李金密，龔春梅，何秀玲，陳開春，王 豐

(第三軍醫(yī)大學大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所檢驗科，重慶 400042)

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·論 著·

干化學與濕化學分析儀的可比性分析

李金密，龔春梅，何秀玲，陳開春，王 豐△

(第三軍醫(yī)大學大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所檢驗科，重慶 400042)

目的 探討不同生化分析儀16項常規(guī)生化指標測定結(jié)果的可比性。方法 參照美國臨床實驗室標準化委員會(NCCLS)EP9-A2文件，以貝克曼DXC800全自動生化分析儀為參比系統(tǒng)，以強生VITROS5600全自動生化免疫分析儀為待比系統(tǒng)，用患者新鮮血清分別在2臺儀器上檢測16項常規(guī)生化指標，檢查離群點，計算相關(guān)系數(shù)和直線回歸方程，評估2個系統(tǒng)的預期偏差，并以美國臨床實驗室改進修正案(CLIA′88)對室間評估的允許誤差的1/2為判斷依據(jù)，對強生VITROS5600干化學系統(tǒng)的臨床可接受性進行評價。結(jié)果 參比系統(tǒng)與待比系統(tǒng)具有良好的相關(guān)性，除丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、乳酸脫氫酶(LDH)、肌酐(Crea)及部份醫(yī)學決定水平處天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、總鈣(Ca)、血清總蛋白(TP)測定結(jié)果的偏差外，其余指標測定結(jié)果的偏差臨床均可接受。結(jié)論 強生VITROS5600干化學分析儀與Beckman DXC800全自動生化分析儀的檢測結(jié)果具有可比性，但ALT、AST、LDH、Ca、Crea、TP臨床比對多水平處的偏差不可接受，仍有必要針對不同方法建立不同的參考區(qū)間。

干化學； 醫(yī)學決定水平； 可比性

近年來隨著檢驗醫(yī)學的不斷發(fā)展，為滿足不同層次的臨床需求，各檢驗科配備了多套生化分析系統(tǒng)分別承擔急診和平診的生化檢驗工作。干化學法以其操作簡便、快速的特點，成為急診生化檢測的一種新手段[1]。但在臨床實踐中，同一標本同一項目在不同儀器上的檢測結(jié)果可能存在一定的差異，在一定程度上會影響臨床診療過程[2-3]。因此，分析不同檢測系統(tǒng)之間的相關(guān)性及各個檢測系統(tǒng)的檢驗性能具有十分重要的意義[4]。故本文參考美國臨床實驗室標準化委員會(NCCLS)的EP9-A2文件要求，以貝克曼DXC800系統(tǒng)檢測結(jié)果為基準，將強生VITROS5600干化學系統(tǒng)檢測結(jié)果與基準儀器檢測結(jié)果進行比較及偏倚評估。

1 材料與方法

1.1 標本來源 收集本院門診及住院患者不同濃度新鮮血清40份，濃度覆蓋各項目醫(yī)學決定水平，排除黃疸、乳糜、溶血標本。

1.2 儀器與試劑 美國貝克曼DXC800全自動生化分析儀(簡稱DXC800)及原裝配套試劑、質(zhì)控品、校準品；美國強生VITROS5600全自動生化免疫分析儀(簡稱VITROS5600)及原裝配套試劑、質(zhì)控品、校準品。

1.3 方法

1.3.1 標本處理 DXC800具有較好的量值傳遞性能，測定結(jié)果的變異系數(shù)小，重復性好，參加室間質(zhì)評成績優(yōu)秀，且定期校準，測定結(jié)果可靠，作為參比系統(tǒng)[4-5]；美國強生VITROS 5600作為待比系統(tǒng)[6-7]。參照NCCLS的 EP9-A2文件要求[5-8]，每日選取患者新鮮血標本8份，使用上述2個系統(tǒng)對血清總蛋白(TP)、清蛋白(ALB)、堿性磷酸酶(ALP)、淀粉酶(AMY)、尿酸(UA)、尿素(Urea)、鈉(Na+)、氯(Cl-)、鉀(K+)、葡萄糖(Glu)、總膽紅素(TBIL)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、乳酸脫氫酶(LDH)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、總鈣(Ca)、肌酐(Crea)分別進行雙份重復測定，連續(xù)5 d，共分析40個標本。實驗前按常規(guī)方法進行檢測前的維護和保養(yǎng)，確保儀器處于正常運行狀態(tài)，每個指標的檢測嚴格按照廠商試劑盒說明書進行操作，室內(nèi)質(zhì)控在控，各標本均在采集后2 h內(nèi)完成測定。

