張艷紅　段春芳　謝　憑

1　廣東省廣州市番禺區(qū)南村醫(yī)院病理科　511300；　2　廣州番禺區(qū)新造醫(yī)院

論著

肥大細胞亞型與結直腸癌患者預后關系的研究*

張艷紅1段春芳2謝憑1

1廣東省廣州市番禺區(qū)南村醫(yī)院病理科511300；2廣州番禺區(qū)新造醫(yī)院

摘要目的：探討肥大細胞(MC)亞型與結直腸癌患者預后的關系。方法：收集40例有完整臨床、病理資料的結直腸癌患者的標本和40例正常結直腸黏膜標本，進行特殊染色和免疫組化染色。結果：MC在正常結腸黏膜組織數(shù)量4~22，平均6.7/HP。MC在腫瘤組織中數(shù)量為26~138，平均73/HP，差異有統(tǒng)計學意義。T型MC計數(shù)結果為0~48，平均2.2/HP。C型MC計數(shù)結果為16~83，平均51/HP。TC型MC計數(shù)結果為0~16，平均1.8/HP。C型與TC型MC與結直腸癌患者的腫瘤分化程度、臨床分期和預后均無關。T型MC與結直腸癌患者的腫瘤分化程度、臨床分期和預后有關，差異有統(tǒng)計學意義。結論：MC總數(shù)與臨床預后呈負相關，T型MC與腫瘤分化程度、臨床分期和預后呈負相關。

關鍵詞肥大細胞腸癌免疫組化

The Relationship between Mast Cell Subtype and Prognosis in Patients with Colorectal Cancer

ZHANG Yanhong#,DUAN Chunfang,XIE Ping.#DepartmentofPathologyofNancunHospitalofPanyuDistrictofGuangzhouCity，GuangdongProvince511300

ABSTRACT Objective:To investigate the relationship between the subtypes of mast cells and the prognosis of colorectal cancer patients.Methods:40 cases of colorectal cancer with complete clinical and pathological data, and 40 normal colorectal mucosa specimens, were collected for special staining and immunohistochemical staining.Results:The number of MC in the normal colon mucosa was 4~22, and the average was 6.7/HP.The number of MC in tumor tissues from 26~138,and the average of 73/HP.T-type MC count was 0~48, the average was 2.2/HP.The C-type MC C count was 16~83,the average was 51/HP.TC-type MC count was 0~16, the average was 0.8/HP.The degree of tumor differentiation,clinical staging and prognosis of C-type MC and TC-type MC were not related to the tumor differentiation and prognosis of colorectal cancer patients. The differentiation degree and clinical stage of T-type MC were related to the tumor differentiation and prognosis of the patients with colorectal cancer, and the differences were statistically significant.Conclusion:The total MC number is negatively correlated with the clinical prognosis. T-type MC is negatively related to tumor differentiation, clinical staging and prognosis but nothing with C-type MC and TC-type MC.

KEY WORDS Mast Cells,Colon cancer,Immunohistochemistry

炎癥細胞對腫瘤的作用是近年來研究的熱點問題[1]，肥大細胞(Mast cell,MC)是重要的效應和免疫細胞，分布于整個黏膜和結締組織，廣泛存在于機體與外界相通的部位，如皮膚、消化道、呼吸道等部位。MC根據(jù)分泌顆粒的不同及蛋白酶的差異，可分為T型MC、C型MC和TC型MC三個亞型，T型MC只含有類胰蛋白酶(tryptase)，C型MC只含有類糜蛋白酶(chymase)，少量TC型MC不僅含有類胰蛋白酶，還含有類糜蛋白酶[2]。有研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤組織中MC數(shù)量增加，但MC對腫瘤的作用還存在矛盾的觀點，不同亞型對腫瘤的影響更是少有研究。本研究通過定量分析結直腸癌中MC的亞型，探討結直腸癌中MC亞型的變化及與臨床預后的關系。

