張俊霞，徐金升，白亞玲，崔立文，張慧然，張勝雷(河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院，石家莊050011)

腎癌組織EphA2、E-cadherin表達(dá)及其與腎癌臨床病理特征的關(guān)系

張俊霞，徐金升，白亞玲，崔立文，張慧然，張勝雷(河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院，石家莊050011)

摘要：目的探討Eph受體酪氨酸激酶A2(EphA2)及E-鈣黏蛋白(E-cadherin)在腎癌組織中的表達(dá)及其與腎癌臨床病理特征的關(guān)系。方法選擇52例腎癌患者的手術(shù)標(biāo)本，采用免疫組化SP法檢測腎癌組織EphA2及E-cadherin蛋白的表達(dá)，計(jì)算每張切片的陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)及HSCORE分值。分析EphA2表達(dá)、E-cadherin表達(dá)與患者臨床病理特征(包括年齡、性別、TNM分期、腫瘤直徑、病理類型)的關(guān)系，計(jì)算3年生存率，應(yīng)用COX比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析腎癌患者預(yù)后影響因素。結(jié)果腎癌組織中EphA2蛋白高表達(dá)率為71.2%，E-cadherin蛋白低表達(dá)率為76.9%。腫瘤直徑≥5 cm者的EphA2蛋白高表達(dá)率高于直徑<5 cm者(P<0.05)，腫瘤直徑≥5 cm者E-cadherin蛋白低表達(dá)率高于直徑<5 cm者(P<0.05)。EphA2蛋白高表達(dá)是腎癌患者預(yù)后的獨(dú)立影響因素(P<0.05)。結(jié)論腎癌組織中EphA2蛋白表達(dá)增加、E-cadherin蛋白表達(dá)降低，EphA2蛋白高表達(dá)是腎癌患者預(yù)后的獨(dú)立影響因素。

關(guān)鍵詞：腎癌；Eph受體酪氨酸激酶A2；E-鈣黏蛋白；預(yù)后

腎癌是泌尿系統(tǒng)常見的惡性腫瘤，容易發(fā)生復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移[1]。Eph家族是一類新發(fā)現(xiàn)的酪氨酸蛋白激酶受體，在腫瘤發(fā)生和發(fā)展中具有重要作用。Eph受體酪氨酸激酶A2(EphA2)是Eph家族中最早發(fā)現(xiàn)的受體，通過酪氨酸蛋白激酶途徑調(diào)控細(xì)胞的生長和分化，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。E-鈣黏蛋白(E-cadherin)作為另一類重要的細(xì)胞黏附分子，與EphA2協(xié)同定位于細(xì)胞間的接觸位點(diǎn)，共同調(diào)控細(xì)胞的生長及分化[2]。研究發(fā)現(xiàn)，卵巢癌[3]、結(jié)腸癌[4]、乳腺癌[5]等腫瘤組織中EphA2及E-cadherin蛋白的表達(dá)異常。目前，對腎癌患者EphA2及E-cadherin蛋白的表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系尚不清楚。為此我們觀察了52例腎癌患者癌組織中EphA2、E-cadherin蛋白表達(dá)，現(xiàn)分析結(jié)果，探討EphA2、E-cadherin蛋白表達(dá)與腎癌患者預(yù)后的關(guān)系。

1資料與方法

1.1臨床資料收集2005年8月～2010年8月河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院52例行腎癌根治術(shù)患者的癌組織標(biāo)本，均經(jīng)術(shù)后病理確診?；颊吣?9例、女23例，年齡30～78(56.58±11.54)歲。術(shù)后均未接受化療或放療。標(biāo)本于術(shù)中離體30 min內(nèi)取材，經(jīng)10%甲醛溶液固定，石蠟包埋、切片備用。本研究經(jīng)河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，患者均簽訂知情同意書。

