30.02－2.500 0.012＞1/212335.35 ±355.15淋巴轉移:有8437.36 ±413.90－3.088 0.002無2174.36 ±63.94病理類型:子宮內(nèi)膜樣腺癌32113.17 ±187.99－1.155 0.248其他類型8150.16 ±239.97

3 討論

子宮內(nèi)膜癌是女性生殖系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一，目前有關子宮內(nèi)膜癌確切病因及發(fā)病機制尚不清楚，多數(shù)學者認為是遺傳信息的改變，在內(nèi)分泌因素及外界環(huán)境因素的共同作用下逐漸演變的結果。盡管早期子宮內(nèi)膜樣腺癌(Ⅰ型)預后較好，但晚期及特殊類型的子宮內(nèi)膜癌(Ⅱ型)預后很差。晚期及復發(fā)性子宮內(nèi)膜癌的平均生存時間僅12 個月，即使給予輔助治療，仍不能提高中位生存時間［10］。目前診斷性刮宮是婦科一項常用的、重要的輔助診斷方法，也是目前子宮內(nèi)膜癌最有價值的診斷手段，但是無法準確評估病變范圍，因此不能有效的指導治療。而且由于它是盲目性操作，對一些小的或位于宮角的病灶，可能會出現(xiàn)漏診或診斷過度［11］，不適用于大批量患者的篩查。經(jīng)濟可靠無創(chuàng)的血清腫瘤標志物的檢測不僅用于疾病篩查、早期診斷、鑒別診斷、療效判定、預測預后，而且還是隨診的重要指標，人附睪蛋白4(human epididymis gene product 4，HE4)是一種新型的腫瘤標志物，屬于乳清酸性4－二硫化中心(WFDC)蛋白家族，具有疑似胰蛋白酶抑制劑的特性［12-13］。HE4 位于染色體20q12－13.1，基因全長為12 kD 左右，基因編碼一段長度為13 kD 的蛋白，但在其成熟的糖基化形式時，此蛋白大概為20～25 kb，并且包括含有兩個WFDC 結構域的一條單鏈［14］。但近來研究表明HE4 在部分惡性腫瘤的早期診斷及病情監(jiān)測方面具有重要的臨床價值，所以成為當今腫瘤分子生物學的研究熱點之一。本研究中HE4 在正常子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜不典型增生、子宮內(nèi)膜癌患者血清中均有不同程度的表達，表明HE4 蛋白并非腫瘤特異性蛋白。Li J 等［15］研究證明HE4 在子宮內(nèi)膜異位癥患者和健康人血清中均有不同程度的表達，張海榮等［16］報道HE4 在子宮腺肌癥患者和子宮肌瘤患者血清中表達有所不同。盡管HE4 蛋白并非腫瘤特異性蛋白，但是本研究中HE4 水平在正常子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜不典型增生、子宮內(nèi)膜癌患者血清中表達逐漸升高，且子宮內(nèi)膜癌組HE4 水平明顯高于正常子宮內(nèi)膜組(Z=－3.444，P =0.01＜0.05)，因此提示HE4 與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生有關。先前研究已經(jīng)證實子宮內(nèi)膜不典型增生是子宮內(nèi)膜癌的癌前期病變，其癌變率為33%［17］，HE4 表達增高是否能促進不典型增生的子宮內(nèi)膜向內(nèi)膜癌轉化，或者說是子宮內(nèi)膜癌的高危因素?我們認為是值得深入探討的問題。

本實驗中血清HE4 水平與子宮內(nèi)膜癌的手術－病理分期，肌層浸潤深度及淋巴結轉移密切相關(P＜0.05)。子宮內(nèi)膜癌的期別越晚，血清HE4 水平越高，Ⅰ－Ⅱ期患者血清HE4 水平明顯低于Ⅲ－Ⅳ期患者(Z =－2.583，P =0.010＜0.05);深肌層浸潤的患者血清HE4 水平明顯高于淺肌層浸潤的患者(Z=－2.500，P =0.012＜0.05);有淋巴結轉移的患者血清HE4 水平明顯高于無淋巴結轉移的患者(Z =－3.088，P=0.002＜0.05)，即隨著臨床病期進展、組織浸潤和淋巴結轉移，HE4 基因表達水平升高，因此我們可以推測HE4與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)展密切相關。關于HE4 在子宮內(nèi)膜癌患者血清中高表達的原因至今仍不明了。趙瑩珺等［18］在HE4基因轉錄水平進行了研究，闡明了HE4 基因的轉錄活性主要是由轉錄因子Sp1 與位于－71 和－48 的Egr－1 位點結合所介導。先前研究已證實Sp1 是一個普遍存在的轉錄因子［19］，可以受到某些組織特異性因子的調(diào)控，這些因子可以通過與Sp1 形成復合物的形式，促進或阻礙Sp1 與其識別位點的結合，從而實現(xiàn)啟動子調(diào)控的組織特異性［20］。本實驗中HE4 在子宮內(nèi)膜癌患者血清中高表達，我們可以推測Sp1 可能受到子宮內(nèi)膜癌組織特異性因子的影響，引起了HE4 基因轉錄活性的異常，使得其在子宮內(nèi)膜癌患者血清中高表達。

總之，HE4 蛋白作為一種新型的腫瘤標志物正引起越來越多研究者的關注，其在腫瘤發(fā)生、發(fā)展及預后方面的作用正不斷被發(fā)現(xiàn)。但是有關HE4 蛋白的作用機制，作用細節(jié)及受調(diào)節(jié)的因素等研究甚少，還有很多功能仍然沒有被發(fā)現(xiàn)，HE4與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展、浸潤、轉移、復發(fā)的關系，尚需要進一步探討。

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