邢 瑩，屈晨雪，陸 遙，汪 潤，李智慧，王玎玲，宋一楠，朱 鷹

(北京大學(xué)第一醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京 100034)

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·臨床研究·

UniCel DxH 推染片一體機(jī)染色條件的設(shè)置及效果評(píng)價(jià)

邢 瑩，屈晨雪△，陸 遙，汪 潤，李智慧，王玎玲，宋一楠，朱 鷹

(北京大學(xué)第一醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京 100034)

目的 探索UniCel DxH推染片一體機(jī)的最佳染色條件，并對(duì)染色效果進(jìn)行評(píng)價(jià)。方法 通過改變?nèi)鹗?吉姆薩復(fù)合染液的染色時(shí)間、染液配比等方法獲取推染片一體機(jī)的最佳染色條件，在顯微鏡下觀察并評(píng)價(jià)不同方法制備的血涂片的染色效果。結(jié)果 延長緩沖液的染色時(shí)間可增強(qiáng)血涂片的著色效果，再在緩沖液中加入5%～10%的染液后可進(jìn)一步提高血涂片的染色效率，且對(duì)于血細(xì)胞形態(tài)的識(shí)別可以達(dá)到手工制片染色的效果。結(jié)論 在適宜的染色條件下，UniCel DxH制備的血涂片基本可以達(dá)到與手工染色相同的效果，對(duì)血細(xì)胞異常形態(tài)的識(shí)別較準(zhǔn)確，各實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立適宜的最佳染色方案。

瑞氏-吉姆薩染色； 白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)； 血液推染片機(jī)

全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀的廣泛應(yīng)用大大地提高了檢驗(yàn)效率，但是儀器檢查只能作為一種篩查手段，很多情況下仍需要進(jìn)行顯微鏡復(fù)檢。由于各個(gè)實(shí)驗(yàn)室執(zhí)行的復(fù)檢規(guī)則不同，其血涂片的復(fù)檢率也不盡相同，多數(shù)在10%～50%[1-2]。對(duì)于一些大型綜合性醫(yī)院而言，往往標(biāo)本量大且復(fù)檢率高，傳統(tǒng)的手工制片和染色耗時(shí)費(fèi)力。近年來，多個(gè)血細(xì)胞分析儀生產(chǎn)廠家都推出了全自動(dòng)的推片機(jī)和染片機(jī)，與血細(xì)胞分析儀組成工作站，將需要復(fù)檢的標(biāo)本直接通過推染片機(jī)即可完成推片和染色過程，可節(jié)約大量的人力資源。目前，我國已有多家實(shí)驗(yàn)室陸續(xù)實(shí)現(xiàn)了上述血細(xì)胞分析儀的“流水線”。然而，推染片機(jī)制備的血涂片質(zhì)量如何，是臨床實(shí)驗(yàn)室最為關(guān)心的問題，目前相關(guān)研究還比較缺乏。本研究以本實(shí)驗(yàn)室的UniCel DxH推染片一體機(jī)為例，探討全自動(dòng)推染片機(jī)使用時(shí)最佳染色條件的設(shè)置并對(duì)染色效果進(jìn)行評(píng)價(jià)。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 血標(biāo)本采集自本實(shí)驗(yàn)室臨床檢測剩余標(biāo)本。

1.2 儀器與試劑 UniCel DxH 推染片一體機(jī)及其配套試劑(美國貝克曼庫爾特公司)，瑞氏-吉姆薩復(fù)合染液(珠海貝索公司)，Olympus CX31雙目顯微鏡(日本奧林巴斯光學(xué)工業(yè)株式會(huì)社)。

1.3 方法

1.3.1 染色方法 通過不斷改變?nèi)鹗?吉姆薩復(fù)合染液的染色時(shí)間、染液配比等方法，尋找最佳的染色方案以達(dá)到滿意效果。首先參考染液說明書推薦的方法(方法A)進(jìn)行染色；然后通過不斷嘗試，延長染缸2緩沖液的染色時(shí)間(方法B)。此外，由于UniCel DxH推染片一體機(jī)可以改變?nèi)靖字腥疽号c緩沖液的比例，進(jìn)一步在2號(hào)染缸即緩沖液中加入5%～10%的染液(方法C)。見表1。

表1 不同染色方法染色條件設(shè)置

1.3.2 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 紅細(xì)胞染成淡粉紅色，白細(xì)胞的內(nèi)部結(jié)構(gòu)(細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì))著色清晰，能明顯鑒別不同種類的血細(xì)胞，包括原始細(xì)胞、不成熟粒細(xì)胞、有核紅細(xì)胞等。

注：A為單核細(xì)胞，B為中性粒細(xì)胞，C為嗜酸性粒細(xì)胞。

圖1 方法A染色效果圖(瑞氏-吉姆薩染色，×1 000)

2 結(jié) 果

將UniCel DxH推染片一體機(jī)制備的血涂片置于顯微鏡下確認(rèn)，結(jié)果顯示：采用方法A染色后的血涂片中白細(xì)胞的細(xì)胞核著色偏淺，以單核細(xì)胞最為明顯，見圖1；采用方法B染色后著色效果增強(qiáng)，見圖2；采用方法C染色后可以在較短時(shí)間內(nèi)加強(qiáng)染色效果。研究發(fā)現(xiàn)，方法B和方法C均能得到很好的染色效果，對(duì)于異常細(xì)胞的識(shí)別(如異型淋巴細(xì)胞、不成熟粒細(xì)胞、原始細(xì)胞等)也比較準(zhǔn)確，可以滿足臨床工作的需要。

