黃 冰，周 勇，龍佳麗，侯水平，張欣強(qiáng)，吳新偉△

(1.廣東省廣州市疾病預(yù)防控制中心 510440；2.南方醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生與熱帶醫(yī)學(xué)學(xué)院,廣州 510440)

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·案例分析·

由腸炎沙門(mén)菌引起的食物中毒的病原檢測(cè)與同源性分析

黃 冰1，周 勇1，龍佳麗2，侯水平1，張欣強(qiáng)1，吳新偉1△

(1.廣東省廣州市疾病預(yù)防控制中心 510440；2.南方醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生與熱帶醫(yī)學(xué)學(xué)院,廣州 510440)

沙門(mén)菌； 食物中毒； 病原檢測(cè)

據(jù)統(tǒng)計(jì)，國(guó)內(nèi)報(bào)道的細(xì)菌性食物中毒事件中，沙門(mén)菌引起的占70%～80%[1-2]，其中引起沙門(mén)氏菌食物中毒的食品中，超過(guò)90%是肉類等動(dòng)物性產(chǎn)品。2014 年8月，廣州市發(fā)生一起因?yàn)槭秤玫案獾瓯晃廴镜牡案舛l(fā)的食物中毒事件，經(jīng)流行病學(xué)調(diào)查、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，并結(jié)合臨床癥狀，確認(rèn)這是由腸炎沙門(mén)菌引起的食物中毒，現(xiàn)對(duì)有關(guān)標(biāo)本的病原檢測(cè)與同源性分析結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2014年8月下午10點(diǎn)廣州市疾控中心接到報(bào)告，市某小區(qū)數(shù)人出現(xiàn)腹痛、腹瀉并伴有發(fā)熱癥狀到醫(yī)院就診，經(jīng)調(diào)查，患者均食用過(guò)小區(qū)附近某蛋糕店出售的蛋糕。5例患者中最短潛伏期為4 h，最長(zhǎng)18 h，發(fā)病大多集中在食用蛋糕后4～10 h。患者的主要臨床癥狀為急性胃腸道中毒癥狀，腹痛，腹瀉，黃色水樣便、有惡臭，發(fā)熱、最高體溫達(dá)39.9 ℃，經(jīng)使用抗菌藥物及對(duì)癥治療3 d后，病情全部好轉(zhuǎn)，無(wú)死亡患者。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑 自動(dòng)生化檢定儀(美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特Unicel Dxc 800 Synchron),脈沖凝膠電泳儀(德國(guó)耶拿Rotaphor 6.0)和凝膠成像系統(tǒng)BioRad Gel Doc Imaging system檢測(cè)所用增菌液、分離培養(yǎng)基均為廣東環(huán)凱生物科技有限公司產(chǎn)品；API 20E鑒定試劑條、VITEK 2鑒定卡(GN卡)均為法國(guó)生物梅里埃公司產(chǎn)品；沙門(mén)菌屬診斷血清由寧波天潤(rùn)生物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，均在有效期內(nèi)使用。

1.2.2 樣品采集 患者肛拭子5份，蛋糕店廚師肛拭子、手拭子各1份保存于Cary-Blair運(yùn)送培養(yǎng)基中送檢，2份糕點(diǎn)原料樣品、3份剩余食品樣品，低溫送檢。

1.2.3 病原菌篩查與鑒定 病原菌篩查與鑒定按照中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部頒發(fā)的《食品衛(wèi)生微生物檢驗(yàn)方法》GB/T 4789.4-2010操作。針對(duì)沙門(mén)菌、金黃色葡萄球菌、副溶血性弧菌、志賀菌、致瀉性大腸埃希菌、蠟樣芽孢桿菌先増菌，接種選擇性平板，三糖鐵生化后使用全自動(dòng)生化鑒定系統(tǒng)進(jìn)行鑒定[3]。

1.2.4 抗菌藥物敏感性實(shí)驗(yàn) 采用瓊脂擴(kuò)散法(K-B法)按照美國(guó)國(guó)家臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(CLSI 2013)的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)抑菌圈進(jìn)行判定。14種藥敏紙片包括氨芐西林、氨芐西林/舒巴坦、頭孢唑啉、頭孢他啶、頭孢吡肟、頭孢噻肟、環(huán)丙沙星、氯霉素、鏈霉素、磺胺復(fù)合物、四環(huán)素、萘啶酸、慶大霉素、甲氧芐氨嘧啶[4]。

