楊建林 李 倩 韓 鈺 何 玲 吳紅艷 曹春雨 王艷林

(三峽大學(xué)分子生物學(xué)研究所，宜昌 443002)

多胺是廣泛存在于生物組織中的一類帶多價(jià)正電荷的脂肪族小分子化合物，高多胺含量是腫瘤快速生長所必需的條件之一［1］。鳥氨酸脫羧酶(Ornithine decarboxylase，ODC)是多胺合成的限速酶，其活性對(duì)調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)多胺水平起重要作用。細(xì)胞內(nèi)同時(shí)存在一種ODC 抑制蛋白，即鳥氨酸脫羧酶抗酶(Ornithine decarboxylase antizyme，OAZ)，新近研究發(fā)現(xiàn)，OAZ 活性本身又受另一蛋白因子即鳥氨酸脫羧酶抗酶抑制因子(Ornithine decarboxylase antizyme inhibitor，OAZI)的抑制，上述三者共同構(gòu)成ODC 活性調(diào)節(jié)的反饋環(huán)［2］。在OAZI 蛋白家族中，OAZI-1是發(fā)揮調(diào)控作用的主要成員，它在蛋白水平上競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合OAZ，釋放ODC/OAZ 復(fù)合物中的ODC 并使后者活化，從而影響多胺代謝［3］。本研究的前期工作發(fā)現(xiàn)，高表達(dá)OAZI-1 對(duì)黑色素瘤B16-F1 細(xì)胞在接種小鼠皮下成瘤有顯著性抑制作用，同時(shí)接種小鼠體內(nèi)產(chǎn)生對(duì)再次接種的同種腫瘤細(xì)胞的免疫殺傷活性，提示高表達(dá)OAZI-1 可能增加了腫瘤細(xì)胞的免疫原性。巨噬細(xì)胞(Macrophage，M)和樹突狀細(xì)胞(Dendritic cells，DC)是機(jī)體內(nèi)功能強(qiáng)大的抗原提呈細(xì)胞，巨噬細(xì)胞和未成熟的DC 具有攝取和加工抗原的功能，而成熟的DC 則能有效激活效應(yīng)T 細(xì)胞，誘導(dǎo)機(jī)體免疫應(yīng)答發(fā)生。本研究中，我們?cè)诩?xì)胞水平上分析了小鼠腹腔巨噬細(xì)胞、小鼠骨髓來源的DC對(duì)高表達(dá)OAZI-1 的B16-F1 腫瘤細(xì)胞的吞噬作用，同時(shí)檢測(cè)了上述吞噬過程中對(duì)DC 成熟的促進(jìn)作用，以及DC 被刺激成熟后能夠有效活化T 細(xì)胞的效率，由此驗(yàn)證小鼠B16-F1 細(xì)胞在表達(dá)OAZI-1 后，能否更有效地被免疫吞噬細(xì)胞所吞噬，并活化DC從而遞呈抗原，有效激活機(jī)體抗腫瘤免疫應(yīng)答。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 真核表達(dá)載體pCNDA3.1(+)和pCNDA3.1(+)-OAZI-1 由本研究小組構(gòu)建、保存;小鼠黑色素瘤B16-F1 細(xì)胞從中國培養(yǎng)物典藏中心(武漢)購買;LipofectamineTM2000 轉(zhuǎn)染試劑、TRIzol RNA 純化試劑為Invitrogen 公司產(chǎn)品;預(yù)染標(biāo)準(zhǔn)分子量蛋白Marker-441、dNTP、RT-PCR及PCR 試劑盒為Fermentas 公司產(chǎn)品;抗β-actin 