劉彩霞 ，孫 維，孫 凱，李 佳，胡國(guó)華，史寶和，居乃新，陳秋惠

家族性皮質(zhì)肌陣攣震顫性癲癇(Familial cortical myoclonic tremor with epilepsy，F(xiàn)CMTE)又稱良性成人家族性肌陣攣性癲癇(Benigh adult familial myoclonic epilepsy，BAFME)，是一種常染色體顯性遺傳疾病。早些年，日本家系和意大利家系研究將FCTME 致病基因分別粗略的定位8q23.3-24.1、2q11.1-q12.2，國(guó)外遺傳分析顯示相關(guān)致病基因與上述兩個(gè)基因位點(diǎn)不連鎖。我們對(duì)該家系的基因位點(diǎn)分析從篩查8q23.3-24.1 開(kāi)始著手。

1 資料與方法

1.1 一般資料

我們已報(bào)道的臨床擬診為家族性皮質(zhì)肌陣攣震顫性癲癇一家系患者［1］。臨床特點(diǎn)符合以下診斷標(biāo)準(zhǔn)［2］:(1)連續(xù)3 代發(fā)病，均成年起病，男女均受累，呈常染色體顯性遺傳;(2)表現(xiàn)為肢體遠(yuǎn)端震顫、癲癇發(fā)作，部分患者于光刺激、驚嚇、情緒刺激時(shí)誘發(fā)全面強(qiáng)直發(fā)作;(3)服β 受體阻滯劑無(wú)效，口服苯巴比妥等抗癲癇藥物有效，為非進(jìn)展病程。(4)體感覺(jué)誘發(fā)電位支持震顫來(lái)源于皮質(zhì)。

1.2 研究方法與試劑

1.2.1 樣品采集與DNA 提取 在獲得患者(7例)和對(duì)照者(患者的直系親屬及配偶13 例，其中1例為可疑病例)知情同意后取外周血5 ml，用家系編號(hào)，詳細(xì)標(biāo)記血樣。利用血液基因組DNA 提取試劑盒(天根)提取各樣本基因組DNA 。

1.2.2 選擇與設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物 我們根據(jù)已報(bào)道的8q23.3-24.1 染色體位點(diǎn)，在NCBImapview圖譜中找到這些區(qū)域中合適遺傳距離的STR(見(jiàn)表1)。

1.2.3 PCR 反應(yīng)、產(chǎn)物處理、毛細(xì)管電泳及結(jié)果收集 對(duì)選擇的STR 位點(diǎn)分別合成普通引物及5'標(biāo)記FAM 的熒光引物，然后進(jìn)行熒光引物標(biāo)記的PCR 反應(yīng)。在ABI PRISM 3730 DNA Analyzer 上用PE 公司的POP-4 分離膠，60 ℃、15KV 下，電泳30 min，選用ABI PRISM GeneMapper Software(Ver3.5)收集實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，進(jìn)行分子量?jī)?nèi)標(biāo)校正和擴(kuò)增片段大小分析，并讀取全部微衛(wèi)星標(biāo)記物等位基因片段的大小。

1.2.4 基因型分析及連鎖分析 利用Gene-MapperV3.5 進(jìn)行基因分型，確定家系中各個(gè)樣本在每個(gè)STR 標(biāo)記處的分型情況。在Linkage5.1 軟件中設(shè)定疾病基因頻率、疾病外顯率及擬表型頻率，θ=0～0.5 進(jìn)行連鎖分析，記錄LOD 值。

2 結(jié)果

我們?cè)?q23.3-q24.1 染色體區(qū)段選取的5 個(gè)STR 位點(diǎn)，在θ=0.0 時(shí)這5 個(gè)STR 位點(diǎn)與致病基因的兩點(diǎn)LOD 值均＜-2(見(jiàn)表2)。

