孫曉軍　李霞　劉雪蘭

摘要：將40周齡海蘭白蛋雞480只平均分為4組，分別飼喂添加0、0.5%、1.0%和2.0% CLA的日糧，研究日糧不同CLA水平對(duì)蛋黃脂肪酸組成及蛋黃抗氧化功能的影響。結(jié)果表明：隨著日糧CLA含量的增加，蛋黃中飽和脂肪酸含量顯著增加（P<0.05），單一不飽和脂肪酸含量顯著下降（P<0.05），蛋黃中的共軛亞油酸含量呈線(xiàn)性增加的趨勢(shì)（P<0.05）；蛋黃的各抗氧化指標(biāo)發(fā)生顯著變化，隨著CLA添加量的增加，T-SOD酶含量線(xiàn)性增加， MDA的含量顯著低于對(duì)照組（P<0.05），谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活性顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。因此，以蛋黃中CLA含量和抗氧化性強(qiáng)弱為評(píng)價(jià)指標(biāo)時(shí)，CLA的適宜添加量為2.0%。

關(guān)鍵詞：共軛亞油酸；蛋黃；脂肪酸；抗氧化性

中圖分類(lèi)號(hào)：S816.71文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào)：A文章編號(hào)：1001-4942（2014）12-0103-05

共軛亞油酸（Conjugated linoleic acid，CLA）是一組亞油酸的異構(gòu)體，國(guó)內(nèi)外研究證實(shí)，它具有抗癌、預(yù)防心血管疾病等廣泛的生理功能，因而深受人們青睞。但是其在天然食品中含量極低，不能滿(mǎn)足人的生理需求，因此，動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)界開(kāi)展起將CLA富集到畜禽產(chǎn)品中的研究，其中，將CLA富集到雞蛋中的研究居多，這些研究多集中在CLA在蛋黃中的富集規(guī)律及CLA對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)的影響上[1～9]，對(duì)雞蛋中其它成分如卵磷脂的影響還鮮有報(bào)道。另外，由于CLA是一種強(qiáng)抗氧化劑，富集到雞蛋中對(duì)蛋黃的抗氧化功能研究尚未見(jiàn)報(bào)道。本試驗(yàn)通過(guò)在蛋雞日糧中添加不同劑量的CLA，研究其對(duì)蛋黃中脂肪酸、膽固醇、卵磷脂、SOD、MDA、T-SOD活性、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶和總抗氧化能力的影響，旨在為CLA的脂類(lèi)代謝調(diào)節(jié)功能和抗氧化功能提供試驗(yàn)依據(jù)，為CLA雞蛋的開(kāi)發(fā)和食用提供科學(xué)依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

共軛亞油酸油，CLA含量為80.91%，順-9，反-11 39.59%，反-10，順-12 41.11%，購(gòu)自蓬萊市海洋生物有限公司，批號(hào)為10005，物理性狀為淡黃色油狀液體。

1.2試驗(yàn)動(dòng)物

采用單因素完全隨機(jī)設(shè)計(jì)，按體重、周齡、健康狀況及遺傳特性一致原則將40周齡海蘭白蛋雞480只分為4組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)40只。試驗(yàn)期8周。

1.3試驗(yàn)管理及試驗(yàn)日程

試驗(yàn)在山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽研究所試驗(yàn)雞舍進(jìn)行。試驗(yàn)時(shí)間為2013年3月1日～5月9日，其中2013年3月1～14日為預(yù)試期，各組試驗(yàn)雞根據(jù)需要調(diào)整，使組間產(chǎn)蛋率差異不顯著。調(diào)整結(jié)束后進(jìn)入正式試驗(yàn)期，正式試驗(yàn)期為2013年3月15日～5月9日，共56 d。以2層階梯式金屬籠飼養(yǎng)產(chǎn)蛋雞，每籠1只。按常規(guī)方法飼喂管理，乳頭式飲水器，自由采食和飲水。雞舍溫度15～28℃，室內(nèi)縱向機(jī)械通風(fēng)，自然光照，早晚輔以人工光照，恒定光照時(shí)間為16 h/d，光照強(qiáng)度14 lx。蛋雞日飼喂2次，分別在8∶00和17∶00。每日記錄雞舍溫度和氣溫。

1.4試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼糧

試驗(yàn)飼糧按照中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（2004）進(jìn)行配制。采用玉米-豆粕-棉粕型飼糧，設(shè)4個(gè)CLA油添加水平，分別為0（對(duì)照組）、0.5%、1.0%、2.0%。為使各組飼糧的能值相同，本試驗(yàn)采用重量替代法，在不同的飼糧處理中，用同樣重量的豆油代替等量的CLA油，即在基礎(chǔ)飼糧的基礎(chǔ)上，對(duì)照組豆油含量2.0%，CLA油含量0。飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。飼糧每周配制1次，4℃貯藏。