單克隆抗體為Santa Cruz 公司產(chǎn)品;兔抗鼠OAZI-1 多克隆抗體為Proteintech Group 公司產(chǎn)品;辣根過氧化物酶(Horse radish peroxidase，HRP)標(biāo)記的山羊抗兔IgG-HRP 為Jackson 公司產(chǎn)品;RPMI1640 細(xì)胞培養(yǎng)基、胎牛血清、小牛血清、胰酶、DMSO 等均為Gibco 公司產(chǎn)品;各種熒光標(biāo)記抗體(PE 標(biāo)記的抗小鼠CD11C 抗體、PE 標(biāo)記的抗小鼠CD11b 抗體、PE 標(biāo)記的抗小鼠CD40 抗體、PE 標(biāo)記的抗小鼠CD80 抗體、PE 標(biāo)記的抗小鼠CD86 抗體)均為eBioscence 公司產(chǎn)品;重組小鼠GM-CSF 細(xì)胞因子、重組小鼠IL-4 和重組小鼠IL-2 細(xì)胞因子為Peprotech 公司產(chǎn)品;BALB/c 小鼠，雌性，4～6 周齡，質(zhì)量(18 ±2)g 購自三峽大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng)、質(zhì)粒轉(zhuǎn)染及高表達(dá)細(xì)胞株篩選 用含10%小牛血清的RPMI1640 培養(yǎng)基常規(guī)方法培養(yǎng)小鼠黑色素瘤B16-F1 細(xì)胞。用脂質(zhì)體LipofectamineTM2000 法分別將pcNDA3.1(+)-OAZI-1 和對(duì)照質(zhì)粒pcNDA3.1(+)轉(zhuǎn)染至對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞內(nèi)，隨后用400 mg/ml G418 篩選陽性克隆，將篩選出的陽性克隆細(xì)胞株擴(kuò)大培養(yǎng)后收集細(xì)胞，TRIzol 試劑法提取RNA，M-mlV 反轉(zhuǎn)錄酶將mRNA 反轉(zhuǎn)錄為cDNA，以此cDNA 為模板，通過PCR 反應(yīng)鑒定細(xì)胞中OAZI-1 基因的表達(dá)水平。OAZI-1 引物序列為5'-GAAGTTTGGCACTACACTGAAG-3'(正向)和5'-CCACCGATGTCTAACATGTTC-3'(反向);該實(shí)驗(yàn)以β-actin 作為內(nèi)參照。另收集陽性克隆細(xì)胞并用細(xì)胞裂解液(20 mmol/L Tris-HCl，pH8.0，150 mmol/L NaCl，1%Triton X-100)裂解，由此獲得的細(xì)胞總蛋白經(jīng)10% SDS-PAGE 分離，電轉(zhuǎn)移至PVDF 膜上。隨后PVDF 膜用TBST(20 mmol/L Tris-HCl，150 mmol/L NaCl，0.05%Tween-20，pH7.4)配制的5%脫脂牛奶室溫封閉1 h，兔抗鼠OAZI-1 抗體(1∶2 000)4℃條件下孵育過夜，和羊抗兔IgG-HRP(1∶ 5 000)作用2 h，電化學(xué)發(fā)光法示蹤OAZI-1 蛋白的表達(dá)水平。將通過上述方法獲得的高表達(dá)OAZI-1 的B16-F1 細(xì)胞克隆株命名為B16/OAZI-1 細(xì)胞，轉(zhuǎn)染空載質(zhì)粒pcDNA3.1(+)的B16-F1 細(xì)胞株命名為B16/3.1 細(xì)胞。

