邢娟娟(南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院血液科，南昌 330006)

流式細(xì)胞術(shù)在淋巴瘤免疫表型分析中的作用

邢娟娟
(南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院血液科，南昌 330006)

目的 探討流式細(xì)胞術(shù)免疫表型分析在淋巴瘤診斷中的應(yīng)用。方法 采用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)92例淋巴瘤患者進(jìn)行免疫表型分析。結(jié)果 在92例受檢者中，B細(xì)胞NHL67例，T細(xì)胞NHL25例。B細(xì)胞NHL標(biāo)記抗原出現(xiàn)頻率較高的為CD19、 CD22;T細(xì)胞NHL標(biāo)記抗原出現(xiàn)頻率最高的為CD7。結(jié)論 流式細(xì)胞術(shù)在淋巴瘤的診斷分型方面有重要意義。

淋巴瘤； 流式細(xì)胞術(shù)； 免疫表型分析

伴隨著免疫技術(shù)的極大發(fā)展，現(xiàn)在歐美淋巴瘤分型以及世界衛(wèi)生組織的淋巴瘤分類中，已經(jīng)將原本淋巴細(xì)胞白血病跟淋巴瘤兩種疾病歸類為同種疾病。這個(gè)分類方法綜合包括了疾病的臨床反應(yīng)、形態(tài)學(xué)以及免疫學(xué)等多方面的特征。免疫學(xué)的分類方法起著極為重要的作用。各個(gè)類型的淋巴瘤患者的生物學(xué)行為以及臨床表現(xiàn)等均有很大差別，甚至于不同類型淋巴瘤的治療方案都會(huì)有極大不同[1]。淋巴瘤是因?yàn)檠?xì)胞在某個(gè)分化階段發(fā)生大量的聚集且表達(dá)出對(duì)應(yīng)血細(xì)胞胞膜或者分化抗原，這些細(xì)胞的分化抗原就成為作為鑒別或者分類該種疾病的指標(biāo)?，F(xiàn)今，流式細(xì)胞術(shù)的免疫分型已經(jīng)越來越成為淋巴瘤疾病診斷分型的重要手段。

1 資料與方法

1.1 病例資料

選取2004年2月到2012年2月在南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院住院及院外的92例初治淋巴瘤患者，男57例，女35例，年齡8～54歲，平均(46.0±3.4)歲。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)材料以及方法

所有標(biāo)準(zhǔn)單克隆抗體包括CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8、CD9、CD10、CD19、CD20、CD22、CD23、CD25、CD11b、CD11c、CD103、lgM、HLA-DR、FMC-7、K鏈，L鏈以及同型對(duì)照等，全部購自美國BD公司。試驗(yàn)檢測(cè)采用美國BD公司三色流式細(xì)胞儀。

1.2.2 樣品檢測(cè)

抽取患者治療前骨髓液2 mL，加入EDTA抗凝試管,在各個(gè)試管里先加入一定量的不同熒光素標(biāo)記的單克隆抗體，再加入50 μL骨髓，充分地混勻于室溫避光放置20 min，然后再加2 mL紅細(xì)胞裂解液，避光10 min，再用離心機(jī)于1 500 r/min進(jìn)行離心5 min，棄去上清液，用PBS進(jìn)行洗滌，在一天以內(nèi)進(jìn)行上機(jī)檢測(cè)。每管收集細(xì)胞2萬個(gè)，采用CD45/SSC雙參數(shù)散點(diǎn)圖設(shè)門來對(duì)原始細(xì)胞群粒細(xì)胞以及單核細(xì)胞群進(jìn)行識(shí)別。

2 結(jié)果

通過統(tǒng)計(jì)研究發(fā)現(xiàn)B淋巴瘤細(xì)胞的分型表達(dá)，CD19、CD20分化抗原；而T系淋巴瘤細(xì)胞免疫表型表達(dá)較高的是CD7。92例患者中，B細(xì)胞來源和T細(xì)胞來源患者結(jié)果分別見表1和表2。