1.5樣品采集

收集試驗(yàn)最后一天的雞蛋，貼好標(biāo)簽，4℃厭氧保存。

1.6測(cè)定指標(biāo)與方法

1.6.1脂肪酸脂肪酸的測(cè)定方法采用高效液相色譜法，委托農(nóng)業(yè)部飼料工業(yè)中心測(cè)定。

1.6.2T-SOD活性采用黃嘌呤氧化法，752可見(jiàn)光分光光度計(jì)測(cè)定，試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.6.3谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）活力化學(xué)比色法，752可見(jiàn)光分光光度計(jì)測(cè)定，試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.6.4丙二醛（MDA）采用硫代巴比妥酸（TBA） 法測(cè)定，752可見(jiàn)光分光光度計(jì)測(cè)定，試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.7數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS13.0軟件包中的單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)方差分析過(guò)程（ANOVA）進(jìn)行，多重比較采用Duncan氏法進(jìn)行，以P<0.05（差異顯著）作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2結(jié)果與分析

2.1日糧CLA添加量對(duì)蛋黃脂肪酸組成的影響

蛋黃脂肪酸組成見(jiàn)表2。隨著日糧CLA濃度的增加，飽和脂肪酸和多不飽和脂肪酸的含量逐漸增加，單不飽和脂肪酸的含量逐漸降低，CLA的添加量為1.0%時(shí)這種變化既達(dá)到顯著水平。除了木質(zhì)素酸（C24∶0）外，幾乎所有的飽和脂肪酸的含量都因日糧補(bǔ)充共軛亞油酸而發(fā)生了明顯改變，其中當(dāng)?shù)半u日糧添加2.0%的共軛亞油酸時(shí)，飽和脂肪酸中的月桂酸（C12∶0）、肉豆蔻酸（C14∶0）、棕櫚酸（C16∶0）、硬脂酸（C18∶0）、十七碳酸和花生酸（C20∶0）顯著增加，而山崳酸（C22∶0）含量顯著下降（P<0.05）。蛋黃中幾乎所有的多不飽和脂肪酸（二十碳五烯酸除外）均發(fā)生了一定的變化，但變化趨勢(shì)不同。隨著日糧CLA含量的增加，十八碳二烯酸和二十碳二烯酸的含量明顯增加，而亞麻酸（C18∶3）、花生四烯酸（C20∶4）、二十二碳四烯酸、二十二碳五烯酸和二十二碳六烯酸的含量顯著降低（P<0.05）。蛋黃中CLA含量顯著增加（P<0.05）。

如表2所示，蛋黃中的c-9，t-11和t-10，c-12異構(gòu)體分別占66%～70%和29%～34%，說(shuō)明CLA異構(gòu)體是選擇性地沉積在蛋黃中的。Raes（2002）等[15]報(bào)道，c-9， t-11的沉積效率高于t-10， c-12異構(gòu)體，與我們的研究結(jié)果一致，然而其原因尚不清楚。

2.2不同CLA添加水平對(duì)蛋黃抗氧化能力的影響

表3結(jié)果表明，隨著日糧CLA含量的增加，蛋黃中SOD酶活性線(xiàn)性增加，影響顯著（P<0.05）；MDA含量逐漸降低，當(dāng)日糧添加2%的CLA時(shí)，MDA的含量顯著低于對(duì)照組（P<0.05）；隨著日糧CLA含量增加，蛋黃中谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活性逐漸增加，當(dāng)日糧中CLA添加量為2.0%時(shí)，其活性顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。同類(lèi)的研究尚未見(jiàn)資料報(bào)道，其機(jī)理可能是CLA具有1個(gè)共軛雙鍵，能淬滅單線(xiàn)態(tài)氧，消除氧自由基，是脂類(lèi)過(guò)氧化物反應(yīng)的斷鏈抗氧化劑。

3小結(jié)

