王先友,劉偉芬,胡海廷

(1.河南大學(xué)藥學(xué)院,河南開封475004;2.河南省醫(yī)藥學(xué)校藥劑教研室,河南開封475004)

醋酸曲安奈德注射液中硫柳汞的測(cè)定方法研究

王先友1,劉偉芬2,胡海廷1

(1.河南大學(xué)藥學(xué)院,河南開封475004;2.河南省醫(yī)藥學(xué)校藥劑教研室,河南開封475004)

摘 要:目的建立醋酸曲安奈德注射液中硫柳汞的HPLC測(cè)定方法。方法以C18柱為固定相;甲醇-p H=5.0磷酸鹽緩沖溶液(35∶65)為流動(dòng)相;流速∶1 m L/min;柱溫∶25℃;檢測(cè)波長(zhǎng)∶248 nm;進(jìn)樣量∶20μL。結(jié)果硫柳汞在進(jìn)樣量為0.0505～0.824μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好?；貧w方程為∶Y=5.248×105X+131.2,r=0.999 6。平均回收率為99.32%,RSD=1.3%。結(jié)論該法選擇性好、靈敏度高、重現(xiàn)性好、準(zhǔn)確度高?？捎糜诳刂拼姿崆材蔚伦⑸湟褐辛蛄暮?。

關(guān)鍵詞:硫柳汞;醋酸曲安奈德注射液;HPLC法

醋酸曲安奈德注射液為中國(guó)藥典收載品種[1],屬于腎上腺皮質(zhì)激素藥,適用于各種皮膚病、過敏性鼻炎、關(guān)節(jié)痛、支氣管哮喘、肩周炎、腱鞘炎、滑膜炎、急性扭傷、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等。配方中加入了硫柳汞作為防腐劑,由于硫柳汞具有一定毒性,需對(duì)其含量嚴(yán)格控制。但是,藥典中,醋酸曲安奈德注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)下無硫柳汞含量控制方法。查閱文獻(xiàn),亦未見醋酸曲安奈德注射液中硫柳汞的測(cè)定報(bào)導(dǎo)。對(duì)于硫柳汞原料的含量測(cè)定,藥典中采用常量分析滴定法[2],處理過程復(fù)雜,不適合制劑中微量硫柳汞的測(cè)定。金于蘭[3]曾采用冷原子吸收法(測(cè)汞儀)對(duì)流感病毒裂解(流感)疫苗中的硫柳汞含量進(jìn)行了檢測(cè);李茂光[4]采用HPLC法測(cè)定了細(xì)菌溶解物(蘭菌凈)中的硫柳汞含量;呂小川[5]采用分光光度法測(cè)定了硫柳汞酊中硫柳汞的含量;楊曉華[6]采用流動(dòng)注射氫化物發(fā)生-原子吸收法測(cè)定了乙肝疫苗中硫柳汞的含量;徐榮采用毛細(xì)管電泳法同時(shí)測(cè)定了鹽酸萘甲唑林滴鼻液中有機(jī)汞抑菌劑硫柳汞及其活性成分。但這些方法均不適合該制劑中硫柳汞的含量測(cè)定。我們建立了醋酸曲安奈德注射液中硫柳汞的HPLC測(cè)定方法,為該藥的質(zhì)量控制及安全性保障提供了一種有效方法手段。

1　儀器、試劑與樣品

安捷倫HPLC色譜儀(1200 series);Sartorius電子天平(感量:十萬分之一);waters C18柱(4.6× 150 mm,5μm)。硫柳汞對(duì)照品:國(guó)藥集團(tuán)(批號(hào): F20090309);色譜甲醇:TEDIA(批號(hào):12125005);醋酸曲安奈德注射液樣品(市售)。

2　方法與結(jié)果

2.1溶液制備

對(duì)照品溶液的制備:精密稱量硫柳汞對(duì)照品2.58 mg,置于50 m L量瓶中,加水定容,作為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。準(zhǔn)確量取2 m L,置10 m L量瓶中,加水稀釋至刻度,搖勻作為對(duì)照品溶液。

供試品溶液的配制:準(zhǔn)確量取醋酸曲安奈德注射液2m L,置于5 m L量瓶中,加水至刻度,搖勻。

2.2色譜條件

色譜柱:waters,symmetry系列C18柱(4.6× 150 mm,5μm);流動(dòng)相:甲醇-p H=5.0磷酸鹽緩沖溶液(35:65);流速:1 m L/min;柱溫:25℃;檢測(cè)波長(zhǎng):248 nm;進(jìn)樣量:20μL。該條件下得到的硫柳汞理論塔板數(shù)大于15 000,分離度遠(yuǎn)大于2。色譜圖分別如圖1和圖2。

