郝 坡，孟凡萍

(1.重慶三峽醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校醫(yī)學(xué)技術(shù)系,重慶 404120;2.重慶三峽中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，重慶 404000)

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·論 著·

脂聯(lián)素過表達(dá)對(duì)小鼠炎性因子的影響*

郝 坡1，孟凡萍2△

(1.重慶三峽醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校醫(yī)學(xué)技術(shù)系,重慶 404120;2.重慶三峽中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，重慶 404000)

目的 用攜帶小鼠脂聯(lián)素的基因過表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染小鼠，研究小鼠血漿脂聯(lián)素及炎性因子分泌的影響。方法 用本課題組前期構(gòu)建好的小鼠pcDNA3.1-Acrp30基因過表達(dá)質(zhì)粒經(jīng)股四頭肌注入C57BL/6J小鼠體內(nèi)，72 h后檢測(cè)小鼠血漿脂聯(lián)素表達(dá)情況，并測(cè)定其血漿白細(xì)胞介素-2、白細(xì)胞介素-3、白細(xì)胞介素-6、白細(xì)胞介素-8和腫瘤壞死因子-α的分泌水平。結(jié)果 pcDNA3.1-Acrp30過表達(dá)載體轉(zhuǎn)染小鼠后，其血漿脂聯(lián)素水平顯著增高，血漿炎性因子分泌則顯著下調(diào)。結(jié)論 構(gòu)建的小鼠Acrp30基因過表達(dá)載體能有效地增強(qiáng)脂聯(lián)素在小鼠體內(nèi)的表達(dá)，并能拮抗炎性因子的分泌。

脂聯(lián)素； 過表達(dá)； 炎性因子

脂肪組織作為一個(gè)新近發(fā)現(xiàn)的內(nèi)分泌器官，可分泌多種細(xì)胞因子。這些因子在胰島素抵抗及2型糖尿病(T2DM)發(fā)病機(jī)制中起著重要作用。脂聯(lián)素(Acrp30)也由脂肪組織分泌，在抗動(dòng)脈粥樣硬化調(diào)節(jié)糖脂代謝、改善胰島素抵抗等方面具有廣泛的生理功能，與糖尿病有密切的關(guān)系。本研究著重探討其抗炎作用，首先將構(gòu)建的小鼠Acrp30基因過表達(dá)質(zhì)粒導(dǎo)入C57BL/6J小鼠體內(nèi)，觀察后者血漿Acrp30的水平，并檢測(cè)其對(duì)小鼠炎性因子分泌的影響，旨在進(jìn)一步探討Acrp30在脂代謝紊亂發(fā)生和發(fā)展中的作用。

1 材料與方法

1.1 主要試劑 Acrp30基因過表達(dá)載體為本課題組前期構(gòu)建并保存；C57BL/6J小鼠購自重慶醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心；酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)小鼠Acrp30檢測(cè)試劑盒購自德國Phoenix公司；炎性因子檢測(cè)試劑購自美國BD公司。

1.2 動(dòng)物分組及處理 C57BL/6J小鼠20只，8周齡，隨機(jī)分為pcDNA3.1(+)空質(zhì)粒注射組(NC組,n=10)，pcDNA3.1-Acrp30重組真核表達(dá)質(zhì)粒注射組(PA組,n=10)，空載及表達(dá)質(zhì)粒(1 mg/kg)注射于小鼠股四頭肌。于注射前及注射后72 h采集空腹尾靜脈血，分離血漿。

1.3 小鼠血漿Acrp30測(cè)定 采用ELISA法測(cè)定小鼠血漿Acrp30水平，操作按照ELISA試劑盒說明書進(jìn)行。以系列水平Acrp30標(biāo)準(zhǔn)品繪制A450標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算Acrp30水平。

1.4 小鼠血漿炎性因子水平測(cè)定 采用流式細(xì)胞法測(cè)定小鼠血漿白細(xì)胞介素-2(IL-2)、白細(xì)胞介素-3(IL-3)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)、白細(xì)胞介素-8(IL-8)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)水平，操作按照BD公司炎性因子測(cè)定試劑盒說明書進(jìn)行。

2 結(jié) 果

2.1 小鼠血漿Acrp30分泌水平變化 小鼠血漿Acrp30 ELISA測(cè)定結(jié)果，見表1。質(zhì)粒注射后PA組血漿Acrp30水平較注射前均升高(P<0.05),而NC組在注射前后差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表1 小鼠血漿Acrp30分泌水平變化情況

續(xù)表1 小鼠血漿Acrp30分泌水平變化情況

2.2 小鼠血漿炎性因子分泌水平變化 小鼠血漿IL-2、IL-3、IL-6、IL-8及TNF-α流式細(xì)胞儀測(cè)定結(jié)果，見表2。質(zhì)粒注射后PA組血漿5項(xiàng)指標(biāo)水平較注射前均降低(P<0.05),而NC組在注射前后差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表2 小鼠血漿炎性因子分泌水平變化情況±s，n=20)

