劉慶華 鄭秦文 王建烽

（福建農(nóng)林大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院,福建福州 350002）

光澤黑兔生長(zhǎng)性能與微衛(wèi)星標(biāo)記關(guān)系的研究

劉慶華 鄭秦文 王建烽

（福建農(nóng)林大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院,福建福州 350002）

選用5對(duì)微衛(wèi)星標(biāo)記引物，分別對(duì)光澤黑兔6個(gè)品系的基因組DNA進(jìn)行檢測(cè)。利用最小二乘分析方法標(biāo)記基因型與體重、體尺這兩個(gè)生長(zhǎng)性能間的關(guān)系。結(jié)果表明：座位So133 213bp等位基因?qū)Τ赡晖皿w重有負(fù)面效應(yīng)；微衛(wèi)星座位So103中240bp等位基因?qū)Τ赡晖皿w重有較強(qiáng)的負(fù)面效應(yīng)；座位So144 217bp、座位So133 213bp，以及座位So103 236bp等3個(gè)等位基因?qū)w長(zhǎng)性狀有正面效應(yīng)；座位So133 213bp、座位So103 244bp等2個(gè)位基因?qū)π貒誀钣姓嫘?yīng)；座位So144 203bp等位基因?qū)π貒誀钣胸?fù)面效應(yīng)。

光澤黑兔 微衛(wèi)星DNA 生長(zhǎng)性能

光澤黑兔屬于閩西南黑兔的一個(gè)地方類(lèi)群[1]。本研究以微衛(wèi)星DNA作為遺傳標(biāo)記，從分子水平上研究光澤黑兔的生長(zhǎng)性能與遺傳標(biāo)記之間的關(guān)系，旨在為開(kāi)展遺傳標(biāo)記輔助選擇、數(shù)量性狀基因定位、光澤黑兔進(jìn)一步選育等工作提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)兔的選擇

實(shí)地隨機(jī)采集光澤黑兔6個(gè)品系共計(jì)195只黑兔耳組織樣本。采集之前，逐只測(cè)定成年兔的體重、體長(zhǎng)和胸圍。

1.2 引物的合成

引物由廈門(mén)泰京生物技術(shù)有限公司合成。

表1 5對(duì)微衛(wèi)星引物序列

1.3 標(biāo)記基因型檢測(cè)

基因組DNA提取采用常規(guī)的酚、氯仿抽提方法[2]。PCR反應(yīng)體系為25μL：2.5μL 10×bufer、2.5μL Mg2＋、0.5μL dNTPs、引物各0.5μL、0.5μL TaqDNA聚合酶、2μL DNA模板（50mg.μL-1）、16μL ddH2O。PCR反應(yīng)條件為：94℃預(yù)變性4 min→94℃變性30 sec→55℃或其他溫度退火30 sec→72℃延伸35 sec，33 cycles→72℃再延伸10 min→4℃保存。

采用12%的非變性膠聚丙烯酰胺凝膠電泳分離微衛(wèi)星等位基因，銀染后，利用POPGENE計(jì)算各微衛(wèi)星座位的等位基因大小。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析方法

根據(jù)每一個(gè)體的標(biāo)記基因型及表型資料，采用最小二乘法進(jìn)行分子標(biāo)記與各性狀相關(guān)分析，確定與性狀顯著性相關(guān)的標(biāo)記，再對(duì)不同基因型間的體重、體尺性能進(jìn)行多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 微衛(wèi)星座位與體重體尺性狀的方差分析

根據(jù)5個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)的電泳結(jié)果結(jié)合個(gè)體的體重體尺記錄，在實(shí)際的統(tǒng)計(jì)分析中，由于一些位點(diǎn)中某些基因型的出現(xiàn)頻率太低，缺少分析價(jià)值，因此按每種基因型至少出現(xiàn)3次觀察值進(jìn)行多重比較[3]。采用SAS（9.1）軟件包的GLM程序以基因型為固定效應(yīng)，對(duì)體重體尺性狀數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析和顯著性檢驗(yàn)，以判定微衛(wèi)星DNA標(biāo)記與性狀相關(guān)性，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 光澤黑兔5種微衛(wèi)星座位GLM方差分析結(jié)果（F值）

2.2 與體重性狀顯著相關(guān)的標(biāo)記座位的多重比較

表3 黑兔微衛(wèi)星座位SoI33不同基因型的體重比較

微衛(wèi)星座位So133基因型FF成年兔體重最小二乘均值最高，其次是基因型CC型，F(xiàn)F、CC基因型個(gè)體的成年兔體重最小二乘均值極顯著大于EE基因型個(gè)體（P＜0.01）。

表4 光澤黑兔微衛(wèi)星座位SoI03不同基因型的體重比較

微衛(wèi)星座位Sol03中CD和DD基因型個(gè)體的成年兔體重最小二乘均值顯著高于其他基因型個(gè)體（P＜0.05），CC基因型個(gè)體的成年兔體重最小二乘均值最小。

