歐武英，鐘威達

(1.海南省海口市人民醫(yī)院檢驗科 570208；2.海南婦產(chǎn)科醫(yī)院檢驗科，?？?570105)

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·論 著·

HER-2基因表達在乳腺原發(fā)癌和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌發(fā)病中的作用研究

歐武英1，鐘威達2

(1.海南省?？谑腥嗣襻t(yī)院檢驗科 570208；2.海南婦產(chǎn)科醫(yī)院檢驗科，海口 570105)

目的 探討使用熒光原位雜交技術(shù)檢測乳腺原發(fā)癌和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌HER-2基因的表達及意義。方法 選取?？谑腥嗣襻t(yī)院2013年1月至2014年1月收治的乳腺原發(fā)癌患者40例作為研究對象，對其臨床資料進行回顧性分析。應(yīng)用熒光原位雜交技術(shù)(FISH)與免疫組織化學技術(shù)(IHC)對所有患者手術(shù)切除標本的HER-2基因表達予以檢測。結(jié)果 FISH陽性率為42.5%，IHC為57.5%；IHC陰性時與FISH符合率為88.2%，IHC(+)與FISH符合率為37.5%，IHC(++)與FISH符合率為83.3%，IHC(+++)與FISH符合率為100.0%。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性率為66.67%，未轉(zhuǎn)移陽性率為32.14%，對比差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結(jié)論 IHC對HER-2基因予以檢測時若結(jié)果為陰性或者強陽性則與FISH符合率較高，同時HER-2基因表達與腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間呈正相關(guān)關(guān)系。

熒光原位雜交技術(shù)； 乳腺原發(fā)癌； 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌； HER-2基因

乳腺癌為惡性腫瘤，在臨床中常見。近年來隨著人們生活習慣的改變，乳腺癌發(fā)病率逐漸上升，而臨床卻無法有效控制其病死率[1]。對于乳腺癌患者而言，轉(zhuǎn)移是導致其病死的主要原因。腫瘤轉(zhuǎn)移過程極其復(fù)雜，與生物學有關(guān)，當前使用常規(guī)病理學無法準確評估不同患者腫瘤轉(zhuǎn)移潛能以及預(yù)后[2]。而經(jīng)大量研究后發(fā)現(xiàn)HER-2基因密切關(guān)聯(lián)于乳腺癌患者的治療方案，例如化療、內(nèi)分泌、Herceptin、預(yù)后等方案的選擇[3]。本文為探討使用熒光原位雜交技術(shù)檢測乳腺原發(fā)癌和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌HER-2基因的表達及意義，現(xiàn)選取患者40例作為研究對象，回顧性分析其臨床資料，并報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取?？谑腥嗣襻t(yī)院2013年1月至2014年1月收治的乳腺原發(fā)癌患者40例作為研究對象，收集所有患者的手術(shù)切除標本，應(yīng)用熒光原位雜交技術(shù)(FISH)與免疫組織化學技術(shù)(IHC)對所有患者手術(shù)切除標本的HER-2基因表達予以檢測。40例患者年齡31～79歲，平均(56.3±4.7)歲；38例為浸潤性導管癌，浸潤性小葉癌與浸潤性導管-小葉癌各為1例。使用10%中性福爾馬林對所有標本予以固定，并使用常規(guī)石蠟進行包埋處理。

1.2 方法 FISH檢測法：組織切片每片為2 μm，將其放置于載玻片上，之前已使用L-多聚賴氨酸對載玻片予以處理，而后放置于65 ℃環(huán)境下烘烤，過夜后按照試劑盒說明書嚴格規(guī)范試驗操作。FISH試劑盒產(chǎn)自北京金菩嘉。IHC檢測法：組織切片每片為4 μm，將其放置于載玻片上，之前已使用L-多聚賴氨酸對載玻片予以處理，而后放置于65 ℃環(huán)境下烘烤，時間持續(xù)1 h，而后按照試劑盒標準嚴格規(guī)范操作，該試劑盒產(chǎn)自福州邁新。質(zhì)量控制：載玻片經(jīng)多聚賴氨酸處理后,設(shè)置不同的DNA樣品區(qū),將不同DNA樣品溶液分別加到其上,風干后紫外交聯(lián)儀照射,使DNA結(jié)合到玻片上,得到簡化的染色體片,而后進行免疫檢測,通過不同區(qū)域信號的反應(yīng)得出熒光原位雜交質(zhì)量反饋。采用本監(jiān)控方法,可以快速地鎖定雜交過程中出現(xiàn)問題的中間環(huán)節(jié),并進行相應(yīng)的糾正,從而快速高效地應(yīng)用FISH技術(shù)。

