吳增光，馮 果，2* ，劉 文，李 瑋，張建鋒，張石宇，鄭雪瑩

(1．貴陽中醫(yī)學(xué)院，貴州貴陽550002;2．天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津300193)

太子參為石竹科植物孩兒參Pseudostellaria heterophylla(Miq．)Pax ex Pax et Hoffm．的干燥塊根，具有益氣健脾、生津潤肺的功效，用于脾虛體倦、食欲不振、病后虛弱、氣陰不足、自汗口渴、肺燥干咳［1］?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，太子參含有氨基酸、多糖、苷類、磷脂類、環(huán)肽類、揮發(fā)油等多種有效成分［2－9］，具有心肌保護作用、增強機體免疫作用、抗氧化作用、鎮(zhèn)咳、抗菌、抗病毒、抗應(yīng)激、抗疲勞、降血糖等多種藥理作用［10－16］。

產(chǎn)地加工是形成中藥品質(zhì)的重要環(huán)節(jié)，不同的加工方法對太子參中主要化學(xué)成分的影響不同，2010年版《中國藥典》一部收載太子參的加工方法為“夏季莖葉大部分枯萎時采挖，洗凈，除去須根，置沸水中略燙后曬干或直接曬干”［1］，各地尚有曬干法、燙后曬干法、蒸后曬干法、陰干法、烘干法等加工方法，太子參產(chǎn)地加工方法的優(yōu)選亟需進一步研究。該研究以皂苷、多糖、氨基酸、水溶性浸出物、醇溶性浸出物為評價指標，采用綜合評分法優(yōu)選太子參的最佳產(chǎn)地加工方法，為太子參的產(chǎn)地加工及質(zhì)量控制提供參考。

1 材料與方法

1．1 儀器 TU-1810PC型紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司)、AE/240型電子天平(上海梅特勒儀器有限公司)、AVY 220型電子天平(日本島津)、SK 8210 HP型超聲波清洗機(上海科導(dǎo)儀器有限公司)、干燥箱(中華人民共和國上海市儀器總廠)。

1．2 藥材與試藥 太子參鮮藥材來源于貴州省施秉縣太子參種植基地，經(jīng)貴陽中醫(yī)學(xué)院李偉副教授鑒定為石竹科植物孩 兒 參 Pseudostellaria heterophylla(Miq．)Pax ex Pax et Hoffm．的干燥塊根;葡萄糖對照品(貴州迪大生物科技有限責任公司，批號GZDD-0774)、精氨酸對照品(貴州迪大生物科技有限責任公司，批號GZDD-0886，供含量測定用)、人參皂苷Rg1對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號110703-201529，供含量測定用);其余試劑為分析純，水為蒸餾水。

1．3 產(chǎn)地加工方法

1．3．1 陰干法。采太子參鮮藥材，潔凈后置陰涼通風處陰干。

1．3．2 曬干法。采太子參鮮藥材，潔凈后置太陽下曬干。

1．3．3 烘干法。包括2種:①采太子參鮮藥材，潔凈后及時置干燥箱內(nèi)于40、60、80、100℃烘干;②采太子參鮮藥材，潔凈后分別放置1、2、3、4、5 d 后，于60 ℃烘干。

1．3．4 蒸法。包括2種:①太子參鮮藥材蒸透后，分別置干燥箱內(nèi)于40、60、80、100 ℃烘干;②太子參鮮藥材蒸 10、15、20 min后于60℃烘干。

1．3．5 燙法。可分為3 種方法:①分別加4、6、8、10、12 倍量水燙透后，于60℃烘干。②加8倍量水燙3 min后分別于40、60、80、100 ℃ 烘干;③加 8 倍量水分別燙 5、9 min，于60℃烘干。

1．4 指標成分的提取

1．4．1 皂苷的提取。精密稱取太子參粗粉1 g，加入10倍量水飽和正丁醇后，浸泡12 h，50℃下超聲提取40 min，過濾至25 ml容量瓶中，加水飽和正丁醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

