蘇湘川，任小麗，石青青

（浙江省臺(tái)州市立醫(yī)院，臺(tái)州 318000）

特應(yīng)性皮炎（Atopic dermatitis，AD）是一種與遺傳過(guò)敏素質(zhì)有關(guān)的慢性炎癥性皮膚病，多自嬰兒期起病,病情遷延反復(fù),部分可持續(xù)至成年期。在兒童期，特應(yīng)性皮炎是一種常見疾病，發(fā)病率較高，并呈現(xiàn)逐年上升的趨勢(shì)。在我國(guó)兒童皮膚病中，AD 占皮膚科兒童就診人數(shù)的30%左右[1]。本病的病因不明，發(fā)病機(jī)制涉及炎癥損傷、細(xì)胞誘導(dǎo)分化、細(xì)胞凋亡及免疫系統(tǒng)的調(diào)控等多方面[2]。Th17 細(xì)胞是獨(dú)立于Th1/Th2 型細(xì)胞的一種新型T 細(xì)胞，能分泌炎癥介質(zhì)白細(xì)胞介素-6（IL-6）、白細(xì)胞介素-17（IL-17）等多種細(xì)胞因子誘導(dǎo)免疫炎癥反應(yīng)[3]。本研究通過(guò)檢測(cè)不同嚴(yán)重程度AD 患者外周血Th17 細(xì)胞比例及Th17 細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)水平，旨探討Th17 細(xì)胞及其相關(guān)細(xì)胞因子在不同嚴(yán)重程度AD 患者發(fā)病中的意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2011 年1 月—2013 年12 月在我科就診的輕度AD 患者34 例，中度AD 患者36 例，重度AD 患者34 例，診斷均符合Williams 診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]。病情嚴(yán)重程度按歐洲特應(yīng)性皮炎評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)（SCORAD）進(jìn)行評(píng)分[5]，評(píng)分越高，病情越重，按分值從低到高分為3 組，＜25 分為輕度組，25～50 分為中度組，＞50 分為重度組。其中輕度AD 患者男22 例，女12 例，平均年齡（10.27±2.41）歲；中度AD 患者男23 例，女13 例，平均年齡（11.27±2.72）歲；重度AD患者男21 例，女13 例，平均年齡（11.56±2.05）歲。所有患者未合并系統(tǒng)感染性疾病、免疫系統(tǒng)疾病及肝、腎、造血系統(tǒng)疾病和內(nèi)分泌系統(tǒng)等嚴(yán)重原發(fā)性疾病和精神病患者。并于入組前1 周停用抗組胺藥及外用糖皮質(zhì)激素，半年內(nèi)未系統(tǒng)使用糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑及免疫調(diào)節(jié)劑。健康對(duì)照組為隨機(jī)抽取本院同期35 例健康體檢者，其中男22 例，女13 例，平均年齡（10.82±1.98）歲。各組間性別、年齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2 試劑和儀器 PE-抗IL-17 流式抗體，PE-IL-6 流式抗體，PE-IgG1 同型對(duì)照抗體均為美國(guó)eBioscience 公司產(chǎn)品；佛波酯、離子霉素、植物血凝素、固定劑和破膜劑為美國(guó)Sigma 公司；美能星、流式細(xì)胞儀為BD公司；RPMI1640 培養(yǎng)基為Gibco 產(chǎn)品。

1.3 外周血Th17 細(xì)胞的檢測(cè)[6]取100 μL 患者全血，用100 μL RPMI1640 培養(yǎng)基等量稀釋，加入1 μL/mL 佛波酯工作液4 μL，37 ℃，5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)4～6 h。加入10 μL PECy5 抗CD3 和10 μL FITC抗CD8 單抗，室溫、避光、溫育15 min。分為2 管，每管加入上述已染色的全血100 μL 編號(hào)為a 和b，分別加入固定液100 μL，室溫，避光溫育15 min，再各自分別加入PBS 3 mL，1 200 r/min 離心5 min，除去上清液。各自再加入破膜劑100 μL，同時(shí)在a 管中加入10 μL PE-IgG1 同型對(duì)照抗體，b 管中加入10 μL PE-IgG1 抗IL-17 流式抗體，室溫，避光溫育15 min，每管中加入PBS 3 mL，1 200 r/min 離心5 min，除去上清液，加入0.5 mL PBS 重懸細(xì)胞，上機(jī)檢測(cè)。

1.4 血清中IL-17、IL-6 的檢測(cè) 采清晨空腹靜脈血5 mL，離心、取血清，采用ELISA 法檢測(cè)患者血清及健康組血清中IL-17、IL-6，操作嚴(yán)格按試劑說(shuō)明書進(jìn)行。ELISA 試劑盒為晶美生物工程有限公司提供。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS16.0 進(jìn)行分析。對(duì)各組數(shù)據(jù)進(jìn)行F 檢驗(yàn)，P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

不同嚴(yán)重程度特應(yīng)性皮炎患者外周血Th17 細(xì)胞、IL-17、IL-6 水平與健康組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05），見表1。

表1 各組Th17 細(xì)胞比例，IL-17、IL-6 濃度比較 例

3 討論

AD 是一種與遺傳過(guò)敏素質(zhì)有關(guān)的慢性炎癥性皮膚病，其特征為濕疹樣皮損、瘙癢劇烈、皮膚干燥，常伴有血清中IgE 水平增高和外周血嗜酸細(xì)胞粒細(xì)胞增多的異常免疫現(xiàn)象[7]。Th17 細(xì)胞是一種新發(fā)現(xiàn)的CD4+T 細(xì)胞亞群，可通過(guò)分泌IL-17、IL-6等細(xì)胞因子誘導(dǎo)產(chǎn)生多種前炎癥細(xì)胞因子和趨化因子，在自身免疫性炎癥中發(fā)揮著重要作用[3]。IL-6是一種多功能細(xì)胞因子，參與機(jī)體的炎性反應(yīng)過(guò)程和能量代謝調(diào)節(jié)，是炎性反應(yīng)的細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)中一個(gè)中樞性調(diào)節(jié)因子，又稱前炎性反應(yīng)細(xì)胞因子，參與機(jī)體的各種病理生理過(guò)程。鄭益志等[8]研究發(fā)現(xiàn)AD 患者血清中IL-6 明顯高于正常健康對(duì)照組，與本研究結(jié)果相似。Th17 細(xì)胞是IL-17 的主要來(lái)源細(xì)胞，反之IL-17 是Th17 細(xì)胞的主要效應(yīng)分子，兩者變化趨勢(shì)的一致性共同反映了Th17 細(xì)胞在AD 發(fā)病中的作用。AD 的確切發(fā)病機(jī)制尚未闡明，因此，從根本上控制本病仍難以實(shí)現(xiàn)。進(jìn)一步研究其發(fā)病機(jī)制，對(duì)于改善當(dāng)前的治療手段、開發(fā)新的治療方法非常必要[9-10]。目前國(guó)際上已開始研發(fā)多種生物制劑,例如作用于IL-17 及其受體的靶向藥物,如IL-17R-Ig 融合蛋白、IL-17 抗體等。我們通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)不同嚴(yán)重程度AD 患者外周血Th17 細(xì)胞、IL-17、IL-6 水平與正常健康體檢者比較明顯升高，且隨著病情嚴(yán)重程度增加而逐漸增高，說(shuō)明Th17 細(xì)胞及其分泌的細(xì)胞因子對(duì)AD 的發(fā)病及病情發(fā)展存在一定的關(guān)系, 可嘗試用此類生物制劑改善AD 的炎癥狀態(tài)、緩解病情。

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