3 討 論

肥胖、糖尿病、代謝綜合征等代謝性疾病患者都伴隨炎性反應(yīng)，作為內(nèi)分泌器官，脂肪細(xì)胞可以分泌大量的細(xì)胞因子，其中包括Acrp30，這些細(xì)胞因子接受外界信號(hào)并對(duì)之產(chǎn)生反應(yīng)，從而調(diào)節(jié)食欲、胰島素敏感性、炎性反應(yīng)等過程。

Acrp30是一種與胰島素抵抗密切相關(guān)的細(xì)胞因子，主要由脂肪細(xì)胞分泌，與受體(AdipoR1、AdipoR2)結(jié)合后具有增強(qiáng)胰島素敏感性、抗高血糖、抗動(dòng)脈粥樣硬化等生物作用[1-3]。另有研究表明，低Acrp30血癥是動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，隨著動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展，血漿Acrp30水平呈進(jìn)行性下降趨勢(shì)[4]。對(duì)人體的研究發(fā)現(xiàn)，Acrp30水平能預(yù)示T2DM和冠心病的發(fā)展，并在臨床試驗(yàn)中表現(xiàn)出抗糖尿病、抗動(dòng)脈粥樣硬化和炎性反應(yīng)的潛力[4-5]。Acrp30通過激活蛋白激酶A(PKA)信號(hào)通路，使TNF-α介導(dǎo)的核因子-κB(NF-κB)的活化受到抑制，從而減輕內(nèi)皮細(xì)胞的炎性反應(yīng)[6]。對(duì)體質(zhì)量指數(shù)(BMI)正常和異常人群中IL-6、IL-10、TNF-α與Acrp30關(guān)系的研究表明，BMI高的人群Acrp30表達(dá)顯著降低，IL-6和TNF-α水平則升高，相反，IL-10水平則顯著下降[7]?？梢砸种迫说陌准?xì)胞產(chǎn)生IL-10，下調(diào)巨噬細(xì)胞中前炎性細(xì)胞因子干擾素-γ(IFN-γ)的產(chǎn)生[8]。Matsubara等[9]研究發(fā)現(xiàn)，低Acrp30血癥與超敏C反應(yīng)蛋白血癥存在負(fù)相關(guān)，提示Acrp30可能具有抗炎作用，以上研究提示Acrp30是炎性反應(yīng)中重要的調(diào)節(jié)因子。

為了進(jìn)一步評(píng)價(jià)Acrp30和炎性因子的相互作用，本研究利用構(gòu)建的Acrp30真核表達(dá)載體pcDNA3.1-Acrp30轉(zhuǎn)入C57BL/6J小鼠，成功上調(diào)了小鼠血漿Acrp30水平，并發(fā)現(xiàn)血漿炎性因子IL-2、IL-3、IL-6、IL-8和TNF-α水平卻顯著受抑。結(jié)果證明，Acrp30的過表達(dá)可拮抗小鼠分泌炎性因子，從而拮抗炎性反應(yīng)過程。

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Influence of adiponectin overexpression on mice inflammation factors*

HAOPo1，MENGFan-ping2△

(1.DepartmentofMedicalTechnology,ChongqingThreeGorgesMedicalCollege,Chongqing404120,China;2.DepartmentofClinicalLaboratory,ChongqingThreeGorgesHospital,Chongqing404000,China)

Objective To transfect into mice with plasmid carrying adiponectin gene overexpression for researching its influence on the plasma adiponectin expression and inflammation factors secretion.Methods The constructed mice pcDNA3.1-Acrp30 gene overexpression plasmid was transfected into the C57BL/6J mice body by quadriceps femoris and the plasma adiponectin expression after 72 h and the secretion levels of IL-2,IL-3,IL-6,IL-8 and TNF-α were detected.Results After transfecting the pcDNA3.1-Acrp30 oversxpression vector into mice,the plasma level of adiponectin was significantly increased and the levels of plasma inflammatory factor IL-2,IL-3,IL-6,IL-8 and TNF-α were significantly down-regulated.Conclusion The constructed Acrp30 gene overexpression vector can effectively increase the expression of adiponectin in mice and antagonize the secretion of inflammatory factors.

adiponectin; overexpression; inflammatory factor

重慶市衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)醫(yī)學(xué)科技計(jì)劃項(xiàng)目(2011-2-411),重慶市萬州區(qū)科技計(jì)劃項(xiàng)目(201203060)。

郝坡,男，碩士，講師/主管檢驗(yàn)師，主要從事醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)方面的教學(xué)與研究工作?！?/p>

，E-mail:menyfei2132@aliyun.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.17.012

A

1672-9455(2015)17-2513-02

2015-03-25

2015-04-15)