1.3 結(jié)果判定標準 FISH：對30個細胞核予以計數(shù)，對Ratio(細胞核中紅信號總數(shù)與率信號總數(shù)的比值)予以統(tǒng)計，若Ratio在1.8以下則為陰性，說明該樣本中不存在HER-2基因擴增現(xiàn)象；若在2.2以上則為陽性，說明該樣本中存在HER-2基因擴增現(xiàn)象；若Rati在1.8～2.2，則可計數(shù)100個細胞核，或者再次開展FISH檢測對最終結(jié)果予以判斷。IHC：若癌細胞出現(xiàn)棕褐色則代表為陽性，結(jié)合染色強度對陽性程度予以劃分，主要有弱陽性(+)：10%以上的腫瘤細胞有不完整且微弱的細胞膜著色；中度陽性(++)：10%以上的腫瘤細胞有完整且弱或者中度的細胞膜著色；強陽性(+++)：10%以上的腫瘤細胞有完整且強的細胞膜著色。

1.4 統(tǒng)計學處理 應(yīng)用SPSS22.0對全部數(shù)據(jù)予以統(tǒng)計學處理，對比以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩種檢測方法的HER-2基因表達對比 FISH檢測后陽性17例(42.5%)，IHC陽性23例(57.5%)。兩者符合率如表1所示。

表1 FISH與IHC檢測HER-2基因的符合率對比

2.2 HER-2基因表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移陽性率對比，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 HER-2基因表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

3 討 論

HER-2基因存在于人體17q21，185×103跨膜糖蛋白為其編碼分子，屬于原癌基因。一般而言HER-2基因不會誘發(fā)腫瘤，其自身有諸多Tyr(酪氨酸殘基)磷酸化位點，在受體分子膜區(qū)亦存在PTK(酪氨酸蛋白激酶)活性[4-5]。當生長因子結(jié)合于HER-1、3或者4后，會引發(fā)蛋白膜外區(qū)構(gòu)象產(chǎn)生變化，結(jié)合于HER-2生成異二聚體，增加細胞膜內(nèi)的PTK活性，致使Tyr自身出現(xiàn)磷酸化。存在于HER-2蛋白膜內(nèi)段的磷酸化位點為識別PTK底物的位點，可對特定信號蛋白產(chǎn)生作用[6-7]。因此，Tyr是否出現(xiàn)磷酸化對于下游底物分子的解離與結(jié)合狀態(tài)有決定作用，可對信號轉(zhuǎn)導予以調(diào)節(jié)。一旦失控會持續(xù)開啟增殖信號途徑，進而誘發(fā)腫瘤。HER-2指標不僅密切關(guān)聯(lián)于腫瘤發(fā)展，同時還可作為預(yù)后指標[8-10]。

當前診斷HER-2基因主要有IHC與FISH法，前者操作簡易，重復(fù)性好，且成本低，敏感性較強，故而使用廣泛，但是會致使抗原決定簇丟失，且經(jīng)標準化固定后會改變抗原進而降低其敏感性，會導致檢測結(jié)果出現(xiàn)假陽性或者假陰性，對其精確性存在影響[11]。FISH主要是對DNA予以檢測，具有較高的可重復(fù)性、特異性以及穩(wěn)定性，且不會受到主觀因素的影響，客觀性較強，因此世界衛(wèi)生組織將其作為金標準[12]。

在本研究中，使用IHC與FISH法對乳腺原發(fā)癌與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌HER-2基因表達予以檢測后發(fā)現(xiàn)FISH陽性率為42.5%，IHC為57.5%；IHC陰性時與FISH符合率為88.2%，IHC(+)與FISH符合率為37.5%，IHC(++)與FISH符合率為83.3%，IHC(+++)與FISH符合率為100.0%。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性率為66.67%，未轉(zhuǎn)移陽性率為32.14%，對比差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。與宋寶等[13]的研究結(jié)果相近。

綜上所述，IHC對HER-2基因予以檢測時若結(jié)果為陰性或者強陽性則與FISH符合率較高，同時HER-2基因表達與腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間呈正相關(guān)關(guān)系[14-15]。

[1]董筱莉,俞楊,王自正,等.SSTR2與Her-2在乳腺癌組織中的表達及其臨床意義[J].放射免疫學雜志,2008,21(5):459-462.

[2]Stammberger HR."Uncapping the Egg",the endoscopic approach to frontal recess and sinuss.D-78713 schramberg[J].Germany,2010,17(6):7-15.

[3]Kew J,Rees GL,Close D.Multiplanar reconstructed computed tomography images improves depiction and understanding of the anatomy of the frontal sinus and recess[J].Am J Rhinol,2010,16(2):119-123.

