楊朝美，馬 珍

(重慶市急救中心檢驗(yàn)科 400015)

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·論 著·

微粒色譜法和高效液相色譜法檢測(cè)糖化血紅蛋白的相關(guān)性研究

楊朝美，馬 珍△

(重慶市急救中心檢驗(yàn)科 400015)

糖化血紅蛋白； 相關(guān)性； 微粒色譜法； 高效液相色譜法

近年來(lái)，隨著人們生活水平的提高和飲食結(jié)構(gòu)的改變，糖尿病的患病率逐年上升，成為威脅大眾健康的主要慢性非傳染性疾病之一。血糖水平的大幅度變化會(huì)激發(fā)多途徑代謝從而損傷微血管和大血管[1-2]，血糖控制較差的糖尿病患者更易并發(fā)感染,其致死、致殘率高[3]。糖化血紅蛋白(HbA1c)水平能體現(xiàn)患者近2個(gè)月的血糖情況，其作為糖尿病血糖回顧性觀察的常用指標(biāo)，在病情評(píng)估的同時(shí)，有助于臨床醫(yī)生調(diào)整患者的降糖方案。近年來(lái)，HbA1c作為糖尿病患者的血糖監(jiān)測(cè)指標(biāo)在臨床上被廣泛認(rèn)可，臨床醫(yī)生已將其作為評(píng)估糖尿病血糖控制水平的相對(duì)金標(biāo)準(zhǔn)[4]。微粒色譜法和高效液相色譜法是檢測(cè)HbA1c的兩種常用方法，根據(jù)美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)(CLSI)的指南文件EP9-A2[5]，本研究比較分析了上述兩種方法用以HbA1c檢測(cè)的相關(guān)性。現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源 樣本標(biāo)準(zhǔn)遵循EP9-A2[5]文件要求，隨機(jī)選定抽血時(shí)間，每日從本院門診和住院患者中選取8例全血標(biāo)本，連續(xù)收集5 d，共收集40例，其中男17例、女23例，所有標(biāo)本均無(wú)溶血，均以乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝，均在6 h以內(nèi)檢測(cè)。

1.2 儀器與試劑 微粒色譜法檢測(cè)系統(tǒng)采用挪威NycoCard?ReaderⅡ檢測(cè)儀；高效液相色譜法檢測(cè)系統(tǒng)采用上海惠中醫(yī)療科技有限公司MQ-2000PT糖化血紅蛋白儀。所有試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品均為相應(yīng)廠家提供的配套產(chǎn)品。

1.3 檢測(cè)方法 按照EP9-A2[5]文件的方法采樣后，以統(tǒng)計(jì)學(xué)隨機(jī)標(biāo)記的方法標(biāo)注每日的8份臨床全血標(biāo)本，按順序運(yùn)用2個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)HbA1c，再反序檢測(cè)，即每份標(biāo)本獲得2個(gè)值，連續(xù)測(cè)定5 d。檢測(cè)過(guò)程保證儀器的良好性能，由本院檢驗(yàn)科經(jīng)驗(yàn)豐富的技術(shù)人員嚴(yán)格遵循標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)章進(jìn)行檢測(cè)，使每日獲得的結(jié)果有良好的質(zhì)量控制。X(比較方法)和Y(試驗(yàn)方法)分別為微粒色譜法檢測(cè)系統(tǒng)和高效液相色譜法檢測(cè)系統(tǒng)。

1.3.3 數(shù)據(jù)作散點(diǎn)圖和偏倚圖 以比較方法測(cè)定的結(jié)果為X,試驗(yàn)方法測(cè)定的結(jié)果為Y，制作散點(diǎn)圖和偏倚圖，計(jì)算回歸方程，評(píng)價(jià)線性程度。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 將兩個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)所測(cè)得的對(duì)應(yīng)的HbA1c數(shù)據(jù)，根據(jù)EP9-A2[5 ]文件中的統(tǒng)計(jì)分析流程，運(yùn)用Excel2012進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié) 果

2.3 相關(guān)散點(diǎn)圖及偏倚圖分析 以比較方法結(jié)果為X，試驗(yàn)方法結(jié)果為Y制作散點(diǎn)圖，相關(guān)系數(shù)r=0.993，r2=0.986，線性回歸方程為Y=1.088 5X-0.521 4，回歸線性良好，且r≥0．975，表明兩種方法的數(shù)據(jù)相關(guān)性好，見圖1。兩種方法測(cè)定的平均值無(wú)明顯差異，且在X軸兩側(cè)均勻排列，見圖2。

圖1 挪威NycoCard?ReaderⅡ檢測(cè)儀和

Xi(%)