1.3 制備BALB/c 小鼠腹腔巨噬細(xì)胞 每只小鼠腹腔注射1%無菌淀粉溶液1 ml，24 h 后頸椎脫臼法處死小鼠，腹腔注射5 ml PBS，輕揉小鼠腹部后，收集沖洗腹腔的PBS，1 000 r/min 離心10 min，棄去上清，即得到小鼠腹腔巨噬細(xì)胞。

1.4 制備BALB/c 小鼠脾臟淋巴細(xì)胞 小鼠無菌剪開腹腔，取出脾臟，在無血清RPMI1640 培養(yǎng)液中經(jīng)過鋼網(wǎng)研磨，200 目尼龍網(wǎng)過濾，獲得小鼠脾細(xì)胞懸液，小心加入3 ml 淋巴細(xì)胞分離液中，2 000 r/min 離心20 min，吸取中間懸浮的白色淋巴細(xì)胞，PBS 洗滌兩次后加入細(xì)胞培養(yǎng)液，即得到小鼠脾臟淋巴細(xì)胞。

1.5 制備BALB/c 小鼠骨髓來源的DC 細(xì)胞 將小鼠頸椎脫臼法處死，無菌狀態(tài)下取出脛骨和股骨，剪開骨頭兩端，用1 ml 注射器吸取無血清RPMI1640 培養(yǎng)液，沖洗骨髓腔，收集沖洗出的骨髓細(xì)胞懸液，1 500 r/min 離心10 min。棄上清，利用紅細(xì)胞裂解液裂解紅細(xì)胞后，PBS 洗滌1 次。將獲得的細(xì)胞用含10%胎牛血清、10 ng/ml 重組小鼠GM-CSF、10 ng/ml重組小鼠IL-4 的RPMI1640 培養(yǎng)基重懸，在細(xì)胞培養(yǎng)皿中置于37℃，含5%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。48 h 后棄去尚未貼壁的細(xì)胞，僅保留貼壁的DC 前體細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)。隨后，每48 h 半量換液，共培養(yǎng)168 h。收集培養(yǎng)細(xì)胞，即為富集的小鼠骨髓來源的樹突狀細(xì)胞(Bone marrow-derived dendritic cell，BMDC)。

1.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)巨噬細(xì)胞和DC 對(duì)腫瘤細(xì)胞的吞噬效應(yīng) 本實(shí)驗(yàn)將B16/OAZI-1 細(xì)胞和B16/3.1 細(xì)胞用作靶細(xì)胞，將巨噬細(xì)胞和DC 用作效應(yīng)細(xì)胞。靶細(xì)胞用5 μmol/L 的綠色熒光染料CFDA-SE于37 ℃細(xì)胞培養(yǎng)箱孵育染色30 min，PBS 洗滌2次，取5 ×105個(gè)靶細(xì)胞與2.5 ×106個(gè)巨噬細(xì)胞(靶效比為5∶1)或5 ×105個(gè)DC(靶效比為1∶1)混合培養(yǎng)4 h 后，1 000 r/min 離心5 min，棄上清，1 ml PBS重懸細(xì)胞，然后用5 μl PE-CD11b 抗體標(biāo)記巨噬細(xì)胞，5 μl PE-CD11c 抗體標(biāo)記DC，避光37℃反應(yīng)30 min。PBS 洗滌2 次后，1 ml PBS 重懸細(xì)胞，流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞吞噬效率。

1.7 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)成熟DC 表面特征性分子表達(dá) 分別取B16/OAZI-1 細(xì)胞和B16/3.1 細(xì)胞各5×105個(gè)與5 ×105個(gè)DC 細(xì)胞(效靶比為1∶1)混合培養(yǎng)24 h 后，1 000 r/min 離心5 min，棄上清，1 ml PBS 重懸細(xì)胞，分別用抗小鼠PE-CD40 抗體，PECD80 抗體和PE-CD86 抗體避光37℃孵育細(xì)胞30 min，PBS 洗滌細(xì)胞3 次，1 ml PBS 重懸細(xì)胞，流式細(xì)胞術(shù)分析DC 表面分子的表達(dá)。

1.8 ELISA 檢測(cè)體細(xì)胞培養(yǎng)上清中IFN-γ 含量 分別將B16/OAZI-1 細(xì)胞和B16/3.1 細(xì)胞與BALB/c小鼠骨髓來源的未成熟DC 按照1∶1的細(xì)胞數(shù)量比混合后共孵育培養(yǎng)48 h，隨后將共孵育細(xì)胞加入同樣來自BALB/c 小鼠的脾淋巴細(xì)胞中，并加入終濃度為200 U/ml 的小鼠IL-2 細(xì)胞因子，繼續(xù)混合培養(yǎng)24 h，收集細(xì)胞培養(yǎng)液上清，用ELISA 法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中IFN-γ 的含量。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS18.0 統(tǒng)計(jì)軟件處理，所有計(jì)量資料以±s 表示，采用t 檢驗(yàn)，以P＜0.05 為顯著性差異。