表1 已報(bào)道致病位點(diǎn)所選擇的STR 信息及引物序列

表2 8q23.3-q24.1 染色體區(qū)段STR 位點(diǎn)與該家系致病基因兩點(diǎn)連鎖分析

3 討論

家族性皮質(zhì)肌陣攣震顫性癲癇(FCMTE)又稱良性成人家族性肌陣攣性癲癇(BAFME)、家族性成人肌陣攣癲癇(familial adult myoclonic epilepsy，F(xiàn)AME)等，是一種少見(jiàn)的遺傳性癲癇綜合征，為常染色體顯性遺傳疾病。近年來(lái)，隨著遺傳學(xué)研究工作的不斷深入，該病逐漸被人們重視起來(lái)。迄今，世界已報(bào)道了100 多個(gè)該病家系，中國(guó)、日本、荷蘭、意大利、土耳其等國(guó)家均有報(bào)道，其中主要分布于日本和意大利兩國(guó)，日本發(fā)現(xiàn)的家系已經(jīng)超過(guò)60 例。目前，我國(guó)也陸續(xù)報(bào)道了多個(gè)該病的家系，我們對(duì)研究的這個(gè)FCMTE 家系的臨床特點(diǎn)也做了相應(yīng)報(bào)道［1］。

早些年，日本家系和意大利家系研究將致病基因分別粗略的定位于8q23.3-24.1，2p11.1-q12.2［2，3］，近年來(lái)在法國(guó)、泰國(guó)和中國(guó)又陸續(xù)發(fā)現(xiàn)了5p15.31-p15、3q26.32-3q28 和10p15 等多個(gè)基因位點(diǎn)［4～6］。參考已報(bào)道的文獻(xiàn)，我們?cè)?q23.3-q24.1染色體區(qū)段選取了5 個(gè)STR 位點(diǎn)，如果選擇的5 個(gè)STR 標(biāo)記與致病基因的兩點(diǎn)連鎖參數(shù)LOD 值＜-2，否定該家系的致病基因在此區(qū)段;LOD 值＞1，那么本家系致病基因在此區(qū)段;如果LOD 值＞3 就能夠肯定該家系的致病基因在此區(qū)段。結(jié)果在θ=0.0時(shí)，我們分析的5 個(gè)STR 位點(diǎn)與致病基因的兩點(diǎn)LOD 值均＜-2。根據(jù)此數(shù)據(jù)我們推斷此家系的致病基因位點(diǎn)不在8q23.3-q24.1。但還存在以下可能:(1)我們研究的該家系致病基因不在8q23.3-q24.1。(2)STR 具有人種和地域性，NCBI 數(shù)據(jù)庫(kù)的STR Marks 是以歐洲人群為模板的，而雜合度受遺傳背景的影響比較大，對(duì)我國(guó)人群針對(duì)性不夠強(qiáng)，以致造成STR 位點(diǎn)的等位基因變化范圍、重復(fù)單元、雜合度等數(shù)據(jù)與數(shù)據(jù)庫(kù)報(bào)道有一定出入。另外，也可能我們的家系樣本量不足夠大，或是我們選擇的STR 位點(diǎn)在本家系的雜合率相對(duì)較低或由于STR 標(biāo)記在染色體區(qū)段密度相對(duì)小。在以后的研究工作中我們將繼續(xù)增加本病的其他家系或在相應(yīng)的區(qū)域增加樣本量，以累加LOD 值;也可嘗試使用不同的連鎖分析方法對(duì)分型結(jié)果進(jìn)行分析，綜合各種計(jì)算結(jié)果判斷。總之，盡管本報(bào)道的實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陰性，但為FCMTE 的遺傳學(xué)研究提供了一份良好的研究資料。

［1］劉彩霞，陳秋惠，居乃新，等.家族性皮質(zhì)肌陣攣震顫性癲癇一家系［J］.中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志，2014，31(6):807-808.

［2］Van Rootselaar AF，Van Schaik IN，Van den Maagdenberg AM，et al.Familial cortical myoclonic tremor with epilepsy:a single syndromic classification for a group of pedigrees bearing common features［J］.Mov Disord，2005，20(6):665-673.

［3］Striano P，Chifari R，Strino S，et al.A new benign adult familial myoclonic epilepsy(BAFME)pedigree suggesting linkage to chromosome 2p11.1-q12.2［J］.Epilepsia，2004，45:190-192.

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［5］Depienne C，Magnin E，Bouteiller D，et al.Familial cortical myoclonic tremor with epilepsy:the third locus (FCMTE3)maps to 5p［J］.Neurology，2010，74(24):2000-2003.

［6］Yeetong P，Ausavarat S，Bhidayasiri R.et al.A newly identified locus for benign adult familial myoclonic epilepsy on chromosome 3q26.32-3q28［J］.Eur J Hum Genet，2013，21(2):225-228.