1.3.2 離群值檢查 按EP9-A2文件進行方法間離群值檢查。

1.4 統(tǒng)計學處理 (1)參比方法(X)測定范圍的檢驗：參比方法的測定范圍是否合適，采用相關(guān)系數(shù)(r)進行評估，若r≥0.975或r2≥0.95，認為2種方法具有良好的相關(guān)性；否則，說明2種方法的相關(guān)性不高。(2)計算線性回歸方程：以待比方法Y=bX+a計算臨床可接受性，把各指標的醫(yī)學決定水平值代入回歸方程，計算待比方法(Y)與參比方法(X)之間的預期值、預期偏差、相對偏差(SE%)。(3)臨床可接受性判斷：以美國臨床實驗室改進修正案(CLIA′88)對室間評估的允許誤差為判斷依據(jù)，要求方法學比較評估的SE小于或等于CLIA′88標準的1/2屬臨床可接受水平，即不同檢測系統(tǒng)的測定結(jié)果具有可比性。

2 結(jié) 果

2.1 離群點判斷 按EP9-A2文件進行方法間離群點檢驗，此次所驗證的16項常規(guī)生化指標均未發(fā)現(xiàn)離群點。

2.2 各指標相關(guān)系數(shù)及直線回歸方程 經(jīng)線性回歸分析結(jié)果顯示，貝克曼DXC800系統(tǒng)與強生VITROS5600干化學系統(tǒng)16項目常規(guī)生化指標檢測結(jié)果具有良好的相關(guān)性，r2均大于0.95，且回歸分析的斜率和截距可靠。見表1。

表1 各指標相關(guān)系數(shù)及直線回歸方程待比方法 與參比方法的

2.3 實驗方法的預期偏差及臨床可接受性評價 本次共研究16個常規(guī)生化項目發(fā)現(xiàn)TP在低水平的預期偏差不能接受，且AST、LDH、ALT、Crea、Ca這5個指標在多水平的預期偏差不能接受，其余各指標各不同醫(yī)學決定水平處的預期偏差均小于1/2 CLIA′88，可以接受。見表2。

表2 實驗方法的預期偏差可接受性評價

續(xù)表2 實驗方法的預期偏差可接受性評價

3 討 論

本實驗按EP9-A2文件要求采用患者血清標本進行方法比對，VITROS 5600與DXC800的檢測結(jié)果具有良好的相關(guān)性，但偏差評估結(jié)果顯示本次共研究16個常規(guī)生化指標發(fā)現(xiàn)TP在低水平的預期偏差不能接受，且AST、LDH、ALT、Crea、Ca這5個項目在多水平的預期偏差不能接受，其余各指標各不同醫(yī)學決定水平處的預期偏差均小于1/2 CLIA′88，可以接受。分析出現(xiàn)預期偏差不可接受的原因，TP低水平處偏差不可接受可能是由于方法學不一致所致。干化學分析儀按濃度-反射光度關(guān)系，將非線性關(guān)系轉(zhuǎn)換成線性關(guān)系；而濕化學分析儀遵循Lam-bert-Beer定律，根據(jù)溶液顏色的深淺或測定光線被溶液吸收的程度來測定物質(zhì)含量，即濃度-透光度的關(guān)系，呈線性。而AST、LDH、ALT、Crea、Ca這5項指標不但分析方法不一致，兩個系統(tǒng)的基本反應原理也不盡相同，從而可以解釋兩者檢測結(jié)果偏差在多水平不可接受。

