李秦晉，魏寶陽(yáng)

(1．湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 生物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙410128;2．湖南體育職業(yè)學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙410019)

吳茱萸始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為中品，性熱，味辛、苦，有小毒，具溫中散寒、理氣止痛、降逆止嘔、助陽(yáng)止瀉的功效［1］，是蕓香科植物吳茱萸Evodia rutaecarpa(Juss．)Benth．、石 虎Evodiarutaecarpa(Juss．)Benth．var．officinalis(Dode)Huang或疏毛吳茱萸Evodia rutaecarpa(Juss．)Benth．var．bodinieri(Dode)Huang的干燥近成熟果實(shí)。8-11月果實(shí)未開裂時(shí)，剪下果枝，曬干或低溫干燥，除去枝、葉、果梗等雜質(zhì)即得［2］。吳茱萸俗稱“辟邪翁”，氣味獨(dú)特，有殺菌、凈化空氣作用，其生物堿有抗腫瘤、抗過(guò)敏等多種生物活性［3-5］。但各生產(chǎn)基地吳茱萸品種較多，品質(zhì)差別大［6］，且近年來(lái)，吳茱萸作為經(jīng)濟(jì)類中藥材被廣泛栽種，缺乏合理規(guī)劃和科學(xué)指導(dǎo)，非道地產(chǎn)區(qū)吳茱萸藥材品質(zhì)較差，市場(chǎng)價(jià)格連續(xù)十年走低，道地產(chǎn)區(qū)受其影響，栽培面積大量萎縮。近幾年吳茱萸價(jià)格有所回升，從20元/kg升至40元/kg，勢(shì)必又會(huì)引起新一輪的擴(kuò)種，為了更好的指導(dǎo)生產(chǎn)實(shí)踐，湖南中醫(yī)藥大學(xué)李順祥團(tuán)隊(duì)自2007年始對(duì)全國(guó)不同產(chǎn)區(qū)吳茱萸開展了深入調(diào)查并進(jìn)行了大量的研究工作［7-12］，本文分析各地吳茱萸藥材吳茱萸堿等主要有效成分的含量，分析各地吳茱萸品種、產(chǎn)地對(duì)藥材品質(zhì)的影響。

1 實(shí)驗(yàn)材料與方法

1．1 同一品種不同產(chǎn)地材料

2009、2010年采集自貴州銅仁，廣西桂林、柳城，湖南新晃、婁底、瀏陽(yáng)、湘鄉(xiāng)，湖北咸豐，江西萬(wàn)載、樟樹，浙江溫州等地(均為2003年栽種)，采集方法:采用五點(diǎn)采樣法，采集10株吳茱萸的部分果實(shí)混合。并經(jīng)湖南省中醫(yī)院研究院謝昭明研究員鑒定，其中包括吳茱萸Euodia rutaecarpa(Juss．)Benth．，疏毛吳茱萸Euodia rutaecarpavar．bodinieri和石虎Euodia rutaecarpavar．officinalis，分類整理見表1。

表1 不同產(chǎn)地吳茱萸樣品采集Tab．1 The locations and times for harvesting of Euodia rutaecarpa

1．2 同一產(chǎn)地不同品種材料

選取2010年采集的貴州銅仁(見表一帶“*”者)、湖南瀏陽(yáng)(見表一帶“#”者)地區(qū)的石虎、疏毛吳茱萸、吳茱萸樣品進(jìn)行分析。

1．3 不同采收年份材料

選取貴州銅仁、湖南新晃、湖南瀏陽(yáng)三個(gè)產(chǎn)區(qū)(均為2003年栽種)的石虎樣品，采集年份從2007年(四年樹齡)到2010年(八年樹齡)的同一成熟程度，采用五點(diǎn)采樣法隨機(jī)采集4批材料。．

1．4 儀器與試劑

Agilent 1100高效液相色譜儀;電子分析天平(METTLER AE240);HS-3120超聲清洗器(江蘇漢邦科技有限公司);吳茱萸堿對(duì)照品(批號(hào):110802-200505)，吳茱萸次堿對(duì)照品(批號(hào):0801-9702)，吳茱萸內(nèi)酯對(duì)照品(批號(hào)8002200102)均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所;乙腈(HPLC級(jí))(Honeywell);水為純凈水(杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司);乙醇(AR)(湖南匯虹試劑有限公司)。