1．4．2 多糖的提取。精密稱取1 g用10 ml蒸餾水浸泡24 h，超聲提取2次，每次30 min，過濾，棄去殘渣，合并濾液濃縮，用95%乙醇靜置沉淀，過濾得到沉淀，將沉淀溶于丙酮中充分洗滌靜置過夜，沉淀再次溶于無水乙醇中充分洗滌靜置，待沉淀完全后將沉淀物置水浴鍋中加熱干燥，得到太子參多糖粗品。

1．4．3 氨基酸的提取。取太子參粉末0．05 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加70%乙醇25 ml，超聲處理45 min，放冷，搖勻，濾過，收集續(xù)濾液，即得供試品溶液。

1．5 指標成分的含量測定

1．5．1 皂苷的含量測定。

1．5．1．1 對照品溶液的制備。精密稱取人參皂苷Rg1對照品15 mg于10 ml容量瓶中，加入少量甲醇溶解并定容，即得1．5 mg/ml的對照品溶液。

1．5．1．2 線性關(guān)系考察。精密吸取標準溶液 0．2、0．4、0．5、0．6、0．8、1．0 ml，分別置于 10 ml具塞試管中，以1 ml甲醇作為空白，于沸水浴下?lián)]去溶劑，精密加入5%的香草醛冰醋酸溶液(用前臨時配制)0．2 ml和高氯酸0．8 ml混勻，密塞。置60℃水浴中加熱15 min后取出，用流水冷卻。然后精密加入冰醋酸5 ml，搖勻，于560 nm波長處測定吸光度，以吸光度值為縱坐標、濃度為橫坐標，繪制標準曲線。

1．5．1．3 樣品測定。按“1．4．1”制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液0．3 ml，顯色后于紫外可見分光光度計測定吸光度，計算其含量。

1．5．2 多糖的含量測定。

1．5．2．1 對照品溶液的制備。精密稱取葡萄糖對照品1．36 mg，置于10 ml容量瓶中加水定容至刻度，搖勻即得濃度為0．136 mg/ml的葡萄糖對照品溶液。

1．5．2．2 線性關(guān)系考察。分別精密吸取 0．2、0．4、0．6、0．8、1．0、1．2 ml葡萄糖標準溶液于試管中，依次加入蒸餾水使終體積為2．0 ml，蒸餾水作空白對照。各管加入苯酚試液0．5 ml，搖勻，再滴加濃硫酸各 4．0 ml，沸水浴 15 min，取出放至室溫，于490 nm處測定吸光度。以吸光度值為縱坐標、濃度為橫坐標，繪制標準曲線。

1．5．2．3 樣品測定。按“1．4．2”制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液1．0 ml，顯色后于紫外可見分光光度計測定吸光度，計算其含量。

1．5．3 氨基酸的含量測定。

1．5．3．1 對照品溶液的制備。精密稱取精氨酸對照品5．02 mg置于10 ml容量瓶中加水至刻度，搖勻即得濃度為0．502 mg/ml精氨酸對照品溶液。

1．5．3．2 線性關(guān)系考察。精密吸取對照品溶液 0．5、1．0、1．5、2．0、2．5、3．0 ml于 10 ml量瓶中，加水至同體積，依次加入醋酸-醋酸鈉緩沖液(pH=5．4)2．0 ml和3%茚三酮乙二醇溶液2．0 ml，沸水浴15 min，取出，加50%異丙醇至刻度，搖勻;另以3．0 ml水為空白，同法操作。在570 nm處測定吸光度，以吸光度值為縱坐標、濃度為橫坐標，繪制標準曲線。

1．5．3．3 樣品測定。分別取各樣品按“1．4．3”制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液1．0 ml，顯色后于紫外可見分光光度計測定吸光度，計算其含量。

