趙 艷 霍永利 馮玉彥 張 紈

(河北省中醫(yī)院脾胃科，河北 石家莊 050011)

實 驗 研 究

化濁解毒方對濁毒內(nèi)蘊型反流性食管炎大鼠超氧化物歧化酶及丙二醛的影響※

趙 艷 霍永利 馮玉彥 張 紈

(河北省中醫(yī)院脾胃科，河北 石家莊 050011)

目的 觀察化濁解毒方對濁毒內(nèi)蘊型反流性食管炎(RE)大鼠超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)的影響。方法 將60只Wistar雄性大鼠隨機分為正常組、模型組、西藥組、中藥組，每組各15只。除正常組外，其余3組制備RE大鼠模型。造模后正常組、模型組予0.9%氯化鈉注射液灌胃；西藥組按1 mL/100 g給予奧美拉唑溶液灌胃；中藥組按1 mL/100 g給予化濁解毒方灌胃，共治療8周。觀察大鼠食管黏膜組織病理，檢測RE大鼠血清SOD活性、MDA含量。結(jié)果 西藥組、中藥組均能改善食管黏膜病理變化，與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。西藥組、中藥組均可降低血清MDA含量、提高SOD活性，與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。中藥組與西藥組大鼠血清SOD活性、MDA含量比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論 化濁解毒方可能是通過降低MDA含量、提高SOD活性，對RE起到治療作用。

食管炎，消化性；丙二醛；超氧化物歧化酶；疾病模型，動物；中醫(yī)藥療法

反流性食管炎(reflux esophagitis，RE)是酸性反流物(包括胃酸或膽汁)反流至食管致使食管黏膜受損而出現(xiàn)病變，主要病變表現(xiàn)為黏膜炎癥、糜爛和潰瘍等。隨著人們生活節(jié)奏的加快，RE發(fā)病率逐年增高[1]。而氧化應(yīng)激在RE發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用。本實驗研究旨在通過觀察化濁解毒方對濁毒內(nèi)蘊型RE大鼠超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量的影響，進一步探討該方治療RE的作用機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物、藥物和試劑

1.1.1 實驗動物 Wistar雄性大鼠60只，清潔級，12周齡，體質(zhì)量250～320 g。河北醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供，動物合格證號：SCXK(冀)2008-1-003。恒溫室內(nèi)飼養(yǎng)，溫度為22 ℃，濕度為40%～60%。自由飲水，每日光照12 h。

1.1.2 實驗藥物和試劑 ①化濁解毒方藥物組成：茯苓20 g，連翹20 g，半邊蓮15 g，半枝蓮15 g，蒲公英15 g，絞股藍15 g，石菖蒲15 g，白花蛇舌草15 g，佩蘭12 g，藿香12 g，枳實12 g，厚樸12 g，砂仁12 g，黃芩9 g，紅豆蔻 6 g。以上藥物均購自河北省中醫(yī)院中藥房，并由河北省中醫(yī)院制劑室煎煮制成1.25 g /mL藥液備用。②奧美拉唑腸溶片(湖南方盛制藥股份有限公司，國藥準(zhǔn)字H20103295)配制成0.36 mg/mL溶液，備用。③SOD、MDA酶聯(lián)免疫檢測試劑盒由南京建成生物工程研究所提供。