1．5 實(shí)驗(yàn)方法

2007年(四年樹齡)至2010年(八年樹齡)樣品的含量在2010年9月一次測(cè)量，采用的方法是參考袁等［7］、蔡等［8］建立的實(shí)驗(yàn)方法。

1．5．1 供試品溶液的制備 取本品粉末(過(guò)三號(hào)篩)約0．5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入80%乙醇25 mL，稱定重量，浸泡1 h，超聲處理(功率100 W，頻率40 kHz)40 min，放冷，再稱定重量，用80%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

1．5．2 對(duì)照品溶液的制備 參照《中國(guó)藥典》2010

年版取吳茱萸堿對(duì)照品、吳茱萸次堿對(duì)照品、吳茱萸內(nèi)酯對(duì)照品適量，精密稱定，分別加甲醇制成每1 mL含吳茱萸堿0．15 mg、吳茱萸次堿0．1 mg、含吳茱萸內(nèi)酯0．7 mg的溶液。

1．5．3 色譜條件 色譜柱為日本資生堂公司CAPCELLPAK MGC18柱(4．6 mm×150 mm，5μm)。以乙腈-水-四氫呋喃-冰醋酸(41∶59:1∶0．2)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為225 nm。

1．5．4 吳茱萸堿、吳茱萸次堿、吳茱萸內(nèi)酯的含量測(cè)定 將吳茱萸堿、吳茱萸次堿、吳茱萸內(nèi)酯對(duì)照品儲(chǔ)備液稀釋5、10、20、40、80倍，其中吳茱萸堿和吳茱萸次堿標(biāo)準(zhǔn)液混合在一起，各取50μL，用定量閥(20μL)進(jìn)樣，測(cè)定峰面積。以進(jìn)樣濃度C為橫坐標(biāo)(x)，峰面積A為縱坐標(biāo)(y)進(jìn)行線性回歸，構(gòu)建的回歸方程。按樣品處理的方法處理好樣品，分別測(cè)定各批樣品的含量。

2 結(jié)果與分析

2．1 吳茱萸主要成分含量檢測(cè)結(jié)果

吳茱萸堿、吳茱萸次堿、吳茱萸內(nèi)酯的檢測(cè)的回歸方程y為峰面積，x為檢測(cè)物質(zhì)的濃度(見表2)，從R值可以看出，各回歸方程呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

吳茱萸堿、吳茱萸次堿、吳茱萸內(nèi)酯的標(biāo)樣和吳茱萸樣品的檢測(cè)色譜圖見圖1。

從圖3的樣品峰可以看出，樣品的分離效果較理想，用該條件分析主要成分的含量是可行的。

2．2 同一品種不同產(chǎn)地吳茱萸的主要成分含量測(cè)定結(jié)果

同一品種不同產(chǎn)地的吳茱萸樣品，其吳茱萸堿、吳茱萸次堿、吳茱萸內(nèi)酯的含量測(cè)定(重復(fù)3次)結(jié)果見圖2，圖3。從圖2和圖3可以看出，石虎品種在不同地區(qū)生長(zhǎng)其藥材成分含量差異較大，銅仁地區(qū)，新晃地區(qū)的茱萸堿、吳茱萸次堿和吳茱萸內(nèi)酯的含量最高，而在瀏陽(yáng)地區(qū)稍低，在萬(wàn)載地區(qū)為最低，體現(xiàn)了強(qiáng)烈的地區(qū)差異。作為道地產(chǎn)區(qū)的貴州銅仁，湖南新晃可能是其最適宜生長(zhǎng)區(qū)，而江西萬(wàn)載地區(qū)，由于海拔、溫度等環(huán)境因子的不同，有效成分含量很低。

疏毛吳茱萸吳茱萸堿、吳茱萸次堿、吳茱萸內(nèi)酯的含量以廣西柳城、桂林兩地的含量最高，而在銅仁，湖南婁底地區(qū)的含量一般，在湖南瀏陽(yáng)，江西樟樹的含量均較低，也出現(xiàn)了較大的地區(qū)差異性。吳茱萸五個(gè)地區(qū)的樣品的吳茱萸堿、吳茱萸次堿、吳茱萸內(nèi)酯的含量都較低，以湖北咸豐、湖南湘鄉(xiāng)稍高，浙江溫州最低，但含量差異不大。與石虎、疏毛吳茱萸相比，吳茱萸含量低，地區(qū)間差異小，其道地產(chǎn)區(qū)不明顯。