1．5．4 浸出物的測定。

1．5．4．1 水溶性浸出物。按2010年版《中國藥典》附錄XA水溶性浸出物測定方法(熱浸法)對樣品進行測定，計算水溶性浸出物的量。

1．5．4．2 醇溶性浸出物。按2010年版《中國藥典》附錄XA醇溶性浸出物測定方法(熱浸法)對樣品進行測定，計算醇溶性浸出物的量。

1．6 產(chǎn)地加工方法的優(yōu)選 該試驗采用多指標綜合評分法［17］優(yōu)選太子參的產(chǎn)地加工方法，以皂苷、多糖、氨基酸、水溶性浸出物、醇溶性浸出物含量為評價指標，且含量都是越高越好。因此在數(shù)據(jù)處理時引用一個綜合指標“隸屬度”，即指標隸屬度=(指標值－指標最小值)/(指標最大值－指標最小值);根據(jù)各成分在太子參中的重要性，考慮到皂苷和多糖各占30%、氨基酸占20%、水溶性浸出物和醇溶性浸出物各占10%的權(quán)重，綜合分數(shù)=皂苷隸屬度×30%+多糖隸屬度×30%+氨基酸隸屬度×20%+水溶性浸出物隸屬度×10%+醇溶性浸出物隸屬度×10%，滿分為1．00，計算各樣品的綜合評分值。

2 結(jié)果與分析

2．1 含量測定方法學(xué)考察結(jié)果

2．1．1 皂苷含量。以吸光度值為縱坐標、濃度為橫坐標，繪制標準曲線，皂苷含量的回歸方程為:A=29．088C－0．017 6，相關(guān)系數(shù)r=0．999 5，表明人參皂苷Rg1在0．01 ～0．16 mg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好;皂苷含量測定的精密度試驗、穩(wěn)定性試驗、重復(fù)性試驗的 RSD 分別為0．8%、1．2%、1．7%，均小于 3%;加樣回收率試驗，其平均回收率為98．66%，RSD為2．8%。

2．1．2 多糖含量。以吸光度值為縱坐標、濃度為橫坐標，繪制標準曲線，多糖含量的回歸方程為:A=5．378 3C－0．159 3，相關(guān)系數(shù)r=0．999 2，表明葡萄糖在0．041 8 ～0．251 0 mg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好;多糖含量測定的精密度試驗、穩(wěn)定性試驗、重復(fù)性試驗的RSD 分別為0．87%、0．94%、2．16%，均小于3%;加樣回收率試驗，其平均回收率為98．66%，RSD為2．06%。

2．1．3 氨基酸含量。以吸光度值為縱坐標、濃度為橫坐標，繪制標準曲線，氨基酸含量的回歸方程為:A=11．493C－0．041 9，相關(guān)系數(shù)r=0．9994，表明精氨酸在0．0251 ～0．1506 mg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。氨基酸含量測定的精密度試驗、穩(wěn)定性試驗、重復(fù)性試驗的 RSD 分別為 0．09%、1．75%、2．61%，均小于3%;加樣回收率試驗，其平均回收率為100．02%，RSD為1．3%。

2．2 綜合評分法優(yōu)選最佳產(chǎn)地加工方法 按“1．5”項下各評價指標的含量測定方法對各樣品的指標成分進行測定，并按“1．6”項下方法計算其綜合評分值。從表1可得出，1號樣品的產(chǎn)地加工方法為陰干法，綜合評分值為0．401 5;2號樣品為曬干法，綜合評分值為0．657 1;3～12號樣品為烘干法，其8號樣品的綜合評分值最高，為0．662 9;13～19號樣品為蒸法，其19號樣品的綜合評分值最高，為0．746 4;20～30號樣品為燙法，其24號樣品的綜合評分值最高，為0．601 6。在不同的產(chǎn)地加工方法中，以綜合評分值的大小排序，從大到小的順序為蒸法(0．746 4)﹥烘干(0．662 9)﹥曬干(0．657 1)﹥燙法(0．601 6)﹥陰干(0．401 5)，表明太子參的最佳產(chǎn)地加工方法為蒸法，蒸法的最佳工藝為取太子參鮮藥材，蒸20 min，于60℃烘干。

表1 不同產(chǎn)地加工方法對太子參藥材質(zhì)量的影響(n=3)

3 討論

太子參中皂苷類成分容易受生物活性酶的影響;多糖類成分難溶或不溶于水，但容易被水解成低聚糖、單糖;氨基酸類成分易溶于水，且熱穩(wěn)定性差，長時間加熱會導(dǎo)致成分的損失。故不同產(chǎn)地加工方法對太子參藥材的質(zhì)量有較大的影響，在產(chǎn)地加工過程中，應(yīng)盡快滅活新鮮太子參中的酶的活性，嚴格控制干燥溫度和時間是太子參產(chǎn)地加工的關(guān)鍵技術(shù)所在，也是影響太子參質(zhì)量的主要因素。