2.3方法學(xué)考察

2.3.1線性關(guān)系 分別精密量取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0.5、1、2、4、6、8 mL置于10 m L量瓶中,稀釋至刻度,搖勻。準(zhǔn)確量取20μL注入色譜儀,按前述色譜條件測(cè)定,記錄色譜圖。以峰面積A對(duì)進(jìn)樣量(x)進(jìn)行線性回歸,得回歸方程為:Y=5.248×105X+131.2,r= 0.999 6。結(jié)果表明,硫柳汞的峰面積與進(jìn)樣量在0.050 5μg～0.824μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.3.2精密度實(shí)驗(yàn) 取硫柳汞對(duì)照品溶液,同一天內(nèi)重復(fù)進(jìn)樣6次,測(cè)定其峰面積,計(jì)算日內(nèi)RSD為0.68%(n=6)。每次間隔一天進(jìn)樣,連續(xù)6次,計(jì)算日間RSD為0.97%。結(jié)果表明該法精密度較好。

2.3.3重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取批號(hào)為201308173的樣品,按2.1項(xiàng)下方法配制成供試品溶液5份,取每份溶液20μL進(jìn)樣,記錄色譜圖。測(cè)得硫柳汞峰面積的RSD為1.53%(n=5),表明該法重復(fù)性較好。

2.3.4回收率實(shí)驗(yàn) 精密量取已知含量的醋酸曲安奈德注射液供試品(批號(hào)201308173)1 m L,硫柳汞標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0.5 m L,一起置于5 m L量瓶中,加水定容,搖勻。按前述方法重復(fù)測(cè)定6次,測(cè)得平均回收率為99.32%,RSD=1.3%(n=6)。

2.3.5穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取供試品溶液(批號(hào)201308173),按照前述色譜條件,每間隔2 h進(jìn)樣1次,連續(xù)考察12 h,測(cè)得RSD為0.36%(n=6),表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.6含量測(cè)定 取批號(hào)為201308156、201308173和201308186的樣品,按前述方法測(cè)定。測(cè)得3批樣品中硫柳汞的標(biāo)示量分別為93.48%,RSD= 1.53%;94.56%,RSD=0.83%;97.88%,RSD= 125%(n=3)。

3　討論

3.1檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

用硫柳汞標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液描繪UV吸收曲線,在248 nm有最大吸收峰,因此選擇248 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.2流動(dòng)相的選擇

由于硫柳汞分子結(jié)構(gòu)中含有一些易電離的離子官能團(tuán),需控制溶液p H值防止色譜峰拖尾,經(jīng)多次摸索,采用p H=5.0磷酸鹽緩沖溶液,峰的不對(duì)稱因子為0.978。流動(dòng)相甲醇-p H=5.0磷酸鹽緩沖溶液的比例為35∶65分離度較好,選擇性較高。

參考文獻(xiàn):

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(二部)[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2010:1 123.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(二部)[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2010:1 235.

[3]金于蘭,陳哲文,馬福容,冷繼平,魏葆華.冷原子吸收法檢測(cè)硫柳汞含量[J].中國(guó)生物制品學(xué)雜志,2005,18(5): 422―423.

[4]李茂光,石繼春,陳瓊,葉強(qiáng).HPLC法測(cè)定細(xì)菌溶解物(蘭菌凈)中的硫柳汞含量[J].中國(guó)藥事,2013,27(8): 864―866.

[5]呂小川,王曉蕾.分光光度法測(cè)定硫柳汞酊中硫柳汞的含量[J].中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志,1994,14(6):273―274.

[6]楊曉華,劉英華,王玉春.流動(dòng)注射氫化物發(fā)生一原子吸收法測(cè)定乙肝疫苗中硫柳汞的含量[J].中國(guó)藥房,2008, 19(13):1 013―1 014.

[責(zé)任編輯李武營(yíng)]

Determination of Thimerosal in Triamcinolone Acetonide Acetate Injection by HPLC Method

WANG Xianyou1，LIU Weifen2，HU Haiting1
（1.Pharmaceutical college of Henan University，Henan，Kaifeng 475004，China；2.Pharmacy teaching and research section of Henan Pharmaceutical School，Henan，Kaifeng 475004，China）

Abstract：ObjectiveTo establish method of Thimerosal Determination in Triamcinolone Acetonide Acetate Injection by HPLC.MethodsAccurate result was attained with C18column，using CH3OH-p H=5.0 phosphate buffer Solution（35∶65）as mobile phase；Column temperature was 25℃with Flow rate of 1.0m L/min and detection Wavelength 240nm.ResultsLinearity was good（r=0.999 6）at the range of 0.0505μg～0.824μg.Mean recovery was 99.32%with RSD=1.3%.ConclusionThis method was sensitive，Accurate and simple with good repeatability.

Key words：Thimerosal；Triamcinolone Acetonide Acetate Injection；HPLC Method.

作者簡(jiǎn)介:王先友(1971―),男,河南開封人,博士,副教授,從事藥物分析方法研發(fā)工作。

收稿日期:2015-03-18

中圖分類號(hào):R972.2

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A

文章編號(hào):1672―7606(2015)02―0098―02