圖1 樣品含量測(cè)定色譜圖Fig．1 Chromatograms of samples

圖2 同一品種不同產(chǎn)地吳茱萸吳茱萸堿、吳茱萸次堿的含量分析Fig．2 Evodiamine and Rutaecarpine contents analysis of Fructus Evodiae of the same species from different habitats

侯曉虹［13］等對(duì)34種吳茱萸中吳茱萸堿和吳茱萸次堿的含量進(jìn)行了測(cè)定，發(fā)現(xiàn)廣西上林地區(qū)的含量較高;張雪琴等［14］的研究也表明，銅仁及廣西的含量較高;宋亞芳等［15］的一測(cè)多評(píng)法分析結(jié)果也顯示來(lái)自貴州等道地產(chǎn)區(qū)的吳茱萸成分含量較高，與該研究結(jié)果基本一致。吳茱萸的含量的高低還受到一些人為因素的影響，如，浙江溫州地區(qū)的吳茱萸含量最低，當(dāng)?shù)厮庌r(nóng)一般是吳茱萸花落后一周內(nèi)進(jìn)行采集，吳茱萸果實(shí)粒小、顏色綠，市場(chǎng)上較走俏，但分析發(fā)現(xiàn)其有效成分含量較低，這可能與采收過(guò)早有關(guān)。

2．3 同一產(chǎn)地不同品種吳茱萸的主要成分含量測(cè)定結(jié)果

對(duì)同一產(chǎn)地的不同品種的吳茱萸藥材含量進(jìn)行分析(重復(fù)3次)，結(jié)果見表3。比較同一生態(tài)條件下不同品種的含量差異，更能有效比較不同品種的差別，有利于對(duì)更適宜的中藥材品種進(jìn)行選擇。

由圖可見，銅仁地區(qū)作為道地產(chǎn)區(qū)，三個(gè)品種中以石虎的含量最高，而吳茱萸的含量最低。瀏陽(yáng)地區(qū)的含量分析揭示了相同的趨勢(shì)，其石虎品種含量最高，而吳茱萸含量最低?？梢娫谶@兩個(gè)地區(qū)，栽培石虎品種可能更加合適，其次是疏毛吳茱萸品種。市場(chǎng)上有三種規(guī)格的吳茱萸藥材，即小花、中花、大花，以小花品質(zhì)較好。調(diào)查發(fā)現(xiàn)，小花主要是石虎品種，而大花主要是吳茱萸品種，通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)，作為小花的石虎，其有效成分含量比大花的吳茱萸含量高。

圖3 同一品種不同產(chǎn)地吳茱萸吳茱萸內(nèi)酯的含量分析Fig．3 Evodine content analysis of Fructus Evodiae of the same species from different habitats

表3 同一產(chǎn)地不同品種吳茱萸藥材的含量分析Tab．3 Contents analysis of Fructus Evodiae of different species from the same habitats

2．4 不同采收年份的含量測(cè)定結(jié)果與分析

2007年至2010年銅仁、新晃、瀏陽(yáng)的石虎樣品含量測(cè)定情況(重復(fù)3次)見圖4，銅仁地區(qū)的石虎樣品，2009年含量最高，2008年含量最低，據(jù)調(diào)查發(fā)現(xiàn)2008年由于冰凍天氣，銅仁的吳茱萸植株普遍受損，許多枝條被冰雪壓斷，這一年的含量比較低;而2010年基地?zé)o人管理，水肥供應(yīng)不足，甚至吳茱萸成熟季節(jié)無(wú)人采收，含量較2009年低。新晃地區(qū)情況與銅仁較類似，但植株大多生長(zhǎng)在農(nóng)家土地邊上，水肥較銅仁好，含量平均較高。瀏陽(yáng)地區(qū)石虎的含量呈現(xiàn)增加趨勢(shì)，該地2003年引種栽培，有效成分含量有隨樹齡增加而升高的趨勢(shì)，在2009年，2010年含量均較高，可見石虎在栽種六年后(即2009年)成分含量達(dá)到較高的水平。

圖4 不同年份石虎吳茱萸堿和吳茱萸次堿含量分析Fig．4 Evodiamine and Rutaecarpine contents analysis of Fructus Evodiae in year of 2007 to 2009