多成分、多指標控制中藥材質(zhì)量已成為發(fā)展新趨勢，是中藥現(xiàn)代化發(fā)展進程中的必然要求。該研究以太子參皂苷、多糖、氨基酸、水溶性浸出物、醇溶性浸出物作為指標成分，采用綜合評分法對太子參的產(chǎn)地加工方法進行優(yōu)選，所優(yōu)選出的方法科學(xué)合理，其加工工藝簡單、耗時短、加工出的藥材色澤和品質(zhì)好，綜合評分值較高，使太子參的質(zhì)量從源頭上得到了控制。該產(chǎn)地加工方法的優(yōu)選對企業(yè)及藥農(nóng)的規(guī)?；?、產(chǎn)業(yè)化加工太子參藥材具有一定的指導(dǎo)意義。

［1］國家藥典委員會．中華人民共和國藥典:2010年一部［S］．北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:62－63．

［2］鐘方曉，彭廣．山東太子參氨基酸和微量元素分析［J］．時珍國醫(yī)國藥，1997，8(3):223 －224．

［3］劉訓(xùn)紅，闞毓銘，王玉璽，等．太子參多糖的研究［J］．中草藥，1993，24(3):119－121．

［4］王吉星，徐綏緒，邱峰，等．太子參化學(xué)成分的研究［J］．中草藥，1992，23(6):331，336．

［5］TAN N H，ZHOU J，CHEN C X，et al．Cyclopeptides from the roots of Pseudostellaria heterophylla［J］．Phytochemistry，1993，32(5):1327 －1330．

［6］MORITA H，KAYASHITA T，TAKEYA K，et al．Cyclic peptides from higher plants，Part 15．Pseudostellarin H，a new cyclic octapeptide from Pseudostellaria heterophylla［J］．JNat Prod，1995，58(6):743 －947．

［7］MORITA H，KAYASHITA T，TAKEYA K，et al．Crystal and solution forms of a cyclic heptapeptide，pseudostellarin D［J］．Tetrahedron，1995，51(46):12539－12548．

［8］馬陽，侯婭，鄒立思，等．不同種質(zhì)太子參核苷類成分QTRAP LC-MS/MS 分析［J］．中藥材，2015，38(4):711 －714．

［9］劉義寧，易駿，陳體強．太子參揮發(fā)油化學(xué)成分研究［J］．時珍國醫(yī)國藥，2009，20(1):50 －51．

［10］徐雪琴，龍全江，趙劍．太子參化學(xué)成分、藥理作用與產(chǎn)地加工技術(shù)研究［J］．現(xiàn)代中藥研究與實踐，2014，28(4):73 －75．

［11］龔祝南，王崢濤，余國奠，等．8個不同產(chǎn)地太子參對脾虛及免疫功能的影響［J］．中藥材，2004，24(4):281 －282．

［12］劉維俊，黃光才，李漢寶，等．太子參補益作用機理的探討［J］．南京部隊醫(yī)藥，1992(5):51－58．

［13］SHENG R，XU X X，TANG Q，et al．Polysaccharide of Radix Pseudostellariae improves chronic fatigue syndrome induced by poly I:C in mice［J］．Evid Based Complement Alternat Med，2011，8(4):1 －10．

［14］ZHANGCL，ZHENGX X．Effects of polysaccharides from Pseudostellaria heterophylla on exercise endurance capacity and oxidative stress in forced swimming rats［J］．Sci Res Essays，2011，6(11):2360 －2365．

［15］PANG W，LIN S，DAI Q，et al．Antitussive activity of Pseudostellaria heterophylla(Miq．)Pax extracts and improvement in lung function via adjustment of multi－ cytokine levels［J］．Molecules，2011，16(4):3360 －3370．

［16］姚先梅，段賢春，吳健，等．太子參多糖對實驗性糖尿病大鼠血糖、血脂代謝和腎臟病理的影響［J］．安徽醫(yī)藥，2014，18(1):23 －26．

［17］陳會英，周衍平．綜合評分法的改進與應(yīng)用［J］．農(nóng)業(yè)系統(tǒng)科學(xué)與綜合研究1996，12(1):37 －41．