楊瑞鈺，屈勇剛，李 靜，常軍帥，何高明

(石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，新疆 石河子 832000)

0 引言

乳制品，尤其是牛奶，是人們最基本的食物來(lái)源之一[1]。全球?qū)θ橹破返男枨笕找嬖鲩L(zhǎng)，促使人們需要提高單頭奶牛的平均產(chǎn)奶量。牛奶產(chǎn)量的增加是由于遺傳選擇以及奶牛營(yíng)養(yǎng)和管理改善雙重影響的結(jié)果。影響高產(chǎn)奶量的最大問(wèn)題之一是乳房健康不佳，尤其是奶牛乳房炎。根據(jù)目前的研究表明，奶牛乳房炎的發(fā)病原因多為細(xì)菌感染，常見的致病菌為金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和鏈球菌[2]。有研究顯示，金黃色葡萄球菌感染引發(fā)的奶牛乳房炎常發(fā)生于泌乳高產(chǎn)期的患病奶牛[3]；鏈球菌引發(fā)的奶牛乳房炎常發(fā)生于干乳早期[4]；大腸桿菌引發(fā)的奶牛乳房炎多見于產(chǎn)后泌乳高峰期[5]。本研究擬對(duì)新疆石河子地區(qū)奶牛場(chǎng)引起奶牛乳房炎的病原菌情況展開研究，以期掌握該地區(qū)致病菌及耐藥的分布情況，為奶牛乳房炎治療的新方法奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

血瓊脂平板、LB液體培養(yǎng)基、LB固體培養(yǎng)基、BHI液體培養(yǎng)基、BHI固體培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂平板、高鹽甘露醇培養(yǎng)基和革蘭氏染色液；主要試劑包括牛肉高、瓊脂粉、蛋白胨、氯化鈉等，均為國(guó)產(chǎn)分析純；生化鑒定管和藥敏紙片購(gòu)于杭州天和微生物試劑有限公司，藥敏紙片包括青霉素G、氧氟沙星、卡那霉素、克林霉素、萬(wàn)古霉素、氨芐西林、紅霉素、諾氟沙星、慶大霉素、鏈霉素、復(fù)方新諾明、頭孢噻污、環(huán)丙沙星等。

1.2 方法

1.2.1 奶樣采集

2020年5—7月采集石河子地區(qū)周邊奶牛場(chǎng)確診臨床型奶牛乳房炎的奶牛奶樣，使用滅菌離心管收集，4℃?zhèn)溆?，共采集樣?21份。

1.2.2 病原菌的分離

使用接種環(huán)蘸取奶樣劃線接種于BHI瓊脂平板上，37℃過(guò)夜培養(yǎng)，觀察菌落形態(tài)特點(diǎn)；挑取單個(gè)菌落分別接種于LB瓊脂平板、血瓊脂平板、高鹽甘露醇平板、麥康凱瓊脂平板，37℃培養(yǎng)過(guò)夜；繼續(xù)挑取單個(gè)菌落，進(jìn)行多次純化培養(yǎng)。

1.2.3 病原菌的鑒定

觀察菌落形態(tài)、革蘭氏染色鏡檢，利用生化鑒定管采取不同的生化鑒定方法。

1.2.4 耐藥性試驗(yàn)

采用Kirby-Bauer法檢測(cè)分離菌的藥物敏感性。

2 結(jié)果與分析

2.1 病原菌的形態(tài)和培養(yǎng)特性

金黃色葡萄球菌在LB瓊脂平板上的菌落特性為黃色圓形中等大小，表面光滑濕潤(rùn)、邊緣整齊，在血瓊脂平板上形成濕潤(rùn)、光滑、較大的菌落隆起，表現(xiàn)為明顯的β溶血，鏡檢結(jié)果為革蘭氏陽(yáng)性，呈葡萄串狀排列。大腸桿菌在普通瓊脂平板上形成圓形凸起、光滑、濕潤(rùn)、半透明、灰白色的大菌落，表現(xiàn)為波浪形蔓延生長(zhǎng)，在血瓊脂平板上部分菌株有溶血現(xiàn)象，在麥康凱瓊脂平板上形成紅色菌落，鏡檢結(jié)果為格蘭仕陰性，桿狀，兩端鈍圓。鏈球菌在普通瓊脂平板上不生長(zhǎng)，在血瓊脂平板上形成灰白色、半透明、表面光滑、圓形隆起的小菌落，一般能夠產(chǎn)生α或β溶血。

2.2 生化試驗(yàn)結(jié)果

金黃色葡萄球菌、鏈球菌和大腸桿菌的生化鑒定試驗(yàn)結(jié)果如表1、表2、表3所示。

表1 鏈球菌的生化特性鑒定結(jié)果

表2 鏈球菌生化特性鑒定結(jié)果

表3 大腸桿菌的生化試驗(yàn)結(jié)果

2.3 細(xì)菌分離鑒定結(jié)果

對(duì)121份樣品中分離出的203株病原菌的分離鑒定結(jié)果如下：金黃色葡萄球菌97株、大腸桿菌33株、鏈球菌43株。

2.4 耐藥性結(jié)果

幾種病原菌對(duì)常用抗菌素的耐藥性，具體如表4所示。

表4 抗生素耐藥檢測(cè)結(jié)果

3 討論與分析

本研究主要從患臨床型乳房炎的奶牛奶樣中分離出203株病原菌，對(duì)其進(jìn)行分離鑒定，主要為金黃色葡萄球菌、大腸桿菌及鏈球菌，為引起奶牛乳房炎的主要致病菌，該結(jié)果與其他學(xué)者的研究結(jié)果相似[6-7]。據(jù)不同研究結(jié)果顯示，金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和鏈球菌是分離到最多的菌株。在不同飼養(yǎng)環(huán)境和不同地域的奶牛乳房炎病原菌表現(xiàn)出不同的特點(diǎn)[8]。

不同地區(qū)的病原菌對(duì)相同抗菌藥物所表現(xiàn)出的耐藥性也有不同[9]；同一菌種的不同菌株對(duì)某種藥的耐藥性也有不同。該種情況的出現(xiàn)很大程度上與抗生素的濫用有關(guān)。根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示，該奶牛場(chǎng)的細(xì)菌對(duì)多種不同抗菌素產(chǎn)生了耐藥，出現(xiàn)對(duì)復(fù)方新諾明、青霉素和萬(wàn)古霉素的多重耐藥性。為在實(shí)際生產(chǎn)應(yīng)用中選用合適的抗生素提供了一定的依據(jù)。