1資料與方法

1.1一般資料收集2000-2005年在廣州市番禺區(qū)人民醫(yī)院及番禺區(qū)南村醫(yī)院住院治療的有完整臨床與病理資料的結直腸癌病例共40例，年齡32~78歲，平均年齡52.1歲。其中男27例，女13例，術前均未行放、化療，術后隨訪5年以上或至死亡。選取同期正常結直腸黏膜組織40例作對照組。

1.2實驗方法組織標本均經4%中性甲醛固定、石蠟包埋，連續(xù)切片，厚4μm，行常規(guī)HE染色、特殊染色和免疫組織化學雙染。HE切片觀察腫瘤細胞的分化程度、浸潤深度、淋巴結轉移等。特殊染色的項目為甲苯胺藍和阿爾新藍-藏紅O染色，甲苯胺藍將MC染成紫紅色，阿爾新藍-藏紅O將MC染成紅、藍、紅藍相間3種不同的顏色。每張切片上觀察陽性細胞數(shù)量最多的5個高倍視野，統(tǒng)計二種染色方法的陽性細胞量，計算平均值。腫瘤組織行免疫組化雙染，免疫組化雙染抗體為AA5和CC1兩種單克隆抗體，T型MC呈紅色，C型MC呈褐色，TC型MC同時著色。每張切片上觀察陽性細胞數(shù)量最多的5個高倍視野，統(tǒng)計3種亞型MC的數(shù)量。特殊染色試劑購至珠海貝索公司，免疫組化試劑購至北京中衫公司。實驗均按說明書操作。

1.3隨訪對出院患者通過門診、電話等方式進行隨訪，術后第1年3個月1次，第2年半年1次，第3~5年1年1次。患者腫瘤局部復發(fā)和遠處轉移均通過CT檢查或腸鏡活檢病理檢查確定。

1.4統(tǒng)計學分析應用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料采用t檢驗，計數(shù)資料采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學差異。

2結果

2.1結直腸癌患者的臨床病理分期40例結直腸癌患者中病理診斷為高分化腺癌12例，中低分化腺癌28例；有淋巴結轉移24例，無淋巴結轉移16例；腫瘤臨床分期Ⅰ~Ⅱ期18例，Ⅲ~Ⅳ期22例。

2.2組織中MC總數(shù)MC在正常結腸黏膜組織中主要分布在黏膜下層和肌層，數(shù)量4~22，平均6.7/HP。MC主要分布在腫瘤與正常組織交界處，腫瘤內MC少見。MC數(shù)量26~138，平均73/HP。以73/HP為標準，將40例結直腸癌患者分為高計數(shù)組和低計數(shù)組。

2.3腫瘤組織中MC亞型計數(shù)T型MC計數(shù)結果為0~48，平均2.2/HP。C型MC計數(shù)結果為16~83，平均51/HP。TC型MC計數(shù)結果為0~16，平均1.8/HP。三種MC亞型均按均數(shù)分為高計數(shù)組和低計數(shù)組。

2.4隨訪結果40例患者隨訪時間為50~112個月，平均隨訪74.3個月。其中6例患者死亡，平均死亡時間為5.2年，11例患者復發(fā)，平均復發(fā)時間為4.8年。見表1。

表1　MC亞型與臨床病理參數(shù)的關系

3討論

MC在結直腸癌預后的作用一直存在爭論。Yodavudh等認為結直腸癌組織內MC的浸潤數(shù)量越多，患者的生存時間越短，預后越差[3]。但相反的，Nielsen等的研究結果顯示，MC與結直腸癌患者的預后呈正相關[4]。MC不同亞型與結直腸癌的關系少有報告。