1.2 實驗方法

1.2.1 動物分組 按隨機數(shù)字表法，將60只Wistar雄性大鼠分為4組，分別為正常組、模型組、西藥組及中藥組，每組各15只。

1.2.2 模型制備[1-2]正常組不予造模，其余3組大鼠進行RE模型制備，具體如下：(1)不全幽門結(jié)扎+賁門肌切開術(shù)。①適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，禁食24 h(可飲水)，腹腔注射3.5%水合氯醛，其濃度為1 mL/100 g，將大鼠麻醉；②大鼠固定于手術(shù)臺，呈仰臥位，常規(guī)備皮、消毒；③于上腹部正中處切一長約3 cm的切口，將食管下段、胃食管交界區(qū)暴露于視野內(nèi)；④于胃-食管交界處縫扎胃左動脈的分支，再于上述位置縱行切開賁門肌0.5 cm，完全暴露黏膜層；⑤半結(jié)扎幽門，位置為幽門與十二指腸交界近幽門處；⑥吸盡腹腔液體，注入0.9%氯化鈉注射液1 mL、硫酸慶大霉素注射液1萬單位，關(guān)腹，嚴(yán)格無菌操作，術(shù)后禁食24 h。(2)于高熱潮濕的環(huán)境下[3]，將上述手術(shù)后大鼠飼以高脂高糖飲食。普通飼料+10%蜂蜜和10%白糖混合飲料，21 d后即造模成功。造模1周后，大鼠共死亡4只，其中模型組死亡2只，西藥組、中藥組各死亡1只。

1.2.3 給藥方法 給藥開始時間：造模21 d后。正常組、模型組給予0.9%氯化鈉注射液；西藥組給予奧美拉唑溶液；中藥組給予化濁解毒方。以上各組均每日灌胃1次，按1 mL/100 g計算，共給藥8周。

1.2.4 標(biāo)本采集與處理 ①血清標(biāo)本：末次給藥后，禁食24 h(可飲水)，行腹腔內(nèi)麻醉，麻醉用藥為2%戊巴比妥鈉，按40 mg/kg給藥。由門靜脈取血4 mL置于試管中，其中含有7.5%乙二胺四乙酸二鈉30 μL和抑肽酶40 μL，混勻，4 ℃，3 000 r/min，離心10 min，抽取上清液，冷藏待測。②病理標(biāo)本：取大鼠食管黏膜組織，4%多聚甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，切片，蘇木精-伊紅(HE)染色。

1.2.5 觀察指標(biāo)與檢測

1.2.5.1 食管黏膜病理組織觀察 參照中華醫(yī)學(xué)會消化內(nèi)鏡學(xué)分會制訂“反流性食管炎診斷及治療指南(2003年)”[4]。RE病理分級標(biāo)準(zhǔn)：①上皮細胞層內(nèi)炎細胞浸潤；②黏膜固有層乳頭延伸；③鱗狀上皮增生；④出現(xiàn)黏膜糜爛；⑤食管黏膜有潰瘍形成；⑥Barrett食管改變?yōu)橹囟?。輕度：符合以上①～③；中度：符合以上①～④；重度：符合以上①～⑤或①～⑥。

1.2.5.2 SOD活性、MDA含量檢測 取上述血清標(biāo)本，采用酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)測定 SOD活性、MDA含量，操作步驟嚴(yán)格按試劑盒說明書進行。

2 結(jié) 果

2.1 4組大鼠食管黏膜病理組織觀察及病理分級比較 見表1。

表1 4組大鼠食管黏膜病理組織觀察及病理分級比較 只

與正常組比較，*P<0.05；與模型組比較，△P<0.05

由表1可見，正常組食管黏膜未見異常，模型組食管黏膜病理分級多為中度，有的呈重度表現(xiàn)；中藥組和西藥組食管黏膜病理分級多未見異?；驗檩p度。模型組食管黏膜病理陽性率高于正常組(P<0.05)，說明造模成功。中藥組、西藥組食管黏膜病理陽性率較模型組明顯降低(P<0.05)，說明中藥組、西藥組均能改善食管黏膜病理變化。

2.2 4組大鼠血清SOD活性及MDA含量比較 見表2。

組 別nSOD(U/mL)MDA(nmol/mL)正常組15113．98±12．343．85±0．88模型組1388．26±11．43?4．97±0．96?西藥組14109．60±10．85△3．83±0．87△中藥組14110．26±10．47△3．84±0．89△