2 結(jié)果

2.1 獲得穩(wěn)定高表達(dá)OAZI-1 的B16-F1 細(xì)胞克隆株 將質(zhì)粒pcNDA3.1(+)-OAZI-1 轉(zhuǎn)染B16-F1 瘤細(xì)胞后，經(jīng)G418 篩選得到成功轉(zhuǎn)染的陽性細(xì)胞克隆株(B16/OAZI-1)。擴(kuò)大培養(yǎng)后，用RT-PCR 和Western blot 技術(shù)從mRNA 和蛋白表達(dá)水平證實(shí)該細(xì)胞株內(nèi)OAZI-1 高表達(dá)(圖1、2)。本實(shí)驗(yàn)以成功轉(zhuǎn)染空白質(zhì)粒pcNDA3.1(+)的細(xì)胞(B16/3.1)作為對(duì)照。

圖1 逆轉(zhuǎn)錄PCR 法篩選穩(wěn)定高表達(dá)OAZI-1 的B16-F1細(xì)胞株Fig.1 Selection of B16-F1 cell line with stable OAZI-1 over-expression by RT-PCR

圖2 免疫印跡法篩選穩(wěn)定高表達(dá)OAZI-1 的B16-F1 細(xì)胞株Fig.2 Selection of B16-F1 cells with stable OAZI-1 overexpression by Western blot

2.2 高表達(dá)OAZI-1 的細(xì)胞能更高效地被吞噬細(xì)胞所吞噬 CD11b 和CD11c 分別為巨噬細(xì)胞和DC 細(xì)胞的表面分子標(biāo)志物，本實(shí)驗(yàn)首先分析了PE 標(biāo)記的CD11b 和CD11c 抗體分別與上述細(xì)胞結(jié)合的能力，經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，90%以上細(xì)胞被標(biāo)記。同時(shí)，我們采用熒光染料CFDA-SE 標(biāo)記B16/OAZI-1細(xì)胞和B16/3.1 細(xì)胞，經(jīng)流式細(xì)胞儀驗(yàn)證，標(biāo)記效率也在90%以上(圖3)。將標(biāo)記的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞和DC 作為效應(yīng)細(xì)胞，分別與標(biāo)記的B16/OAZI-1 細(xì)胞和B16/3.1 細(xì)胞混合培養(yǎng)4 h，由于靶細(xì)胞和效應(yīng)細(xì)胞分別用不同熒光探針標(biāo)記，在流式細(xì)胞儀中檢測(cè)到的雙熒光陽性細(xì)胞即為吞噬了腫瘤細(xì)胞的效應(yīng)細(xì)胞。結(jié)果顯示巨噬細(xì)胞和DC 對(duì)B16/OAZI-1 細(xì)胞的吞噬率分別為24.7%和53.9%，與對(duì)照B16/3.1 組8.2%和13.8%的吞噬率相比較有顯著性差異(P＜0.05)。上述研究提示，高表達(dá)OAZI-1的腫瘤細(xì)胞能更有效地被吞噬細(xì)胞識(shí)別和吞噬(圖4)。

圖3 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞熒光標(biāo)記效率Fig.3 Flow cytometry was used to determine efficiency of cell-labeling by fluorescent probes

圖4 OAZI 高表達(dá)增強(qiáng)巨噬細(xì)胞和DC 對(duì)靶細(xì)胞的吞噬作用Fig.4 High expression of OAZI enhanced phagocytosis of target-cells by Mφ and DC in vitro

圖5 OAZI 高表達(dá)促進(jìn)DC 活化成熟Fig.5 High expression of OAZI on target-cell promoted DC maturation

圖6 B16/OAZI-1 活化的DC 誘導(dǎo)T 細(xì)胞分泌IFN-γFig.6 B16/OAZI-1 activated DC induced secretion of IFN-γ by T lymphatic cells