本研究發(fā)現(xiàn)，在分化程度差、臨床分期高的腫瘤中，MC的量要多于分化程度好、臨床分期低的腫瘤，差異有統(tǒng)計學意義，說明MC數(shù)量增多與臨床預后差相關。有研究報告了MC可分泌多種細胞因子，主要相關的細胞因子有IL-8、MCP-1、MIP-1a等[5]。這些細胞因子與相應受體結合后，促進癌基質炎癥細胞浸潤，腫瘤細胞生成，癌基質蛋白降解及促進腫瘤細胞增殖、分泌血管生成因子等，使腫瘤表現(xiàn)更有侵襲性和易轉移。C型和TC型MC在不同分化程度的腫瘤均有增加，差異無統(tǒng)計學意義，提示C型和TC型MC可能在腫瘤早期的惡變過程中起作用。有研究表明，C型MC分泌的類糜蛋白酶可刺激腫瘤細胞外基質的降解和促進腫瘤周圍新生血管形成[6]。而TC型MC雖可分泌二種蛋白酶，但以分泌類糜蛋白酶為主，所以其生物學意義與C型MC類似。本研究也提示，C型MC可能參與了腫瘤早期惡變的過程并持續(xù)存在于腫瘤細胞周圍，促進血管生成和細胞外基質降解。

T型MC數(shù)量變化與腫瘤的分化程度、臨床分期及淋巴結轉移均有統(tǒng)計學意義。T型MC分泌的類胰蛋白酶是一種中性絲氨酸蛋白酶，人體MC中主要以β-類胰蛋白酶為主。已發(fā)現(xiàn)在人結腸腺癌侵襲過程中有大量的活性肥大細胞脫顆粒。Yoshii[7]研究類胰蛋白酶通過激活DLD-1結腸癌細胞系的PAR-2所引發(fā)的效應時,發(fā)現(xiàn)類胰蛋白酶和PAR-2-AP引起的DLD-1增殖反應與MAP和MEK激酶的磷酸化有關，從而促進了細胞的增殖。研究還發(fā)現(xiàn)，與C型MC分泌的類糜蛋白酶一樣，類胰蛋白酶也能促進腫瘤細胞周圍血管的增生和細胞外基質的降解。

綜上所述，本次研究提示，MC的數(shù)量與腫瘤患者的預后呈負相關，三種類型的MC均可促進腫瘤細胞外基質的降解和血管新生，T型MC還可促進細胞增殖與惡變。

參考文獻

[1]Coussens LM,Werb Z. Inflammatory cells and cancer:think different〔J〕.J Exp Med,2001,193(6):F23-F26.

[2]Galli SJ. New insights into the riddle of the mast cells:microentironmental regulation of mast cell development and phnotypic heterogeneity〔J〕.Lab Invest,1990,62(1):5-33.

[3]Yodavudh S,Tangjitgamol S,Puangsa S.Prognostic significance of microvessel density and mast cell density for the survival of Thai patients with primary colorectal cancer〔J〕.J Med Assoe Thai,2008,91(5):723-732.

[4]Nielsen HJ，Hansen L，Chrislensen IJ,etal．Independent prognostic value of eosinophil and masl cell infiltration in colorectal cancer tissue〔J〕. Pal1ho,1999,189(4):487-495．

[5]李穎,王向東,王鴻,等.CC類趨化因子在慢性鼻竇炎的表達〔J〕.首都醫(yī)科大學學報,2013,34(6):795-798.

[6]Gulubova M,Vlaykova T.Prognostic significance of mast cell number and microvascular density for the survival of patients with primary colorectal cancer〔J〕.Gsatroenterol Hepatol,2009,24(7):1265-1275.

[7]Yoshii M,Jikuhara A,Mori S,etal.Mast cell tryptase stimulates DLD-1 carcinoma through prostaglandin- and MAP kinase-dependent manners〔J〕.J Pharmacol Sci,2005,98(4):450-458.

(編輯雅文)

收稿日期2015-07-27

*基金項目：廣州市番禺區(qū)科技與信息化局科技攻關項目(項目編號2014-z03-27)

中圖分類號：R735.3

文獻標識碼：A

文章編號：1001-7585(2015)24-3314-03