與正常組比較，*P<0.05；與模型組比較，△P<0.05

由表2可見，與正常組比較，模型組SOD活性明顯降低(P<0.05)，MDA含量升高(P<0.05)，說明造模成功；與模型組比較，中藥組、西藥組血清SOD活性升高(P<0.05)，血清MDA含量降低(P<0.05)；中藥組與西藥組大鼠血清SOD活性、MDA含量比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

3 討 論

RE是一種由胃和十二指腸內(nèi)容物反流至食管引起的一種胃食管反流病。其典型癥狀主要為泛酸、燒心、反胃等。在RE的發(fā)生、發(fā)展過程中，氧化應(yīng)激有著不可忽視的作用。氧化應(yīng)激所致的損傷使機體的抗氧化防御功能降低，而此過程中，氧自由基起著關(guān)鍵作用，其具有細胞毒性，可使脂質(zhì)過氧化，損傷細胞膜，引起炎癥反應(yīng)。SOD是生物體內(nèi)重要的抗氧化酶，廣泛分布于各種生物體內(nèi)，能催化氧自由基發(fā)生歧化反應(yīng)，從而清除生物體內(nèi)氧自由基，減少或阻斷因氧自由基對細胞造成的損害，并及時修復(fù)受損細胞，減少脂質(zhì)過氧化物的生成，減輕炎癥反應(yīng)。生物體內(nèi)，自由基作用于脂質(zhì)發(fā)生過氧化反應(yīng)，并生成終產(chǎn)物MDA，MDA能破壞細胞膜的通透性和完整性，加劇細胞的損傷，其含量可間接反應(yīng)黏膜受攻擊所致炎癥的程度。

RE屬中醫(yī)學(xué)嘈雜、吐酸、胃痛、嘔吐等范疇，中醫(yī)對RE的病因病機有多種認(rèn)識。多數(shù)認(rèn)為其基本病機為胃氣上逆，而瘀血停滯、濕熱內(nèi)阻、氣機郁滯等均可導(dǎo)致胃失和降，胃氣上逆，對此各中醫(yī)學(xué)者見解多有不同。高祥華[5]認(rèn)為，RE表象為痰、氣、瘀互結(jié)于食管，致肝胃不和，但其根本在于脾虛失運，胃失和降。我們認(rèn)為濕濁和熱毒是RE的關(guān)鍵因素，因情志不遂，六淫傷中，飲食不適致脾胃受損，中焦失司，逆亂失和，脾胃不能升清降濁，則水反為濕，谷反為滯，濕滯中焦，日久化生熱毒，濕熱毒邪互結(jié)而釀生濁毒。治療以化濁解毒為原則?；瘽峤舛痉街兄赜檬牌选⑸叭驶瘽窈臀附∑?，濕祛而脾自健，脾健而絕生濕之源；蒲公英、連翹清熱解毒，蒲公英兼以利濕，連翹又可輕宣郁熱，取“火郁發(fā)之”之意，此4味共為君藥。佩蘭、藿香、紅豆蔻芳香化濕，醒脾開胃，增強化濕和胃，共為臣藥。白花蛇舌草、半邊蓮、黃芩、半枝蓮清熱解毒祛濕；茯苓、絞股藍健脾滲濕益氣，化濕可祛脾病之因，健脾可絕生濕之本；以上藥物均為佐藥。配以厚樸、枳實降逆除脹，理氣消痞，而復(fù)脾胃升清降濁之功。諸藥相合，標(biāo)本兼治，使?jié)嵝办?，毒邪解，而諸癥向愈?，F(xiàn)代藥理研究表明，石菖蒲可增強膽汁的分泌，緩解腸管平滑肌痙攣，增強腸管節(jié)律性蠕動，促進腸管內(nèi)容物的推進[6]；砂仁具有促進胃腸動力、調(diào)節(jié)免疫的功能，其水煎劑可使?jié)窭Ｐ痛笫笪葛つOD活性增加[7]。

本實驗研究結(jié)果顯示，化濁解毒方能改善濁毒內(nèi)蘊型RE大鼠食管黏膜病理變化，提高SOD活性，降低血清MDA含量，提示化濁解毒方可能是通過提高SOD活性、降低MDA含量，減少黏膜損傷，增強食管黏膜抗氧化能力，保護食管黏膜組織，減輕炎癥反應(yīng)，從而對RE起到治療作用。

[1] 許樹長，戴軍，胡運彪，等.實驗性酸性反流性食管炎動物模型制備的研究[J].中華消化雜志，1999，19(3)：208-209.