2.3 高表達(dá)OAZI-1 的腫瘤細(xì)胞促進(jìn)DC 活化成熟CD40、CD80、CD86 是成熟DC 的標(biāo)志性表面分子，本實(shí)驗(yàn)中，我們首先將B16/OAZI-1 和B16/3.1分別與DC 共孵育，染后用PE 標(biāo)記的抗小鼠CD40、CD80、CD86 抗體分別對(duì)DC 細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記，并用流式細(xì)胞儀檢測(cè)DC 表面這些分子的表達(dá)情況。結(jié)果顯示(圖5)，與對(duì)照組B16/3.1 細(xì)胞相比，DC 與B16/OAZI 細(xì)胞混合培養(yǎng)24 h 后，CD40、CD80 和CD86 表達(dá)陽性的細(xì)胞分別從24.2%、20.8% 和16.4%增加到46.8%、32.5%和36.1%，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析差異具有顯著性(P＜0.05)，提示，B16/OAZI-1細(xì)胞能更有效地誘導(dǎo)DC 成熟。

2.4 B16/OAZI-1 活化的DC 誘導(dǎo)T 細(xì)胞分泌IFN-γ 成熟DC 在向效應(yīng)T 細(xì)胞提呈抗原過程中將激活效應(yīng)T 細(xì)胞，活化T 細(xì)胞的主要特征之一是大量合成和分泌IFN-γ。本研究中，我們將與B16/OAZI-1 細(xì)胞共孵育后的DC 與小鼠脾淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng)24 h，然后用ELISA 檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IFN-γ 的含量，結(jié)果表明(圖6)，與B16/OAZI 細(xì)胞共孵育后的DC 與小鼠脾淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng)后，細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IFN-γ 含量為32.9 pg/ml，顯著性高于B16/3.1 對(duì)照組(15.1 pg/ml)，說明B16/OAZI-1 細(xì)胞活化的DC 能更有效遞呈腫瘤抗原和誘導(dǎo)T 細(xì)胞活化。

3 討論

腫瘤的發(fā)生和發(fā)展與腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸現(xiàn)象密切相關(guān)，近年研究發(fā)現(xiàn)通過增加腫瘤細(xì)胞表面鈣網(wǎng)蛋白(Calreticulin，CRT)表達(dá)或改變腫瘤微環(huán)境，可促使腫瘤細(xì)胞發(fā)生免疫原性轉(zhuǎn)化，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生有效的抗腫瘤免疫應(yīng)答。上述研究為腫瘤預(yù)防和治療提供了新的途徑［4-7］。本課題的前期研究發(fā)現(xiàn)，高表達(dá)OAZI-1 對(duì)黑色素瘤B16-F1 細(xì)胞在接種小鼠皮下成瘤有顯著性抑制作用，并能誘導(dǎo)小鼠體內(nèi)產(chǎn)生抗同種腫瘤的免疫效應(yīng)，提示高表達(dá)OAZI-1 可能使腫瘤細(xì)胞發(fā)生免疫原性轉(zhuǎn)化(另文發(fā)表)。以往研究已證實(shí)，多胺代謝途徑與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有密切的關(guān)系，腫瘤細(xì)胞中高多胺含量是決定腫瘤快速生長的因素之一，但尚無文獻(xiàn)報(bào)道多胺代謝與抗腫瘤免疫之間的關(guān)系，本文從細(xì)胞水平上對(duì)高表達(dá)OAZI-1 的B16-F1 細(xì)胞是否發(fā)生了免疫原性轉(zhuǎn)化進(jìn)行了進(jìn)一步研究。