圖2 兩種檢測(cè)系統(tǒng)的偏倚圖

3 討 論

糖尿病患者的血糖監(jiān)測(cè)具有重要的臨床意義，臨床上主要通過(guò)檢測(cè)末梢血糖反映患者的實(shí)時(shí)血糖水平；而長(zhǎng)期的血糖水平則主要依據(jù)HbA1c水平的檢測(cè)值，該值可反映患者近2個(gè)月的血糖控制情況[7]。人體血液紅細(xì)胞中的正常血紅蛋白(Hb)主要由HbA1組成，占97%；其次為HbA2和HbF，分別占2.5%、0.5%。糖化血紅蛋白為葡萄糖分子與血紅蛋白A組分的組合產(chǎn)物，通過(guò)紅細(xì)胞的非酶促反應(yīng)，生成HbA1c酮胺化合物。HbA1c水平可體現(xiàn)被檢測(cè)者的長(zhǎng)期血糖水平，對(duì)糖尿病患者的血糖控制和用藥方案的制訂具有指導(dǎo)作用。目前用于HbA1c檢驗(yàn)的方法較多，主要依靠電荷或被檢測(cè)物的結(jié)構(gòu)進(jìn)行檢測(cè)。而色譜法是臨床檢測(cè)HbA1c的“金標(biāo)準(zhǔn)”，主要包括陽(yáng)離子交換層析法和高效液相色譜法[8-9]。本研究通過(guò)比較分析同一被測(cè)物微粒色譜法與高效液相色譜法的臨床評(píng)價(jià)結(jié)果，分析其檢驗(yàn)性能，為實(shí)驗(yàn)室HbA1c檢測(cè)方法的選擇提供指導(dǎo)和參考依據(jù)。

挪威NycoCard?ReaderⅡ檢測(cè)儀(微粒色譜法)的原理：檢測(cè)包含紅、綠、藍(lán)3對(duì)發(fā)光二極管[10]。光電二極管路線以白色樣品為參比樣品，對(duì)檢測(cè)樣品的光反射情況進(jìn)行測(cè)量。在NycoCard?ReaderⅡ檢測(cè)儀的測(cè)試菜單中選擇某一種檢測(cè)后，檢測(cè)所需發(fā)光二極管將照亮待測(cè)樣品，樣品對(duì)某些光的反射將在光電二極管回路中引起相反的電流，從而對(duì)電容進(jìn)行放電，使其電壓從V1線性降低至V2。電壓降至V2后，微處理器接受系統(tǒng)發(fā)送的訊號(hào)，并計(jì)算電壓從V1降低至V2所需時(shí)間(T)。反射光密度(I)與T呈反比，微處理器將時(shí)間轉(zhuǎn)換為濃度值，并將其顯示出來(lái)。

MQ-2000PT糖化血紅蛋白分析儀采用高效液相色譜法，由于非糖化血紅蛋白帶正電荷，而HbA1c幾乎不帶電，因此可根據(jù)所帶電量的不同將其分離。固定相選擇弱酸性陽(yáng)離子交換固定相，存在交換陽(yáng)離子的基團(tuán)，能同帶正電荷的非糖化血紅蛋白結(jié)合，在低濃度下洗脫出HbA1c，再利用高濃度洗脫液洗脫獲得非糖化血紅蛋白。被分離出來(lái)的血紅蛋白洗脫液通過(guò)415nm波長(zhǎng)的紫外光檢測(cè)吸光度，得到相應(yīng)的血紅蛋白層色譜。HbA1c水平以色譜圖中HbA1c的峰面積占血紅蛋白面積的百分率表示。高效液相色譜法分離效率高，能分離HbF、L-A1c等血紅蛋白的變異體，降低血紅蛋白變異體對(duì)穩(wěn)定的HbA1c檢測(cè)結(jié)果的干擾，使HbA1c的測(cè)定結(jié)果更加可靠。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，上述兩種檢測(cè)方法的重復(fù)性好，相互間無(wú)離群點(diǎn)存在；r=0.993，符合r≥0.975，相關(guān)性好。兩種方法在可進(jìn)行相關(guān)性研究的范圍內(nèi)，結(jié)果無(wú)明顯差異。此外，系統(tǒng)誤差可接受，偏倚分布佳。兩種方法的檢測(cè)原理雖有差異，檢測(cè)手段雖然不同，但實(shí)際所測(cè)結(jié)果無(wú)明顯差異。臨床上同一實(shí)驗(yàn)室采用多種方法測(cè)定HbA1c的現(xiàn)象較多，而實(shí)際的臨床應(yīng)用要求所獲得的結(jié)果不受測(cè)定方法的影響，因此實(shí)驗(yàn)室在應(yīng)用不同方法測(cè)定HbA1c時(shí)必須可比、可替代。微粒色譜法和高效液相色譜法測(cè)定的HbA1c結(jié)果具有可比性和較好的相關(guān)性，表明兩種方法的測(cè)定結(jié)果類似，可相互替換，均可用于臨床。

綜上所述，微粒色譜法和高效液相色譜法可比性高，相關(guān)性好，符合臨床需求。實(shí)驗(yàn)室可根據(jù)自身?xiàng)l件，選擇適合的測(cè)定方法。

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Study on relationship between particle chromatography and high performance liquid chromatography in detection of glycosylated hemoglobin

YANGChao-mei,MAZhen△

(DepartmentofClinicalLaboratory,ChongqingEmergencyMedicalCenter,Chongqing400015，China)

glycosylated hemoglobin; correlation; particulate chromatography; high performance liquid chromatography

楊朝美，女，本科，主管檢驗(yàn)技師，主要從事生化檢驗(yàn)研究。△

,E-mail:mzhen100@163.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.05.024

A

1672-9455(2015)05-0641-03

2014-10-26

2014-12-28)