1.2.5 脈沖場(chǎng)凝膠電泳 脈沖場(chǎng)凝膠電泳參照美國(guó)Pulsenet推薦的沙門(mén)菌脈沖場(chǎng)電泳標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行操作。PFGE 后的電泳圖譜用BioNumerics 6.6軟件進(jìn)行分析。PFGE分型的相對(duì)分子質(zhì)量參考標(biāo)準(zhǔn)菌株為沙門(mén)菌H9812。

2 結(jié) 果

2.1 細(xì)菌菌型鑒定結(jié)果分析 從5份患者肛拭樣品、廚師肛拭子1份、手拭子1份、3份剩余食品樣品均檢出生物學(xué)形狀一致的沙門(mén)菌，而2份食品樣品中未檢出致病菌，所有樣品未檢出金黃色葡萄球菌、副溶血性弧菌、志賀菌、致瀉性大腸埃希菌、蠟樣芽孢桿菌。10株可疑菌株的沙門(mén)菌血清學(xué)分型實(shí)驗(yàn)結(jié)果：O-F多價(jià)、O9和Hg,m呈強(qiáng)凝集,其抗原結(jié)構(gòu)式為9:g,m:-,對(duì)照White-Kauffmann-Le Minor抗原表，符合腸炎沙門(mén)抗原結(jié)構(gòu)。根據(jù)生化和血清學(xué)結(jié)果判定病原菌為腸炎沙門(mén)菌。

2.2 抗菌藥物敏感性分析 對(duì)10株腸炎沙門(mén)菌進(jìn)行了14種抗菌藥物的藥敏試驗(yàn)，10株腸炎沙門(mén)菌具有相同的耐藥譜，除對(duì)頭孢他啶、頭孢噻肟、頭孢吡肟等第3代和第4代頭孢類抗菌藥物以及環(huán)丙沙星、慶大霉素敏感外，對(duì)氯霉素、萘啶酸、磺胺復(fù)合物、鏈霉素、四環(huán)素以及甲氧芐氨嘧啶等均為耐藥。見(jiàn)表1。

表1 10株腸炎沙門(mén)菌藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果

注：R為耐藥；S為敏感。

2.3 病原菌溯源分析 分離到的10株腸炎沙門(mén)菌經(jīng)XbaI 酶切得到PFGE 圖譜，圖譜結(jié)果用BioNumerics6.6軟件分析，結(jié)果顯示：5份患者肛拭子與1份廚師肛拭子、1份手拭子、3份剩余食品樣品的腸炎沙門(mén)菌的PFGE 相同帶型，其PFGE 圖譜完全一致，同源性達(dá)100%，說(shuō)明所有菌株均來(lái)自同一克隆株。

3 討 論

細(xì)菌性食物中毒是指由于進(jìn)食被細(xì)菌或細(xì)菌毒素所污染的食物而引起的急性感染中毒性疾病。細(xì)菌性食物中毒是最常見(jiàn)的食物中毒，占各類食物中毒的60%～80%，引起細(xì)菌性食物中毒的細(xì)菌主要有沙門(mén)菌、副溶血性弧菌、大腸埃希菌、變形桿菌、蠟樣芽胞桿菌、金黃色葡萄球菌、肉毒毒素等，沙門(mén)菌引起的細(xì)菌性食物中毒多年來(lái)在廣州地區(qū)引起食物中毒的病原菌中一直占前3位[5-6]。該菌在自然界中的分布十分廣泛，多種家禽、家畜、魚(yú)類、飛鳥(niǎo)、鼠類及野生動(dòng)物的腸腔及內(nèi)臟中能查到此類細(xì)菌。細(xì)菌由糞便排出，污染飲水、食物、餐具，尤以新鮮肉類、蛋品、乳類較易受污染，人進(jìn)食后造成感染。本次食物中毒事件經(jīng)流行病學(xué)調(diào)查、實(shí)驗(yàn)室病原學(xué)檢測(cè)及同源性分析，依據(jù)WS/T13-1996《沙門(mén)菌食物中毒診斷標(biāo)準(zhǔn)及處理原則》和GB14938-1994《食物中毒診斷標(biāo)準(zhǔn)及技術(shù)處理原則》初步判定為這是一起因?yàn)槭秤帽荒c炎沙門(mén)菌污染的蛋糕而引起的食物中毒事件。