DC 是重要的專職抗原遞呈細(xì)胞，巨噬細(xì)胞在機(jī)體免疫應(yīng)答過程中也發(fā)揮重要的抗原遞呈作用。因此，B16/OAZI-1 細(xì)胞如果發(fā)生了免疫原性轉(zhuǎn)化，首先會(huì)被巨噬細(xì)胞、DC 等抗原遞呈細(xì)胞有效識(shí)別、吞噬，由此誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性抗腫瘤免疫應(yīng)答。本研究中，我們以高表達(dá)OAZI-1 的小鼠黑色素瘤B16-F1 腫瘤細(xì)胞(B16/OAZI-1)為靶細(xì)胞，以小鼠腹腔巨噬細(xì)胞和小鼠骨髓來源的DC 為效應(yīng)細(xì)胞，將上述兩種細(xì)胞共孵育后，觀察效應(yīng)細(xì)胞對(duì)靶細(xì)胞的吞噬作用。結(jié)果顯示，與對(duì)照組B16/3.1 細(xì)胞相比較，腹腔巨噬細(xì)胞和DC 對(duì)B16/OAZI-1 細(xì)胞的吞噬率均有顯著性增高，提示高表達(dá)OAZI-1 的B16-F1 細(xì)胞能更有效地被抗原提呈細(xì)胞吞噬。

DC 對(duì)腫瘤細(xì)胞的識(shí)別和吞噬是腫瘤細(xì)胞免疫原性轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，DC 細(xì)胞的活化、成熟以及腫瘤抗原加工和呈遞將隨之進(jìn)行。因此在體外試驗(yàn)中，我們進(jìn)一步分析了B16/OAZI-1 能否促進(jìn)DC 活化與成熟。實(shí)驗(yàn)中檢測(cè)了3 種成熟的DC 細(xì)胞表面分子標(biāo)志物CD40、CD80、CD86 的表達(dá)量，結(jié)果顯示DC 與B16/OAZI-1 細(xì)胞混合培養(yǎng)后，上述3 種表面分子標(biāo)志物的表達(dá)有一定程度的增加，與B16/3.1細(xì)胞對(duì)比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。提示OAZI-1 在B16-F1 細(xì)胞中高表達(dá)具有促進(jìn)DC 成熟和活化的作用。

DC 細(xì)胞將吞噬的腫瘤抗原加工并遞呈給CD4+的T 淋巴細(xì)胞，由此導(dǎo)致T 淋巴細(xì)胞活化，活化的T淋巴細(xì)胞的重要特征之一是大量合成和分泌IFN-γ等細(xì)胞因子，IFN-γ 等通過調(diào)節(jié)細(xì)胞毒T 細(xì)胞以及免疫系統(tǒng)的多個(gè)環(huán)節(jié)而激活細(xì)胞免疫系統(tǒng)，誘導(dǎo)機(jī)體抗腫瘤免疫應(yīng)答的發(fā)生。本實(shí)驗(yàn)中，我們首先將腫瘤細(xì)胞和DC 混合孵育，隨后將上述混合細(xì)胞與小鼠脾淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)，并通過檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中IFN-γ 的含量，判斷小鼠T 淋巴細(xì)胞體外活化的情況。結(jié)果顯示，B16/OAZI-1 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)組中IFN-γ含量顯著性高于B16/3.1 對(duì)照細(xì)胞組，兩組結(jié)果差異具有顯著性(P＜0.05)。上述研究提示，在體外由B16/OAZI-1 活化成熟的DC 能將腫瘤抗原加工遞呈給T 淋巴細(xì)胞，并促使T 淋巴細(xì)胞活化和合成分泌IFN-γ。

綜上所述，在體外實(shí)驗(yàn)中，OAZI-1 在小鼠黑色素瘤B16-F1 細(xì)胞中高表達(dá)能夠促進(jìn)巨噬細(xì)胞和DC等抗原遞呈細(xì)胞對(duì)B16-F1 細(xì)胞的識(shí)別和吞噬，這一過程可有效促進(jìn)DC 細(xì)胞的成熟。該種成熟的DC細(xì)胞能有效將腫瘤抗原遞呈給T 淋巴細(xì)胞，誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞活化，從而激活機(jī)體抗腫瘤免疫應(yīng)答。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果在細(xì)胞水平上進(jìn)一步提示，OAZI-1 高表達(dá)能促進(jìn)B16-F1 細(xì)胞發(fā)生免疫原性轉(zhuǎn)化。但有關(guān)OAZI-1 高表達(dá)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞發(fā)生免疫原性轉(zhuǎn)化的分子機(jī)制尚未完全闡明，有待進(jìn)一步深入研究。

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