1.2相關(guān)指標(biāo)觀察

1.2.1癌組織EphA2及E-cadherin蛋白表達(dá)采用免疫組化SP法檢測。石蠟切片經(jīng)抗原修復(fù)和血清封閉后，滴加1∶1 000抗EphA2抗體或1∶130抗E-cadherin抗體，4 ℃過夜，次日滴加1∶200生物素標(biāo)記的二抗及鏈霉菌抗生物素2過氧化物酶，DAB顯色。用已知EphA2蛋白陽性染色的乳腺癌石蠟切片為陽性對照，E-cadherin陽性染色的正常胃組織石蠟切片為陽性對照，以PBS代替一抗作為陰性對照。EphA2(clone C-20)兔抗人多克隆抗體購于Santa Cruz公司；E-cadherin(clone Hecd-1)鼠抗人單克隆抗體購于Zymed Laboratories公司；免疫組織化學(xué)二抗試劑盒(SP9000)購于北京中杉生物技術(shù)有限公司。結(jié)果判定：EphA2和E-cadherin免疫組化染色以細(xì)胞質(zhì)/細(xì)胞膜中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性。由兩位有經(jīng)驗(yàn)的病理醫(yī)師采用雙盲法獨(dú)立評估結(jié)果，每張切片至少觀察200個(gè)目的細(xì)胞的免疫反應(yīng)情況，于高倍鏡400倍視野下對目的細(xì)胞進(jìn)行染色強(qiáng)度評分，未著色為陰性計(jì)0分，淺黃色為弱陽性計(jì)1分，黃色為陽性計(jì)2分，黃褐色為強(qiáng)陽性計(jì)3分；然后計(jì)算每張切片的陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)，陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)=(≥1分的細(xì)胞數(shù)量/觀察細(xì)胞總數(shù))×100%。最后按文獻(xiàn)報(bào)道的方法[6,7]計(jì)算每張切片的HSCORE分值，HSCORE=(i+1)π，其中i和π分別代表染色強(qiáng)度評分及該陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)。以HSCORE分值>100%為高表達(dá)，≤100%為低表達(dá)。

1.2.2EphA2、E-cadherin蛋白表達(dá)與腎癌臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系分析EphA2、E-cadherin表達(dá)與患者臨床病理特征(包括年齡、性別、TNM分期、腫瘤直徑、病理類型)的關(guān)系。術(shù)后每3個(gè)月電話隨訪1次，共隨訪3年，計(jì)算3年生存率，分析影響預(yù)后的因素。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件，組間蛋白表達(dá)率的比較采用χ2檢驗(yàn)，采用Kaplan-Meier方法繪制生存曲線，組間比較采用Log-rank檢驗(yàn)，使用COX比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型行多因素分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1腎癌組織EphA2及E-cadherin蛋白表達(dá)免疫組化染色結(jié)果顯示，EphA2蛋白陽性表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞膜，E-cadherin蛋白陽性表達(dá)于細(xì)胞膜。52例腎癌組織標(biāo)本中EphA2蛋白高表達(dá)率、低表達(dá)率分別為71.2%(37/52)、28.8%(15/52)，E-cadherin蛋白高表達(dá)率、低表達(dá)率分別為23.1%(12/52)、76.9%(40/52)。

2.2EphA2及E-cadherin蛋白表達(dá)與腎癌臨床病理特征的關(guān)系腫瘤直徑≥5 cm者EphA2蛋白高表達(dá)率高于腫瘤直徑<5 cm者(P<0.05)，腫瘤直徑≥5 cm者E-cadherin蛋白低表達(dá)率高于腫瘤直徑<5 cm者(P<0.05)，其余臨床病理特征與EphA2蛋白的高表達(dá)和E-cadherin蛋白低表達(dá)無相關(guān)性。見表1。

表1　EphA2及E-cadherin蛋白表達(dá)與腎癌

2.3EphA2及E-cadherin蛋白表達(dá)與腎癌患者預(yù)后的關(guān)系EphA2蛋白高表達(dá)者3年生存率為29.7%，E-cadherin蛋白低表達(dá)者3年生存率為35.0%。將單因素分析中有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的因素腫瘤直徑以及E-cadherin蛋白表達(dá)、EphA2蛋白表達(dá)納入多因素COX比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型，結(jié)果示EphA2蛋白高表達(dá)是腎癌患者預(yù)后的獨(dú)立影響因素(RR=12.784，95%CI：1.701～96.071，P<0.05)。

3討論

EphA2作為EphA亞家族受體8個(gè)成員中的第2個(gè)，在人的多種細(xì)胞或組織中均有表達(dá)[8]。生理情況下，EphA2與其配體EphrinA1結(jié)合后，可削弱誘導(dǎo)細(xì)胞生長的生長因子活性，抑制細(xì)胞的生長，同時(shí)EphA2經(jīng)吞噬溶酶體途徑被快速降解，使其維持在正常生理水平[9]。在腫瘤組織中，由于腫瘤細(xì)胞極性消失、細(xì)胞之間的結(jié)合不緊密，致使EphA2不能與其配體EphrinA1有效結(jié)合，最終使其磷酸化受阻，導(dǎo)致大量EphA2蛋白在腫瘤組織中積聚。EphA2配體或抗體的刺激能快速而顯著地降低細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的黏附，長期刺激可抑制重要的細(xì)胞黏附蛋白水平，持續(xù)減弱細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的粘連[10]，最終導(dǎo)致腫瘤發(fā)生、發(fā)展。研究發(fā)現(xiàn)，在卵巢癌[3]、結(jié)腸癌[4]組織中EphA2蛋白表達(dá)增高，且增高程度與腫瘤進(jìn)展密切相關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)，腎癌組織中EphA2蛋白高表達(dá)率為71.2%，腫瘤直徑≥5 cm者EphA2蛋白高表達(dá)率高于腫瘤直徑<5 cm者，提示EphA2在腎癌組織中表達(dá)增高，EphA2高表達(dá)可能參與腎癌的發(fā)生發(fā)展過程。

