蘭世萍 葉春燕 王導新 朱濤

（1.成都市金牛區(qū)人民醫(yī)院中醫(yī)科，四川成都610000；2.成都市金牛區(qū)人民醫(yī)院九里堤社區(qū)衛(wèi)生服務中心，四川成都610000；3.重慶醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院呼吸內(nèi)科，重慶404000；4.四川大學華西醫(yī)院呼吸內(nèi)科，四川成都610041）

支氣管哮喘（哮喘）是呼吸系統(tǒng)的常見疾病。流行病學研究顯示，全球有近3億哮喘患者［1～3］。隨著全球支氣管哮喘防治創(chuàng)議（Global Initiative for Asthma，GINA）的逐步推廣，哮喘患者的臨床控制率明顯增加，但哮喘的急性發(fā)作率和死亡率并未明顯下降［3］。目前認為哮喘是一種非特異性氣道炎癥性疾病，抗炎治療是哮喘的核心［3］。研究發(fā)現(xiàn)黃藤素（Pal－matine，巴馬?。┚哂酗@著抑制炎癥反應的作用，并認為其藥理作用與下調(diào)NF－κB活化水平密切相關(guān)［4，5］。本實驗的目的是觀察黃藤素輔助治療對哮喘急性發(fā)作期患者炎癥狀態(tài)和肺功能的影響，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 按照診斷標準［3］，將我院2011年3月～2013年10月收治的60例中～重度急性發(fā)作期支氣管哮喘患者隨機平均分為治療組和對照組各30例，治療組中男17例，女13例，年齡（56.7±21.3）歲；對照組中男18例，女12例，年齡（61.2±19.4）歲。支氣管哮喘病史皆大于5年。兩組患者在年齡、病程和病情等方面比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 治療方法 兩組患者均給予抗菌素、氨茶堿和化痰藥等常規(guī)治療，并以布地奈德1mg（普米克令舒，英國阿斯利康）加生理鹽水2ml霧化吸入，2次／天。干預組在常規(guī)治療基礎上加用黃藤素膠囊（上海華源安徽仁濟制藥有限公司）0.4g口服，3次／天。在治療過程中未出現(xiàn)過敏和藥物熱等嚴重不良反應。

1.2.2 肺功能檢測 兩組患者均于治療前及治療5天后進行肺功能測定。吸入200μg沙丁胺醇15 min后測定FEV1占預計值%和PEF個人最佳值%。

1.2.3 血中IL－4、IL－5和IL－13水平檢測 取患者治療前及治療5天后清晨空腹靜脈血，根據(jù)ELISA試劑盒（R＆D Systems，USA）說明書方法，對血中IL－4、IL－5和IL－13水平進行檢測。

1.2.4 血細胞中NF－κB p65活化水平檢測 取患者治療前與治療5天后清晨空腹靜脈血，按照試劑盒操作要求提取血細胞中總蛋白，并進行聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS－PAGE），然后移至硝酸纖維素濾膜上用脫脂奶粉封閉1小時，分別加入鼠抗人單克隆抗體antitotal NF－κB p65（1∶1000）和anti－phosph－NF－κB p65（1∶1000），4℃孵育過夜，洗膜后加入相應的辣根過氧化物酶標記的二抗（1∶1000），用ECL進行顯色，用凝膠成像分析系統(tǒng)進行掃描。用與total NF－κB p65條帶灰度比值作為phosph－NF－κB p65的相對表達量。

1.3 統(tǒng)計學分析 用SPSS17.0軟件進行分析，計算數(shù)據(jù)使用±s表示，組間比較采用t檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 治療前后FEV1占預計值%和PEF個人最佳值%比較 經(jīng)5天治療后兩組患者FEV1占預計值%和PEF個人最佳值%較治療前均有明顯改善，差異有統(tǒng)計學意義（均P＜0.05）；且干預組較對照組改善更加顯著，差異有統(tǒng)計學意義（均P＜0.05），見表1。

2.2 血中IL－4、IL－5和IL－13水平測定 經(jīng)過5天治療后，兩組患者血中IL－4、IL－5和IL－13水平均較治療前明顯下降，差異有統(tǒng)計學意義；且干預組患者下降更加明顯，差異有統(tǒng)計學意義（均P＜0.05），見表2。

2.3 血中NF－κB p65活化水平 治療5天后，兩組患者血細胞中磷酸化NF－κB p65／總NF－κB p65比值均較治療前明顯下降，差異有統(tǒng)計學意義（均P＜0.05）；且干預組患者比值下降更加明顯，差異有統(tǒng)計學差異（均P＜0.05），見圖1、表2。

表1 兩組患者治療前后FEV1占預計值%和PEF個人最佳值%比較（±s）Table 1 FEV1%and PEF%in two group

表1 兩組患者治療前后FEV1占預計值%和PEF個人最佳值%比較（±s）Table 1 FEV1%and PEF%in two group

注：與治療前比較，①P＜0.05；與對照組比較，②P＜0.05

指標 干預組（n＝30）對照組（n＝30）治療前 治療5天 治療前 治療5天FEV 1占預計值% 48.7±18.3 76.2±20.6①② 46.8±19.1 63.4±17.8①PEF個人最佳值% 33.6±13.7 58.9±16.5①② 34.5±12.4 45.7±15.3①

表2 兩組患者血中IL－4、IL－5和IL－13水平及血細胞磷酸化NF－κB p65／總NF－κB p65比值（±s）Table 2 The serum levels of IL－4，IL－5 and IL－13 in two groups