注：A為中性粒細(xì)胞，B為淋巴細(xì)胞，C為嗜酸性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞。

圖2 方法B染色效果圖(瑞氏-吉姆薩染色，×1 000)

3 討 論

自動(dòng)化的染片機(jī)在使用時(shí)需要自定義染色步驟，其方法與手工染色存在較大的差異。一般情況下，染片機(jī)中放置數(shù)個(gè)染缸，血涂片分別在盛有染液、緩沖液及去離子水的染缸中浸泡后完成染色。本實(shí)驗(yàn)室的UniCel DxH推染片一體機(jī)內(nèi)部共有5個(gè)染缸，可以設(shè)置每個(gè)染缸中加入的成分(如染液、緩沖液或去離子水)，并且可以對(duì)其中的成分配比進(jìn)行調(diào)整。由于不同實(shí)驗(yàn)室的溫度、濕度等環(huán)境條件不同，可能同一型號(hào)的染片機(jī)也無法使用相同的條件設(shè)置，需要各實(shí)驗(yàn)室摸索出適合本實(shí)驗(yàn)室的染色條件。

本研究在不斷嘗試的過程中總結(jié)出以下幾點(diǎn)經(jīng)驗(yàn)：(1)白細(xì)胞的細(xì)胞核是否清晰是判斷血涂片染色效果的重點(diǎn)，而細(xì)胞核著色以單核細(xì)胞最為困難，其次為粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞，所以觀察時(shí)應(yīng)著重以單核細(xì)胞為參照。(2)增加細(xì)胞的著色效果可以通過兩種方法來實(shí)現(xiàn)。第一是延長在染液或緩沖液中的浸泡時(shí)間，第二是在緩沖液中加入一些染液。但是有的染片機(jī)無法改變?nèi)靖字谐煞值呐浔?如美國貝克曼庫爾特公司LH755染片機(jī))，因此只能采取第一種方法。在調(diào)整過程中要循序漸進(jìn)，盡量不要同時(shí)改變多個(gè)設(shè)置，否則不易發(fā)現(xiàn)影響染色效果的因素。(3)染色的過程中，血涂片在1號(hào)染缸即染液中浸泡的目的是固定和附著染液，這個(gè)過程不需要太長的時(shí)間，必須在2號(hào)染缸即緩沖液中浸泡才能完成著色。如果染色偏酸可以減少在緩沖液中的浸泡時(shí)間或去離子水的沖洗時(shí)間，反之亦然。因?yàn)槿旧珪r(shí)1號(hào)缸中的染液會(huì)被不斷帶入2號(hào)缸中，染色效果也會(huì)隨之加強(qiáng)。(4)儀器與手工方法的染色效果有時(shí)存在差異，如嗜酸性顆粒通常比手工染色更紅，單核和淋巴細(xì)胞的胞質(zhì)偏藍(lán)。(5)需要考慮實(shí)驗(yàn)室的濕度，濕度太大時(shí)需要適當(dāng)延長血涂片的干燥時(shí)間和染色時(shí)間。(6)染缸中的染液、緩沖液或去離子水要根據(jù)標(biāo)本量定期更換，染缸也需要定期清洗，每1～2周要從儀器中取出徹底清潔1次。

儀器制備的血涂片細(xì)胞形態(tài)都清晰可辨，對(duì)于異常細(xì)胞的識(shí)別尚未發(fā)現(xiàn)漏檢情況。由于目前國內(nèi)、外相關(guān)的研究和報(bào)道較少[4-9]，還有待于更多的研究來評(píng)價(jià)和驗(yàn)證。儀器制片的優(yōu)點(diǎn)在于節(jié)約勞動(dòng)力且效果比較穩(wěn)定，只要找到最佳的染色條件并做好儀器的維護(hù)保養(yǎng)，就可以明顯地提高工作效率。而且，儀器制備的血涂片分布均勻、細(xì)胞形態(tài)規(guī)整，染色后血涂片上的染液沉渣也很少。但是，儀器染色的流程與手工不同，染色效果也略有差異。因此，在使用初期需要與手工方法進(jìn)行比對(duì)，尤其對(duì)于一些異常細(xì)胞，如原始細(xì)胞、異型淋巴細(xì)胞等要重點(diǎn)觀察。因?yàn)樵技?xì)胞染色質(zhì)細(xì)致不易著色，當(dāng)數(shù)量較多時(shí)采用儀器的固有設(shè)置或許無法達(dá)到滿意的效果。所以，手工制片和染色不能完全摒棄，必要時(shí)需要用傳統(tǒng)方法進(jìn)行驗(yàn)證。

綜上所述，實(shí)驗(yàn)室在應(yīng)用全自動(dòng)推染片機(jī)時(shí)，應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況建立適合本實(shí)驗(yàn)室的染色方案。在染色條件設(shè)置合理的情況下，儀器制備的血涂片基本可以達(dá)到與手工染色相同的效果。而且，儀器操作可以實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化、批量化，染色的效果也較固定，非常適合應(yīng)用于復(fù)檢率高的大型醫(yī)院，可大大節(jié)約人力消耗，提高工作效率。

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10.3969/j.issn.1672-9455.2015.05.040

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1672-9455(2015)05-0676-02

2014-08-02

2014-10-14)

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