本事件中，詢問(wèn)蛋糕店廚師最近無(wú)發(fā)燒、腹瀉等癥狀，也沒(méi)有進(jìn)食過(guò)當(dāng)日制作的糕點(diǎn)，可疑蛋糕所用的2份糕點(diǎn)原料中未均檢出腸炎沙門(mén)菌，可排除原料污染的因素。而廚師肛拭子和手拭子中均檢出腸炎沙門(mén)菌，3份剩余食物樣品也檢出腸炎沙門(mén)菌，且PFGE圖譜與5例患者的分離株P(guān)FGE圖譜同源性為100%，說(shuō)明廚師為腸炎沙門(mén)菌的帶菌者。此次食物中毒的發(fā)生過(guò)程可能是廚師將所帶的腸炎沙門(mén)菌污染了由其制作的糕點(diǎn)，患者進(jìn)食糕點(diǎn)后被感染從而引起食物中毒。

在食物中毒事件的處理中，首先要注意標(biāo)本采集的完整性和合理性，其次如果能確定為感染來(lái)源的物料種類，要進(jìn)一步溯源到其最初的污染源及污染途徑，才能通過(guò)對(duì)發(fā)生于某一點(diǎn)的事件處置實(shí)現(xiàn)更大范圍的溯源和相關(guān)疾病的有效防控[7]。本次食物中毒事件中及時(shí)采集到廚師的肛拭子和手拭子是成功追溯到病原菌的源頭和傳播途徑的基礎(chǔ)，說(shuō)明在此類事件中樣品采集的重要性。因此若要從根本上控制食源性疾病的發(fā)生，就要對(duì)不同來(lái)源的菌株進(jìn)行溯源研究，追溯致病食品的來(lái)源所在，查明污染源頭，切斷傳播途徑。同時(shí)為預(yù)防類似食物中毒事件的再次發(fā)生，各地衛(wèi)生監(jiān)督部門(mén)應(yīng)加強(qiáng)對(duì)餐飲行業(yè)從業(yè)人員的健康檢查，加強(qiáng)食物中毒事件的檢測(cè)和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，以減少食物中毒事件的發(fā)生。

[1]王兵．沙門(mén)氏菌引起的食物中毒[J]．當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2012，18(23)：160．

[2]曹霞.一起沙門(mén)氏菌食物中毒的病原檢測(cè)分析[J].公共衛(wèi)生與預(yù)防醫(yī)學(xué),2012,23(6)：84-85.

[3]陳玉紅.一起沙門(mén)菌引起食物中毒的檢驗(yàn)結(jié)果分析[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2013,10(2)：206-207.

[4]張金華，王桂紅.一起由都伯沙門(mén)氏菌引起食物中毒的調(diào)查分析[J].東南大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版,2013,32(1):29-31.

[5]Tenover FC,Arbeit RD,Goering RV,et al． Interpreting chromosomal DNA restriction patterns produced by pulsed-field gel electrophoresis:criteria for bacterial strain typing[J].J Clin Microbiol,1995,33(9):2233-2239．

[6]景欽隆,毛新武,何潔儀,等.2006～2008年廣州市食源性疾病暴發(fā)監(jiān)測(cè)分析[J].中國(guó)食品衛(wèi)生雜志，2010,22(2):160-164.

[7]周勇,張欣強(qiáng),侯水平,等.廣州市76株沙門(mén)菌的血清型分布及耐藥性分析[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué),2014,41(2):349-352.

廣東省廣州市醫(yī)學(xué)重點(diǎn)學(xué)科建設(shè)項(xiàng)目(2013-2015-07)；廣東省廣州市醫(yī)藥衛(wèi)生科技項(xiàng)目重點(diǎn)項(xiàng)目(20121A021019)

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.14.071

B

1672-9455(2015)14-2135-02

2015-02-25

2015-04-15)

△通訊作者，E-mail：Yangbo76@126.com。