3 討論

3．1 同一品種不同產(chǎn)地的差異

石虎，疏毛品種在不同產(chǎn)區(qū)其藥材成分含量差異較大。石虎在銅仁地區(qū)，新晃地區(qū)的含量最高，作為道地產(chǎn)區(qū)的貴州銅仁，湖南新晃可能是其最適宜生長(zhǎng)區(qū)。疏毛吳茱萸品種以廣西柳城、桂林兩地的含量最高，判斷廣西地區(qū)最適宜疏毛吳茱萸生長(zhǎng)，為其適宜產(chǎn)區(qū)。不同產(chǎn)地的差異大可能是道地性的一個(gè)表征，即道地產(chǎn)區(qū)含量高，非道地產(chǎn)區(qū)含量低。吳茱萸品種在不同地區(qū)其有效成分差異不大，且含量較石虎、疏毛吳茱萸低，吳茱萸不像石虎、疏毛一樣有明顯的地區(qū)差異性。

3．2 同一產(chǎn)地不同品種的差異

在同一產(chǎn)地，不同品種有效成分含量差異明顯，因此作為特定產(chǎn)區(qū)，應(yīng)選擇最適宜栽培的品種，如銅仁，瀏陽(yáng)地區(qū)以石虎的成分含量最高，因此其適宜栽培品種是石虎。在特定產(chǎn)區(qū)選擇合適的品種，有利于藥材的品質(zhì)和質(zhì)量保證。

3．3 不同年份含量差異

2007年至2010年對(duì)銅仁、新晃、瀏陽(yáng)的石虎進(jìn)行跟蹤調(diào)查發(fā)現(xiàn)，瀏陽(yáng)地區(qū)石虎的有效成分隨樹齡增加而增加，成分含量較高的時(shí)期為栽種五年后的果實(shí);銅仁，新晃地區(qū)的變化沒(méi)有規(guī)律，但可以判斷天氣的影響較大，如2008年遭受冰凍災(zāi)害，這兩個(gè)地區(qū)的含量降低。同時(shí)管理情況也對(duì)成分影響較大，如2010年管理情況較差，含量較低。吳茱萸藥材，如果管理不好，其掛果少，掛果小，產(chǎn)量低，同時(shí)有效成分含量也低。

3．4 吳茱萸采收加工對(duì)品質(zhì)的影響

吳茱萸不同產(chǎn)區(qū)由于栽培歷史與天氣等原因，各自形成一種采收習(xí)慣。通過(guò)實(shí)地考察發(fā)現(xiàn)，浙江溫州，建德等地區(qū)，其采收時(shí)間較早，一般在7月中旬采完，藥材色澤嫩綠，顆粒小，在市場(chǎng)上價(jià)格處于中上水平，但成分含量相對(duì)較低。江西樟樹等地的吳茱萸栽培面積廣，采收期一般在8月上旬，果實(shí)采收后曬干，其顏色黃綠，氣味芬芳，盡管其有效成分相對(duì)其它地區(qū)較低，但在市場(chǎng)上極為走俏。而銅仁，新晃等地區(qū)，由于處于山地，且海拔高，其采收期一般在8月中旬，果實(shí)略顯暗色;廣西柳城的吳茱萸，藥農(nóng)一般在農(nóng)歷8月15日左右采摘，如我們調(diào)查的吳家樹先生種植的吳茱萸(主要是疏毛品種)，在中秋節(jié)采摘，此時(shí)吳茱萸果實(shí)呈扁形，心皮分成明顯的五瓣，果實(shí)表面粗糙，顏色較枯暗，雖然此時(shí)期吳茱萸堿等有效成分含量較高，但因?yàn)樗幉某缮缓茫诔鍪壑兴幧滩辉纲?gòu)買。

3．5 吳茱萸品質(zhì)的道地性分析

吳茱萸道地性即指產(chǎn)地的道地性，同時(shí)也是品種的道地性［16］。不同產(chǎn)地的同一品種差異大，如石虎在貴州地區(qū)品質(zhì)好。同一產(chǎn)地的不同品種的差異也較大，如銅仁、婁底的三個(gè)不同品種差異明顯。因此在考察吳茱萸道地性時(shí)，要選擇吳茱萸某一個(gè)品種并從幾個(gè)特定產(chǎn)區(qū)來(lái)分析其道地性。另外，各地采收加工的習(xí)慣對(duì)藥材品質(zhì)的影響也不容忽視。

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