強生干化學分析儀所使用的干片試劑由多層薄膜組成，第1層為分布擴散層，能使標本均勻分布，過濾大分子，將溶血、高血脂及膽紅素干擾減低至最低，同時還提供反射測定的背景；第2層為試劑層，包含干性試劑，控制反應順序；第3層為指示劑層，包含染料以產(chǎn)生顯色復合物[9]。其獨特的多層膜技術(shù)，不僅能掩蓋待測物的有色物質(zhì)并提供背景，還能選擇性地阻留或去除干擾物質(zhì)，有效提高其抗干擾能力[10]。VITROS 5600的干片試劑主要有2種類型，其中比色/速率干片主要用以檢測TP、ALB、AMY、AST、AMY等，通過顏色的變化來測定化合物的濃度；電動電勢干片主要用以檢測K+、Na+、Cl-離子，通過測定兩極間電勢變化檢測相應的離子濃度[11]。

DXC 800與VITROS 5600對ALT、AST測定的底物一樣，化學反應原理一樣，除反應體系的干、濕差別外，其區(qū)別主要在于VITROS 5600干化學反應體系中加入了磷酸吡哆醛作為輔基，可增強ALT的活性，所以理論上同一樣本的ALT測定值，VITROS 5600應高于DXC 800。在DXC 800系統(tǒng)對LDH的檢測中，LDH催化L-乳酸氧化為丙酮酸，同時將β-煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)可逆地還原為還原型β-煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)，系統(tǒng)通過監(jiān)測340 nm處的吸光度變化檢測LDH活性。而VITROS 5600系統(tǒng)則通過反射光光度測定法監(jiān)測LDH催化丙酮酸和 NADH 轉(zhuǎn)化為乳酸和 NAD+的氧化過程，再將其轉(zhuǎn)化成LDH活性而進行檢測。在Ca的測定中，DXC800系統(tǒng)采用一個鈣離子選擇電極和一個鈉參考電極測定總鈣濃度；而強生VITROS5 600系統(tǒng)采用比色法，即鈣與偶氮胂Ⅲ染料形成一種復合物，使最大吸收峰發(fā)生偏移，孵育后有色復合物的反射強度通過分光光度法進行測定[12]。DXC800系統(tǒng)采用堿性苦味酸法測定Crea濃度，標本中的Crea與堿性苦味酸結(jié)合，生成一種紅色絡(luò)合物，光吸收率顯示與樣品中Crea濃度成正比[13]。VITROS5600系統(tǒng)測定Crea濃度時，Crea擴散到試劑層水解為肌酸，通過肌酸脒基水解酶的作用，Crea轉(zhuǎn)化為肌氨酸和尿素；肌氨酸在肌氨酸氧化酶的作用下氧化為甘氨酸、甲醛和過氧化氫；最后通過一種無色染劑的過氧化物酶催化氧化作用產(chǎn)生一種有色物質(zhì)；測量兩個時間點上所產(chǎn)生的反射強度的變化，該反射強度差值與標本中的Crea濃度成正比。

目前，干化學和濕化學分析儀均已得到廣泛的應用。本實驗中VITROS 5600與DXC800的檢測結(jié)果具有可比性，但ALT、AST、LDH、Ca、Crea、TP臨床比對多個醫(yī)學決定水平處的偏差不可接受。楊萍[14]報道，臨床應用中可各自建立獨立的參考區(qū)間，不能以單一改變校正因數(shù)或系數(shù)來矯正干、濕化學的分析偏倚。因此，干化學分析儀在臨床應用中，尤其對于預期偏差不能接受的檢測指標，應建立適合本實驗室的參考區(qū)間。

[1]李鴻飛，邱廣斌．常用生化指標干化學與濕化學檢測結(jié)果的比較分析[J]．檢驗醫(yī)學與臨床，2013，10(1)：109-111．

[2]梁瑞蓮，周遠青，謝麗明，等．同室不同生化檢測系統(tǒng)測定結(jié)果的比對的比對和偏倚評估[J]．檢驗醫(yī)學與臨床，2009，6(14)：1159-1160．