E-cadherin具有維持組織結(jié)構(gòu)完整性和介導(dǎo)上皮細(xì)胞之間同質(zhì)性黏附的作用，在多種腫瘤組織中低表達(dá)甚至不表達(dá)。E-cadherin表達(dá)降低或缺失可導(dǎo)致細(xì)胞間接觸抑制減弱以及細(xì)胞生長失控，導(dǎo)致EphA2與其配體不能有效結(jié)合，EphA2降解受阻，進(jìn)而又進(jìn)一步影響E-cadherin的表達(dá)，形成惡性循環(huán)，二者相互影響，協(xié)同促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[11]。研究發(fā)現(xiàn)，上皮—間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)在腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用[12,13]，在分子水平表現(xiàn)為E-cadherin蛋白表達(dá)降低。本研究發(fā)現(xiàn)，腎癌組織中E-cadherin蛋白低表達(dá)率為76.9%，腫瘤直徑≥5 cm者E-cadherin蛋白低表達(dá)率高于腫瘤直徑<5 cm者，提示E-cadherin蛋白在腎癌組織中表達(dá)降低，可能參與了腎癌的發(fā)生、發(fā)展過程[14]。

研究發(fā)現(xiàn)，EphA2蛋白高表達(dá)不僅是腎癌發(fā)生的危險(xiǎn)因素，還是反映腎癌患者預(yù)后的指標(biāo)。本研究發(fā)現(xiàn)，EphA2蛋白高表達(dá)是腎癌患者預(yù)后的獨(dú)立影響因素，考慮EphA2高表達(dá)可能通過與局部微環(huán)境相互作用而調(diào)節(jié)細(xì)胞行為，導(dǎo)致腫瘤發(fā)生、預(yù)后較差。本研究結(jié)果顯示，TNM分期和腫瘤組織學(xué)類型不是腎癌患者預(yù)后的影響因素，可能與本研究樣本量小有關(guān)，有待進(jìn)一步研究證實(shí)。

綜上所述，EphA2蛋白高表達(dá)、E-cadherin蛋白低表達(dá)是腎癌患者預(yù)后的獨(dú)立影響因素；EphA2蛋白可能在腎癌的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，檢測EphA2蛋白表達(dá)情況有助于對腎癌患者預(yù)后的判斷。

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Expression of EphA2, E-cadherin in renal cell carcinoma and its

relationship with clinical pathological features of patients

ZHANGJun-xia,XUJin-sheng,BAIYa-ling,CuiLi-wen,ZHANGHui-ran,ZHANGSheng-lei

(TheFourthHospitalofHeBeiMedicalUniversity,Shijiazhuang050011,China)

Abstract:Objective To investigate the expression of Eph receptor tyrosine kinase-A2 (EphA2) and E-cadherin in renal cell carcinoma (RCC) and its relationship with clinical pathological features of patients. MethodsThe expression of EphA2 and E-cadherin was detected by immunohistochemical SP method in the tumor tissues from 52 RCC patients. The HSCORE score and percentage of positively stained cells were calculated. The relationships between the expression of EphA2 and E-cadherin and clinical characteristics including age, gender, TNM classification, diameter of the tumor and pathologic types were analyzed. The three-year survival rate was calculated with the Kaplan-Meier method and compared by the Log-rank test. The main risk factors were screened by Cox hazard regression model. ResultsThe percentage of patients with high expression of EphA2 was 71.2%, and the percentage of patients with low expression of E-cadherin was 76.9%. The high expression rate of EphA2 in patients with a tumor diameter ≥5 cm was higher than those with a tumor diameter <5 cm (P<0.05), and the low expression rate of E-cadherin in patients with a tumor diameter ≥5 cm was higher than those with a tumor diameter <5 cm (P<0.05). The high expression of EphA2 was a risk factor for the outcome of RCC patients (P<0.05). ConclusionThe expression of EphA2 was increased, and the expression of E-cadherin was decreased in the RCC tissue. The high expression of EphA2 was the an independent risk factor for the prognosis of RCC patients.

Key words:kidney neoplasms, kidney carcinoma; Eph receptor tyrosine kinase-A2; E-cadherin; prognosis

(收稿日期：2014-09-08)

通信作者簡介：徐金升(1964-)，男，主任醫(yī)師，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)槟I癌的發(fā)病機(jī)制研究。E-mail: xjs5766@126.com

作者簡介：第一張俊霞(1971-)，女，副主任醫(yī)師，研究方向?yàn)槟I癌的發(fā)病機(jī)制研究。E-mail: lei06352511@126.com

基金項(xiàng)目：河北省科技計(jì)劃資助項(xiàng)目(122777219)。

中圖分類號：R737.11

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號：1002-266X(2015)10-0004-03

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.10.002