表2 兩組患者血中IL－4、IL－5和IL－13水平及血細胞磷酸化NF－κB p65／總NF－κB p65比值（±s）Table 2 The serum levels of IL－4，IL－5 and IL－13 in two groups

注：與治療前比較①P＜0.05；與對照組比較②P＜0.05

指標 干預組（n＝30） 對照組（n＝30）治療前 治療5天 治療前 治療5天IL－4（pg／ml） 144.2±36.2 93.1±24.5①② 155.6±43.4 112.8±19.6①IL－5（pg／ml） 6456.8±1277.2 4459.5±682.2①② 6251.7±1362.3 5371.4±892.7①IL－13（pg／ml） 15.7±3.7 8.1±2.1①② 16.1±3.4 12.3±1.7①磷酸化NF－κB p65／總NF－κB p65 0.93±0.2 0.45±0.11①② 0.92±0.23 0.73±0.15①

圖1 兩組患者血細胞中磷酸化NF－κB p65和總NF－κB p65的表達水平Figure 1 The protein expression of phosph－NF－κB p65 and total NF－κB p65 in blood.

3 討論

支氣管哮喘（bronchial asthma，哮喘）是最常見的慢性呼吸系統(tǒng)疾病之一，研究表明全球患病人數(shù)近3億［1～3］。同時流行病學調(diào)查顯示，由于空氣污染的加劇，哮喘的發(fā)病率呈逐年增加的趨勢［3，6］。另一方面，雖然隨著GINA的逐步推廣，明顯增加了哮喘患者的臨床控制率，但哮喘的急性發(fā)作率和死亡率并未明顯下降［3］。

哮喘是一種由多種細胞（包括肥大細胞、T淋巴細胞、中性粒細胞、嗜酸性粒細胞和氣道上皮細胞等）和炎癥介質(zhì)參與的慢性氣道炎癥性疾病。持續(xù)的氣道炎癥反應是哮喘發(fā)生和發(fā)展的重要原因［1～3］。慢性氣道炎癥可致氣道的慢性持續(xù)性破壞，導致反復修復和結(jié)構(gòu)重塑，最終發(fā)展為不完全可逆性氣道阻塞［1］。因此，控制氣道慢性炎癥成為延緩支氣管哮喘患者病情進展與肺功能進行性衰退的關(guān)鍵［6～8］。黃藤素（Palmatine）是防己科植物黃藤中提取得到的生物堿。研究發(fā)現(xiàn)黃藤素具有包括抑制炎癥反應、抑制氧化應激、抗病毒、抗細菌和抗真菌等多種藥理學活性［9，10］。目前黃藤素主要用于上呼吸道感染、感染性腹瀉、結(jié)膜炎和陰道炎等炎癥相關(guān)性疾病的輔助治療［9］。我們的研究發(fā)現(xiàn)，在給予成年中到重度急性發(fā)作期哮喘患者霧化吸入糖皮質(zhì)激素等常規(guī)治療的基礎上予黃藤素輔助治療5天后，肺功能指標（FEV1占預計值%和PEF個人最佳值%）較對照組患者改善更加明顯，差異有統(tǒng)計學意義（均P＜0.05）。該結(jié)果表明黃藤素具有擴張支氣管、改善肺功能的作用。

Th2細胞的過度活化及相關(guān)的細胞因子（主要包括IL－4、IL－5和IL－13等）持續(xù)釋放是導致嗜酸性粒細胞和巨噬細胞等炎癥細胞浸潤的重要原因［1－3］。我們使用ELISA對患者血中IL－4、IL－5和IL－13的表達水平進行檢測后發(fā)現(xiàn)，在常規(guī)治療基礎上使用黃藤素治療5天后哮喘患者血中IL－4、IL－5和IL－13水平較對照組患者下降更明顯，差異有統(tǒng)計學意義（均P＜0.05）。基礎研究發(fā)現(xiàn)，黃藤素抑制炎癥反應和抗氧化應激作用與下調(diào)NF－κB活化水平密切相關(guān)［4，5，9，10］。同時大量基礎和臨床研究均證實，NF－κB信號通路在哮喘相關(guān)的氣道炎癥反應中扮演著重要的角色［1，3，11］。下調(diào)或抑制NF－κB信號通路可以有效地抑制氣道炎癥反應，改善哮喘動物模型和患者的肺功能及臨床癥狀，是哮喘等炎癥性疾病治療的重要靶點［12］。我們使用western blot法對患者血細胞NF－κB p65活化水平進行分析發(fā)現(xiàn)，在常規(guī)治療基礎上使用黃藤素治療5天后哮喘患者血細胞磷酸化NF－κB p65／總NF－κB p65比值較對照組下降更加明顯，差異有統(tǒng)計學差異（均P＜0.05）。研究表明，黃藤素可以有效抑制哮喘相關(guān)的炎癥反應，并可能與下調(diào)NF－κB活化水平密切相關(guān)。該臨床研究過程中干預組患者未出現(xiàn)與黃藤素相關(guān)的嚴重不良反應。

4 結(jié)論

本研究結(jié)果提示，黃藤素可能通過抑制NF－κB的活化下調(diào)支氣管哮喘急性發(fā)作期患者的炎癥水平，改善患者的肺功能，為黃藤素應用于支氣管哮喘的治療奠定了基礎。但本研究入組樣本量和觀察時間有限，仍需要大規(guī)模、多中心和隨機的臨床觀察資料進一步證實黃藤素在支氣管哮喘治療中的價值。

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