[3]馮仁豐．互換性依然是問題[J]．檢驗醫(yī)學，2013，28(12)：1063-1068．

[4]叢玉?。R床實驗室管理[M]．北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2004：48-50．

[5]何謙，趙麗華，王香玲，等．不同檢測系統(tǒng)生化結(jié)果的可比性研究[J]．現(xiàn)代檢驗醫(yī)學雜志，2007，22(6)：53-55．

[6]National Committee for Clinical Laboratory Standards．EP9-A2 Method comparison and bias estimation using patient samples [S]．Wayne,PA：NCCLS，2002．

[7]楊有業(yè)，張秀明．臨床檢驗方法學評價[M]．北京：人民衛(wèi)生出版社，2009：118-136．

[8]黃維綱，賈汝靜，張健，等．醫(yī)學檢驗領(lǐng)域能力驗證計劃的比較[J]．檢驗醫(yī)學，2013，28(10)：937-943．

[9]袁平宗，湯雪彪，胡江紅，等．強生干化學350與日立7600-020檢測系統(tǒng)可比性分析[J]．國際檢驗醫(yī)學雜志，2013，34(10)：1299-1301．

[10]Curc H，Rand RN．Early history of Eastman Kodak ektachem slides[J]．Clin Chem，1997，43(9)：1647-1652．

[11]劉豐偉，鄒國英，賀軍宇，等．強生VITROS 5600全自動生化免疫分析儀生化檢測項目正確度評價[J]．中國醫(yī)療前沿，2012，7(18)：1-3．

[12]鐘金清，胡亞遠．貝克曼庫爾特DxC800生化分析儀離子選擇電極國產(chǎn)試劑的應用與評價[J]．實用醫(yī)技雜志，2010，17(10)：968-969．

[13]梁凌云，陳佳，周德鵬．不同檢測系統(tǒng)間肌酐,淀粉酶結(jié)果參考區(qū)間轉(zhuǎn)移的可行性研究[J]．國際檢驗醫(yī)學雜志，2014，35(2)：210-212．

[14]楊萍．干、濕化學法檢測部分生化項目結(jié)果比較[J]．蚌埠醫(yī)學院學報，2006，31(1)：83-84．

Comparability analysis between dry chemistry analyzer and wet chemistry analyzer

LIJin-mi,GONGChun-mei,HEXiu-ling,CHENKai-chun,WANGFeng△

(DepartmentofClinicalLaboratory,ResearchInstituteofFieldSurgery,DapingHospital,ThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing400042,China)

Objective To investigate the comparability of the results of 16 routine biochemical indexes detected by different biochemical analyzers.Methods With the Beckman DXC800 automatic biochemical analyzer as the reference system and the VITROS5600 automatic biochemical immune analyzer as the compared system according to the EP9-A2,guideline established by NCCLS.The 16 routine biochemical indexes were detected in serum of patients by the two instruments.The clinical acceptability of the VITROS5600 dry chemistry system was evaluated according to the judgment basis of 1/2 allowable error of the external quality assessment in CLIA′88 standard.Results The reference system and the compared system had better comparability.All tests showed good correlation between the two analytical systems.The biases of all tests were clinically acceptable,except for ALT,LDH,Crea,AST,Ca and TP.Conclusion The VITROS5600 dry chemical instrument could have good comparability with the Beckman DXC800 automatic biochemical analyzer.But the biases of ALT,AST,LDH,Ca and Crea and TP in the clinical comparison at multiple levels were not acceptable.It is necessary to establish the different reference ranges aiming at different methods.

dry chemistry； medical decision level； comparability

李金密，女，本科，主管技師，主要從事臨床基礎(chǔ)檢驗與臨床研究。△

，Email：wangfnew@gmail.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.05.011

A

1672-9455(2015)05-0606-03

2014-11-10

2014-12-20)