3.1從表2可以看出，隨日糧共軛亞油酸含量的增加，蛋黃中飽和脂肪酸和多不飽和脂肪酸逐漸增加，而單不飽和脂肪酸下降。Ahn等（1999）[11]也得出了同樣的結(jié)論，這表明，共軛亞油酸確實(shí)有改變飽和脂肪酸和單不飽和脂肪酸比例的生理效應(yīng)。這是由于CLA抑制了Δ9-去飽和酶活性，Δ9-去飽和酶是飽和脂肪酸轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的單不飽和脂肪酸的關(guān)鍵酶，從而導(dǎo)致飽和脂肪酸增加，不飽和脂肪酸減少[12]；蛋黃中多不飽和脂肪酸的增加則是由于CLA抑制了Δ-6共軛亞油酸脂肪酸脫氫酶的活性，Belury等[13]研究發(fā)現(xiàn)，CLA是Δ-6脂肪酸脫氫酶抑制劑，而Δ-6脂肪酸脫氫酶是亞麻酸轉(zhuǎn)化為C20∶5系列脂肪酸的關(guān)鍵酶，由于CLA抑制了Δ-6去飽和酶，使C18∶3脂肪酸轉(zhuǎn)換為C20∶5脂肪酸時(shí)受阻，導(dǎo)致多不飽和脂肪酸的含量增加。日糧CLA降低了蛋黃中的花生四烯酸，這與Cherian（2002）等[14]研究結(jié)果相一致，研究者普遍認(rèn)為有兩種可能機(jī)制：一是Δ-6去飽和酶（亞油酸和亞麻酸轉(zhuǎn)化為花生四烯酸的限速酶）被共軛亞油酸、亞油酸和亞麻酸競(jìng)爭(zhēng)性抑制；另一個(gè)是日糧中的亞油酸和亞麻酸的含量均較低，因?yàn)镃LA油中亞油酸及亞麻酸含量比大豆油低很多，當(dāng)共軛亞油酸油代替豆油，日糧的亞油酸和亞麻酸降低，而亞油酸和亞麻酸是花生四烯酸的合成前體，因此蛋黃中花生四烯酸的含量降低。

3.2關(guān)于蛋黃SOD的研究報(bào)道較少，王俊卿等（2002）[16]報(bào)道，光合細(xì)菌能使雞蛋中SOD酶活性大大提高。郝志明等（2005）[17]在蛋黃和蛋清中也都測(cè)到了SOD。目前，關(guān)于共軛亞油酸對(duì)SOD酶的影響還未見(jiàn)資料報(bào)道。在本研究中，日糧添加共軛亞油酸對(duì)蛋黃中SOD活性有影響，隨著添加量的增加，酶活性線(xiàn)性增加，其機(jī)理尚不清楚，可能是共軛油酸對(duì)SOD酶基因的表達(dá)有影響。

3.3CLA對(duì)蛋黃中MDA含量的影響尚未見(jiàn)報(bào)道，但CLA能降血清和肝臟中的MDA含量和具有抗氧化性的功能時(shí)有報(bào)道。張旭輝等（2007）[18]研究發(fā)現(xiàn)，鵝日糧中添加CLA后，其血清和肝臟中MDA含量比對(duì)照組有顯著性降低；Livisay等（2000）[19]也發(fā)現(xiàn)CLA可以增強(qiáng)大鼠肝臟微粒體和骨骼肌勻漿的氧化穩(wěn)定性，降低MDA的生成，以上研究與本試驗(yàn)結(jié)論相同。目前，CLA對(duì)機(jī)體抗氧化防御系統(tǒng)的作用還不確切。大量研究是在體外條件下進(jìn)行的，體內(nèi)試驗(yàn)報(bào)道還很缺乏，且體外試驗(yàn)常常不能反映體內(nèi)的條件和生理過(guò)程，往往與體內(nèi)試驗(yàn)差異很大。關(guān)于CLA是否通過(guò)作為抗氧化劑或氧化強(qiáng)化劑發(fā)揮作用，至今仍存在分歧。Kim等（2002）[20]報(bào)道CLA可以降低大鼠脂質(zhì)過(guò)氧化物，增加氧化穩(wěn)定性。CLA有助于增強(qiáng)機(jī)體清除自由基的能力，至于其是否具有直接清除自由基作用，以及其提高抗氧化酶活力的量效關(guān)系、作用機(jī)理和有效活性成分等還有待于進(jìn)一步研究。

3.4日糧中添加共軛亞油酸改變了蛋黃脂肪酸的組成，使得飽和脂肪酸含量增加，單一不飽和脂肪酸含量下降；隨著日糧共軛亞油酸添加量的增加，蛋黃中共軛亞油酸含量呈線(xiàn)性增加趨勢(shì)；日糧添加共軛亞油酸還可以提高蛋黃抗氧化性。因此食用共軛亞油酸雞蛋可以在不改變?nèi)藗冿嬍沉?xí)慣的情況下，既能補(bǔ)充共軛亞油酸，提高人體抗心血管疾病和腫瘤的能力，增強(qiáng)肌體免疫力，同時(shí)又能增強(qiáng)肌體的抗衰老能力，延緩身體各器官老化速度，對(duì)促進(jìn)身體健康，提高國(guó)民身體素質(zhì)具有深遠(yuǎn)意義。

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