徐 瓊，聶 嬋，熊云剛，鄒 焰

(1遵義醫(yī)學(xué)院，貴州遵義 563000;2貴州航天醫(yī)院，貴州遵義 563000)

阿維菌素以其穩(wěn)定、經(jīng)濟(jì)、農(nóng)畜兩用等一系列優(yōu)點(diǎn)而在市場上流行，商家為了追逐經(jīng)濟(jì)利益，導(dǎo)致不同濃度、不同劑型的阿維菌素在市場上頻繁出現(xiàn)。姜艷杰［1］研究得出，1.8%的阿維菌素乳油以其指標(biāo)的穩(wěn)定性、安全性等性能為最佳產(chǎn)品配比。在對阿維菌素的研究中，關(guān)于其在農(nóng)作物上的殘留動(dòng)態(tài)研究已有不少［2-4］，但這些研究中多以白菜、甘藍(lán)等農(nóng)作物以及果樹最多。貴州省因地域優(yōu)勢而盛產(chǎn)辣椒［5］，貴州空氣的濕度也相對較大，各種辣椒已成為貴州人們餐桌上的必備食物之一，但目前還未見相關(guān)的文獻(xiàn)對阿維菌素在辣椒上的殘留進(jìn)行探索。為了研究阿維菌素在辣椒中的消解規(guī)律，于2013年在貴州省遵義地區(qū)進(jìn)行了消解動(dòng)態(tài)實(shí)驗(yàn)，旨在為阿維菌素的登記及安全使用標(biāo)準(zhǔn)的制訂提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 試驗(yàn)作物 新鮮辣椒。

1.1.2 試驗(yàn)試劑 1.8%阿維菌素乳油(河北威遠(yuǎn)生物化工);已腈(色譜純);甲醇(色譜純);阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)品(B1a 含量為91.2 %) (上海市農(nóng)藥研究所);無水硫酸鎂、檸檬酸鈉、硫酸鎂、及石墨化炭黑粉末(GCB)、C18E、PSA 粉末。

1.1.3 試驗(yàn)儀器 LC-20A 高效液相色譜儀(日本島津公司);RE52-AA 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、SHZ-Ⅲ型循環(huán)水真空泵(上海亞榮生化儀器廠);離心機(jī);食品粉碎機(jī);YP402N 電子天平。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 配制標(biāo)準(zhǔn)溶液

阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)儲備液 (100μg/mL)，準(zhǔn)確稱取0.0105g 阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)品 (精確到0.001 g)至100 mL 容量瓶中，用甲醇定容。

1.2.2 田間試驗(yàn)

試驗(yàn)于2013年7月13 日在貴州省遵義高坪蔬菜實(shí)驗(yàn)基地進(jìn)行。試驗(yàn)區(qū)分別設(shè)空白對照區(qū)、低劑量處理區(qū)、2 倍劑量處理區(qū)和4 倍劑量處理區(qū)，各處理區(qū)分別按不噴灑農(nóng)藥、噴灑推薦使用劑量的最高值、推薦使用劑量最高值的2 倍、4 倍進(jìn)行常規(guī)兌水噴霧，施藥器械為噴霧器。施藥時(shí)間在當(dāng)天早上10 點(diǎn)以前進(jìn)行，試驗(yàn)期間除第三、四天下雨外，其余時(shí)候天氣晴朗，日平均氣溫為29～32℃，濕度為33%～45%。

1.2.3 消解動(dòng)態(tài)試驗(yàn)

按一次施藥多次取樣的方法進(jìn)行，試驗(yàn)分別設(shè)3個(gè)處理和1 個(gè)空白對照，處理的施藥劑量為推薦使用劑量、2 倍推薦使用劑量和4 倍推薦使用劑量，施藥次數(shù)為1 次。在辣椒成長期(辣椒長至8cm 以上)，把阿維菌素分別按不同濃度兌水進(jìn)行稀釋，對辣椒(包括葉子、辣椒)進(jìn)行均勻周到的噴霧。于施藥后1、3、8h 和2、3、4d 在每個(gè)濃度區(qū)域隨機(jī)采集辣椒樣品，每小區(qū)視植株大小每次每小區(qū)采集18—22 株生長正常的辣椒植株，用聚乙烯袋密封后放在冰袋上運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室待制備，分別按照《農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則》［6］對辣椒進(jìn)行采樣和樣品處理。

1.3 分析方法

1.3.1 樣品的提取

將辣椒樣品摘去根部，去除明顯萎蔫的部分，用剪刀將其剪小后經(jīng)食品加工機(jī)粉碎混勻，準(zhǔn)確稱取混勻后的辣椒菜樣本10.00g，將其置于50mL 的離心管中，然后加入15mL 乙腈溶液作為萃取溶劑，蓋緊蓋子，搖晃1min左右，再加入萃取鹽無水硫酸鎂6.0 g 、1g 檸檬酸鈉和1g NaCl 均質(zhì)提取，然后以4 000 r/min 離心5 min，使農(nóng)藥進(jìn)入有機(jī)層。用移液槍準(zhǔn)確吸取15mL 上清液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，用1.5mL 乙腈溶液充分溶解殘?jiān)⑵湟浦岭x心管中，待凈化。

1.3.2 樣品的凈化

稱取適量的石墨化炭黑粉末(GCB)、PSA 粉末、C18E 和MgSO4移入上述1.5mL 溶解液中，以6 000 r/min 離心2min 以達(dá)到去除樣品中主要干擾物的作用，將離心后取其上清液，放入2mL 離心管中，用一次性注射器取出至0.45μm 濾膜過濾，濾液待上機(jī)測定。