[2] 于強，袁紅霞，崔乃強.酸性反流性食管炎大鼠模型的改良制備[J].中國中西醫(yī)結(jié)合消化雜志，2002，10(2)：74-75.

[3] 郭喜軍，張顏偉，趙見文.胃癌前病變大鼠中抑癌基因APC、P16表達與濁毒的相關(guān)性研究[J].河南中醫(yī)，2011，31(10)：1119-1122.

[4] 中華醫(yī)學(xué)會消化內(nèi)鏡學(xué)分會.反流性食管炎診斷及治療指南(2003)[J].中華消化內(nèi)鏡雜志，2004，21(4)：221-222.

[5] 高祥華.反流性食管炎的中醫(yī)病機及辨治探討[J].吉林中醫(yī)藥，2004，24(3)：15-16.

[6] 胡錦官，顧健.石菖蒲及其有效成分對消化系統(tǒng)的作用[J].中藥藥理與臨床，1999，15(2)：16-18.

[7] 邱賽紅，陳立峰，柳克玲，等.芳香化濕藥開胃作用機理的實驗研究Ⅱ：對濕困動物模型的影響[J].中藥藥理與臨床，1997，13(2)：1-4.

(本文編輯：習(xí) 沙)

Investigation of Huazhuo-tongluo formula on superoxide dismutase and malondialdehyde in reflux esophagitis rats with Zhuodu-neiyun type

ZHAOYan，HUOYongli，F(xiàn)ENGYuyan，etal.

Departmentofspleenandstomach，HospitalofTraditionalChineseMedicineinHebeiProvince，Hebei，Shijiangzhuang050011

Objective To observe the effects of Huazhuo-tongluo formula on superoxide dismutase (SOD) and malondialdehyde (MDA) in reflux esophagitis (RF) rats with Zhuodu-neiyun type.Methods 60 male Wistar rats were randomly divided into normal group，model group，western medicine group and traditional Chinese medicine (TCM) group，15 rats in each group.Except normal group，RF rats model were induced in other three groups.After model induced，rats in normal and model groups were received 0.9% sodium chloride injection by gavage.Rats in western medicine group were received omeprazole solution (1 mL/100 g)by gavage，and rats in TCM group were received Huazhuo-jiedu formula (1 mL/100 g) by gavage.The course was 8 weeks.Esophageal mucosa pathology was observed in all groups，and the serum SOD activity and MDA content were measured in RF rats.Results The esophageal mucosa pathology was improved in western medicine and TCM groups，as compared with that in model group，the difference was statistically significant (P< 0.05).The serum MDA content was decreased in western medicine and TCM groups，and the SOD activity was increased，as compared with those in model group，the difference was statistically significant (P< 0.05).There were no statistically differences between western medicine and TCM groups on the serum SOD activity and MDA content (P>0.05).Conclusin Huazhuo-jiedu formula has therapeutic effects on reflux esophagitis may by decrease MDA content and increase SOD activity.

Peptic esophagitis; Malondialdehyde; Superoxide dismutase; Disease model; Animal; Traditional Chinese medicine

10.3969/j.issn.1002-2619.2015.09.028

※ 項目來源：河北省中醫(yī)藥管理局2013年中醫(yī)藥類科研計劃課題(編號：2013046)

趙艷(1980—)，女，主治醫(yī)師，碩士。從事脾胃病臨床工作。

R-332；R287；R57

A

1002-2619(2015)09-1360-04

2014-12-31)