2.3 與體尺性狀顯著相關(guān)的標(biāo)記座位的多重比較

表5 光澤黑兔微衛(wèi)星座位SoI44不同基因型的體尺比較

微衛(wèi)星座位Sol44中FF基因型顯著高于其他基因型個(gè)體；在胸圍性狀中，BB基因型個(gè)體的最小二乘均值顯著低于其他基因型個(gè)體，BG基因型個(gè)體的最小二乘均值最高。大于CE、DF、EE、EF基因型個(gè)體（P＜0.05），極顯著大于DE基因型個(gè)體（P＜0.01）；DD、CC、BE與其他基因型差異都不顯著。其對(duì)應(yīng)的胸圍最小二乘均值顯著大于AA、AE、BB、BF基因型個(gè)體（P＜0.05），極顯著大于BE、CC、CE基因型個(gè)體（P＜0.01）。

表8 光澤黑兔微衛(wèi)星座位SoI03不同基因型的體尺比較

微衛(wèi)星座位Sol03中AA基因型個(gè)體的體長(zhǎng)最小二乘均值顯著大于其他基因型個(gè)體（P＜0.05）；極顯著大于AC（P＜0.01）。EE基因型個(gè)體的胸圍最小二乘均值顯著大于AC、BB、CC、CD基因型個(gè)體（P＜0.05），與AA、DD基因型個(gè)體差異不顯著（P＞0.05）。

3 小結(jié)與討論

表6 光澤黑兔微衛(wèi)星座位SoI33不同基因型的體尺比較

微衛(wèi)星座位Sol33中EE基因型個(gè)體的體長(zhǎng)最小二乘均值極顯著大于BB、CC、FF基因型個(gè)體（P＜0.01），顯著大于AA、DD基因型個(gè)體（P＜0.05），AA、DD、FF基因型之間差異不顯著。EE基因型胸圍最小二乘均值極顯著大于CC基因型個(gè)體（P＜0.01），顯著大于AA、BB、DD、FF基因型個(gè)體（P＜0.05）。

表7 光澤黑兔微衛(wèi)星座位SoI30不同基因型的體尺比較

微衛(wèi)星座位Sol30中BF基因型個(gè)體的體長(zhǎng)最小二乘均值顯著

本試驗(yàn)中，共檢測(cè)4個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記對(duì)所研究的兩個(gè)生長(zhǎng)性能存在不同程度的相關(guān)。座位Sol33 213bp等位基因?qū)Τ赡晖皿w重有負(fù)面效應(yīng)；微衛(wèi)星座位Sol03中240bp等位基因?qū)Τ赡晖皿w重有較強(qiáng)的負(fù)面效應(yīng)；座位Sol44 217bp、座位Sol33 213bp，以及座位Sol03 236bp等3個(gè)等位基因?qū)w長(zhǎng)性狀有正面效應(yīng)；座位Sol33 213bp、座位Sol03 244bp等2個(gè)位基因?qū)π貒誀钣姓嫘?yīng)；座位Sol44 203bp等位基因?qū)π貒誀钣胸?fù)面效應(yīng)。

高度相關(guān)的性狀有著相同的分子基礎(chǔ)（一因多效）或者是QTL連鎖，部分性狀可能由一個(gè)或一個(gè)以上QTL控制（多因一效），所以相關(guān)程度很高的性狀存在高的遺傳一致性[4、5]。本試驗(yàn)在一定程度上支持這一觀點(diǎn)。如微衛(wèi)星位點(diǎn)So103和so144對(duì)生長(zhǎng)性能都有極顯著相關(guān)。

由于本研究的樣本數(shù)量較少，選擇的微衛(wèi)星位點(diǎn)與生長(zhǎng)性能的相關(guān)性可能存在一定偏差。對(duì)于分子標(biāo)記與性狀相關(guān)的研究結(jié)果還有待于今后進(jìn)一步的深入研究證實(shí)。

[1] 謝喜平，孫世坤，陳巖鋒，等.閩西南黑兔選育研究 [J].家畜生態(tài)學(xué)報(bào)，2013，34（10）：26-28.

[2] J 薩姆布魯克，D.W.拉塞爾.分子克隆試驗(yàn)指南（第三版）[M].北京：科學(xué)出版社，2002：467-470.

[3] 金海國(guó).微衛(wèi)星DNA與延邊黃牛肉用生長(zhǎng)性狀關(guān)系[J].中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2004，24（3）：285-288.

[4] 謝喜平，陳冬金，陳巖鋒，等.閩西南黑兔遺傳多樣性的微衛(wèi)星標(biāo)記分析[J].家畜生態(tài)學(xué)報(bào)，2012，33（1）：37-41.

[5] 吳信生，劉中慧，趙輝玲，等.皖系長(zhǎng)毛兔微衛(wèi)星標(biāo)記多態(tài)性及其與產(chǎn)毛量相關(guān)的研究[J].草食家畜，2006，（4）：17-21.

福建省教育廳科技項(xiàng)目資助（項(xiàng)目編號(hào)JA13097）