1.3.3 色譜條件

色譜柱C18 為不銹鋼柱(250 ×4.6mm，5um);阿維菌素:檢測波長:245nm;流動(dòng)相:V (甲醇)∶V(水)=85∶15;進(jìn)樣量20μL;流速1.0mL/min;柱溫:30 ℃;保留時(shí)間約為25min (圖1)。

圖1 阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

2 結(jié)果與分析

2.1 阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

分別配制濃度為0.5、1、2、5 和10μg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液。在上述色譜條件下進(jìn)樣20μL，以峰面積為縱坐標(biāo)、溶液質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，其阿維菌素的回歸方程為:y=38 819x+8 239.4，R2=0.999 2(圖2)。

2.2 添加回收率試驗(yàn)

在對照組空白辣椒中添加適量的阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)溶液，按上述方法進(jìn)行提取凈化和高效液相色譜分析，測定樣品中阿維菌素的回收率。從表1 中可以看出，在辣椒中不同濃度阿維菌素的添加回收率為86.88%～90.73%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為2.53%～4.20%，滿足農(nóng)藥殘留分析方法測試的要求。

圖2 阿維菌素的標(biāo)準(zhǔn)曲線

表1 阿維菌素在辣椒中的添加回收率

2.3 阿維菌素在辣椒中的消解

在辣椒中推薦劑量阿維菌素的初始?xì)埩袅繛?7.813μg/kg，推薦劑量的2 倍的初始?xì)埩袅繛?4.850μg/kg，推薦劑量的4 倍的初始?xì)埩袅繛?73.616μg/kg，可以看出阿維菌素在辣椒上的初始?xì)埩袅慷急容^低，可能是因?yàn)槭┧帟r(shí)辣椒枝葉茂盛，絕大多數(shù)農(nóng)藥都噴灑到辣椒葉上而使得辣椒表面的量有所減少，也有可能是因?yàn)槭褂玫陌⒕S菌素是乳油型的，乳油型的光解較其它劑型的迅速，消解也較快。而從不同濃度的消解動(dòng)態(tài)趨勢上還可以看出隨著施藥后采樣時(shí)間的延長，阿維菌素在辣椒中的殘留量逐漸減少，不同濃度的阿維菌素在辣椒中的降解過程都是先快后慢的，阿維菌素在辣椒上的殘留量與施藥后的取樣時(shí)間之間呈較明顯的負(fù)指數(shù)函數(shù)關(guān)系，它們的消解基本符合一級反應(yīng)動(dòng)力學(xué)方程降解模型，用一級化學(xué)反應(yīng)動(dòng)力學(xué)方程表示如表2，得到相關(guān)系數(shù)(R2)范圍為0.966～0.995，由此可以得到不同濃度的阿維菌素在辣椒中的半衰期分別為3.79d、4.44d、4.30d，可以看出阿維菌素屬于易降解的農(nóng)藥［7］。

表2 阿維菌素在辣椒中的一級消解動(dòng)力學(xué)方程

3 結(jié)論

阿維菌素在農(nóng)藥中以其農(nóng)畜兩用的生物特點(diǎn)成為現(xiàn)階段發(fā)展最快的農(nóng)藥之一。隨著中國阿維菌素科研攻關(guān)目標(biāo)的不斷完成，阿維菌素生產(chǎn)趨于穩(wěn)定，生產(chǎn)成本達(dá)到很低的水平，可以登記在更廣泛的作物上［8］。雖然它穩(wěn)定、劑量低，但按WHO 五級分類標(biāo)準(zhǔn)，阿維菌素類仍屬高毒化合物，所以本試驗(yàn)以阿維菌素為藥劑進(jìn)行研究。我國尚未制定阿維菌素具體在辣椒中的最高殘留限量(MRL)，但我國農(nóng)業(yè)部已規(guī)定阿維菌素在葉菜中的最高殘留限量為50μg/kg［9-11］，按照這個(gè)標(biāo)準(zhǔn)來看，辣椒在經(jīng)過7 d 的安全間隔期只有在噴施4 倍推薦使用劑量的阿維菌素殘留量造成了超標(biāo)，因此按照正常的使用劑量7 d 安全間隔期管理，阿菌維素在辣椒上的使用是安全的。

［1］姜艷杰.1.8%阿維菌素乳油新配方的研究［J］.安徽化工，2011，37(1):61-62

［2］HUANG Yu-nan，et al.Study on residue trends of imidacloprid in pear fruit ［J］.Journal of Fruit Science，2010，27(3):453-45.

［3］張少華，皇甫偉國，何新華，等.高效液相色譜法檢測蔥中阿維菌素的殘留量［J］.農(nóng)藥，2006，45(4):263-264.

［4］李晶，等.高效液相色譜檢測梨中阿維菌素殘留方法研究［J］.農(nóng)藥科學(xué)與管理，2008，29(2):17-20.

［5］詹永發(fā)，楊紆，余文中.遵義朝天椒高產(chǎn)配套栽培技術(shù)［J］.貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，2005，33(5):94-95.

［6］農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所.農(nóng)業(yè)部行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T 788-2004《農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則》［S］.北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2004.

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［8］陳瓊，陳榮華，聶嬋，等.阿維菌素的發(fā)展與應(yīng)用概況［J］.中國食物與營養(yǎng)，2014，20(9):30-32.

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［10］Ministry of Agriculture of the People's Repubfie of China(中華人民共和國農(nóng)業(yè)部).農(nóng)藥最大殘留限量:阿維菌素，葉菜類(NYl500.1.1-2007)［S］.2008.

［11］NZ Food Safety Authority.Pesticide MRL Database ［S］.2003.