表1 B細(xì)胞NHL免疫表型統(tǒng)計(jì)結(jié)果

表2 T細(xì)胞NHL免疫表型統(tǒng)計(jì)結(jié)果

3 討論

淋巴細(xì)胞瘤是淋巴結(jié)或者淋巴結(jié)外部位的淋巴組織的免疫細(xì)胞瘤[2]。筆者采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)了92例淋巴瘤患者的骨髓細(xì)胞免疫表型。同時(shí)也發(fā)現(xiàn)，T和B淋巴細(xì)胞抗原同時(shí)表達(dá)在 淋巴瘤中較為常見，在淋巴細(xì)胞瘤應(yīng)該主要考慮B系淋巴瘤。

淋巴瘤是高異質(zhì)性疾病，現(xiàn)今盡管形態(tài)學(xué)方面的手段雖然能夠做出診斷，但是卻無法細(xì)致地判斷瘤細(xì)胞的來源以及其生物學(xué)性質(zhì)，也不能判斷出單克隆以及細(xì)胞分化的階段[3]，同時(shí)傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)方面的手段還往往帶有檢驗(yàn)者主觀的判斷誤差。而免疫組織化學(xué)染色方法雖然能夠確定淋巴瘤的免疫表型，但卻無法對(duì)淋巴瘤進(jìn)行準(zhǔn)確的分型和判斷[4]。流式細(xì)胞術(shù)采用多色單抗體能夠同時(shí)進(jìn)行標(biāo)記，能夠做到快速而全面測(cè)出細(xì)胞抗原的分布，使得免疫分型最終的結(jié)果更為客觀而精確，所以采用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)淋巴瘤分型診斷對(duì)疾病的治療以及預(yù)后都有著極為重要的意義。因?yàn)榱馨偷哪[瘤細(xì)胞已經(jīng)基本上喪失其作為正常細(xì)胞的分化發(fā)育自然規(guī)律，所以在淋巴瘤患者中經(jīng)常出現(xiàn)系列的交叉表達(dá)現(xiàn)象。也就是髓系細(xì)胞往往伴隨有淋巴系抗原表達(dá)或者淋巴細(xì)胞伴隨有髓系抗原的表達(dá)?，F(xiàn)今，學(xué)術(shù)界的大多數(shù)學(xué)者都認(rèn)為淋巴瘤細(xì)胞起源是相對(duì)于淋巴定向干細(xì)胞，也可能是由于分化或者表達(dá)骨髓系以及淋巴系兩種以上抗原的造血祖細(xì)胞出現(xiàn)了惡性增殖而最終轉(zhuǎn)化表達(dá)，因此淋巴瘤的早期診斷對(duì)于治療極為重要。

淋巴瘤細(xì)胞的免疫分型對(duì)于反映淋巴瘤細(xì)胞的異質(zhì)性，以及其分型、發(fā)病機(jī)理等各方面的研究甚至后期的治療方案制作上都具有十分重要的價(jià)值。現(xiàn)今免疫表型跟治療方案的關(guān)系仍然存有極大爭(zhēng)議，需要有更多臨床資料的累積，最終為臨床醫(yī)師合理化選擇治療方案以及判斷最終患者的預(yù)后提供可靠的依據(jù)。

[1] 劉鑫.流式細(xì)胞術(shù)在白血病和淋巴瘤診斷中的應(yīng)用[J].內(nèi)蒙古民族大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2010，17(3)：347-350.

[2] 河福金.多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)在非霍奇金淋巴瘤診斷中的應(yīng)用[J].中華病理學(xué)雜志,2006,35(4):203-208.

[3] 夏成青，齊曼，徐先發(fā)，等.流式細(xì)胞術(shù)在彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤伴大量T細(xì)胞反應(yīng)病理診斷中的應(yīng)用[J].中華病理學(xué)雜志，2007,3(1):29-32.

[4] 吳宜嘉.流式細(xì)胞儀在淋巴瘤患者外周血T細(xì)胞亞群診斷中的應(yīng)用研究[J].海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2010，16(12)：1660-1662.

(責(zé)任編輯：劉大仁)

2014-04-29

R733.7

A

1009-8194(2015)04-0032-02

10.13764/j.cnki.lcsy.2015.04.013