[4]Shelbourne KD,Brueckmann RR.Rush-pin fiXation of supracondylar and intercondylar fractures of the femur[J].J Bone Joint Surg Am,2010,64(2):161-169.

[5]Stammberger HR,Kenney DW.Paranasal sinuses:anatomic terminology and nomenclature[J].Ann Oto Rhinol Laryngol,2011,167(Suppl):7-16.

[6]Wormald PJ.The agger nasi cell:the key to understanding the anatomy of the frontal recess[J].Otolaryngol Head Neck Surg,2011,129(16):497-507.

[7]張金子,張鳳艷,林貞花,等.乳腺癌中shh、ptch和smo蛋白過表達的臨床病理學意義[J].臨床與病理學實驗雜志,2010,26(5)：518-522.

[7]Zhang J,Zhang F,Lin Z,et al.Chinicopathological significance of shh,ptch and smo protein overexpression in berast cancers[J].Chinese Journal of Clinical and experimental pathology,2010,26(5)：518-522.

[8]Choi BI,Lee HJ,Han JK,et al.Detection of hypervascular nodular hepatocellur carcinomas:value of triphasic helical CT compared with iodizedoil CT[J].AJR,2010,157(2):219-224.

[9]Ten-Haaf A,Bektas N,von Serenyi S,et al.Expression of the glioma-associatied oncogene homolog(Gli)1 in human breast cancer is associated with unfavorable overall survival[J].BMC cancer,2009,9(9):298.

[10]ReglG,KasperM,SchnidarH,etal.

Activation of the BCL2 promoter in response to Hedgehog/GLI signal transduction is pre-dominantly mediated by GLI2[J].Cancer Res,2004,64(21):7724-7731.

[11]Khan MA,Combs CS,Brunt EM,et al.Positron emission tomography scanning in the evaluation of hbepatocellular carcinoma[J].Ann Nucl Med,2009,14(2):121-126.

[12]Tabit CE，Chung WB，Hamburg NM，et al.Endothelial dysfunctionin diabetes mellitus：molecular mechanisms and clinical implications[J].Rev Endocr Metab Disord,2010,11(1)：61-74.

[13]宋寶,鄭剛,謝麗,等.乳腺癌組織與轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)HER-2基因表達及檢測方法的比較[J].腫瘤防治研究,2011,38(1):70-72.

[14]Izzard AS，Rizzoni D，Agabiti-Rosei E，et al.Small artery structure and hypertension：adaptive changes and target organdamage[J].J Hypertens，2011，23(2)：247-250.

[15]Tabit CE，Chung WB，Hamburg NM，et al.Endothelial dysfunction in diabetes mellitus：molecular mechanisms and clinical implications[J].Rev Endocr Metab Disord，2010，1(1)：61-74.

Role of HER-2 gene expression in pathogensis of breast primary carcinoma and lymph node metastatic carcinoma

OUWu-ying1,ZHONGWei-da2

(1.DepartmentofClinicalLaboratory,HaikouMunicipalPeople′sHospital,Haikou,Hainan570208,China;2.DepartmentofClinicalLaboratory,HainanObstetricsandGynecologyHospital,Haikou,Hainan570105)

Objective To investigate the expression and significance of HER-2 gene expression in primary breast cancer and lymph node metastatic carcinoma by using fluorescence in situ hybridization technique.Methods 40 cases of primary breast cancer in the Haikou Municipal People′s Hospital from January 2013 to January 2014 were selected as the research subjects and their clinical data were retrospectively analyzed.The fluorescence in situ hybridization (FISH) technique and immunohistochemical (IHC) techniques were used to detect the expression of HER-2 gene in operation excision specimens of all patients.Results The positive rate of FISH was 42.5%,which of IHC was 57.5%;in negative IHC,the coincidence rate with FISH was 88.2%,the coincidence rate of IHC (+) with FISH was 37.5%,which of IHC (++) with FISH was 83.3% and which of IHC (+++) with FISH was 100%.The lymph node metastasis positive rate was 66.67%,non-lymph node metastasis positive rate was 32.14%,the difference was statistically significant(P<0.05).Conclusion Detecting HER-2 gene by IHC,if the result is negative or strongly positive,the coincidence rate with FISH is higher,at the same time the HER-2 gene expression is positivele correlated with axillary lymph node metastasis.

fluorescence in situ hybridization; primary breast cancer; lymph node metastasis; HER-2 gene

歐武英，女，碩士，主管檢驗技師，主要從事婦產(chǎn)科檢驗研究。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.17.039

A

1672-9455(2015)17-2582-02

2015-03-28

2015-04-25)