梁璐璐，王影姣，金小寶

(廣東藥學(xué)院基礎(chǔ)學(xué)院/廣東省生物活性藥物研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣州 510006)

急性酒精中毒是指由于一次過(guò)量飲酒而引起的中樞神經(jīng)系統(tǒng)由興奮轉(zhuǎn)為抑制的狀態(tài)［1］，嚴(yán)重者可引起急性胃出血、急性胃炎、急性肝炎、高血壓等甚至死亡。由于飲酒而引起的相關(guān)問(wèn)題是僅次于心血管疾病、腫瘤的第三大公共衛(wèi)生問(wèn)題［2］，因此，研發(fā)解酒產(chǎn)品有很好的應(yīng)用前景。《中國(guó)藥典》［3］記載，蜂蜜可以“補(bǔ)中、潤(rùn)燥、止痛、解毒”。有文獻(xiàn)報(bào)道，蜂蜜能夠促進(jìn)酒精的分解吸收和減輕飲酒帶來(lái)的頭痛癥狀［4］，很多解酒保健品中都添加了蜂蜜組分。但是，蜂蜜解酒的物質(zhì)基礎(chǔ)及其可能的作用機(jī)制尚未闡明。本研究擬探討蜂蜜是否對(duì)急性酒精中毒大鼠具有解酒作用，并對(duì)其可能的作用機(jī)制進(jìn)行初步探討。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF 級(jí)雄性SD 大鼠，體質(zhì)量為180—200g，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)(大學(xué)城)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)SCXK (粵)2013-0020。屏障系統(tǒng)動(dòng)物房，每籠放養(yǎng)4 只，每天接受12h 光照/12h 黑暗，光照周期為8:00—20:00，動(dòng)物可以自行攝取標(biāo)準(zhǔn)飼料和清潔用水，適應(yīng)性喂養(yǎng)3d 后啟用。實(shí)驗(yàn)室室溫控制在(22±3)℃，相對(duì)濕度為50%—70%。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)遵守國(guó)際實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理學(xué)要求。

1.1.2 藥物與試劑 食用級(jí)無(wú)水乙醇、0.9%生理鹽水(廣州文?？茖W(xué)儀器有限公司);冠生園純凈蜂蜜(上海冠生園蜂制品有限公司，批號(hào)170508M1);維衛(wèi)康鼎久解酒口服液 (北京維衛(wèi)康科技有限公司，批號(hào)20140417);乙醇檢測(cè)試劑盒(BioAssay Systems，USA);ADH 試劑盒(南京建成生物公司，批號(hào):20140417);ALDH 試劑盒(北京安迪華泰科技有限公司，批號(hào):HTBX030);總蛋白試劑盒(南京建成生物公司，批號(hào)20140417)。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 高速冷凍離心機(jī)(Centrifuge 5810R，德國(guó)Eppendorf);組織勻漿機(jī)(IKA-T10，德國(guó)IKA 公司);電熱恒溫水箱(金壇市精達(dá)儀器制造廠);分析天平(賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司);分光光度計(jì)(U-2900，日本HITACHI);450nm 酶標(biāo)儀(ELX808，美國(guó)BioTek 公司)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 動(dòng)物分組 36 只SPF 級(jí)雄性SD 大鼠，適應(yīng)性喂養(yǎng)3d 后均禁食不禁水13h，隨機(jī)分為6 組:正常組(不做任何處理)、模型組(灌服生理鹽水15mL/kg)、蜂蜜低濃度組(灌服5%蜂蜜15mL/kg)、蜂蜜中濃度組(灌服10%蜂蜜15mL/kg)、蜂蜜高濃度組(灌服20%蜂蜜15mL/kg)、陽(yáng)性藥物對(duì)照組(根據(jù)人與動(dòng)物藥物劑量換算灌服鼎久解酒口服液12.5mL/kg)，每組6 只。

1.2.2 模型構(gòu)建及給藥 本研究參考酒精中毒大鼠模型構(gòu)建的方法［5］并加以改進(jìn)，采用75%食用級(jí)無(wú)水乙醇按10mL/kg 一次性灌胃法構(gòu)建急性酒精中毒大鼠模型。除正常組外，其余各組均以75%食用級(jí)無(wú)水乙醇按10mL/kg 灌胃大鼠，30min 后，各治療組分別給藥，模型組灌服生理鹽水。

1.2.3 動(dòng)物取材及標(biāo)本處理 各處理組大鼠給藥2.5h后腹主動(dòng)脈取血并處死大鼠，立即剖取肝臟和胃，肝臟去包膜、胃去內(nèi)容物后經(jīng)預(yù)冷的生理鹽水反復(fù)沖洗干凈，用濾紙吸干、稱重，冰浴下按1∶9 加入預(yù)冷的生理鹽水，用自動(dòng)組織勻漿機(jī)分別制成肝組織和胃組織勻漿。收集的全血靜置1h 后2 500r/min 離心15min，取上清，-20℃冰箱保存，留作血清乙醇濃度檢測(cè)。制備的10%肝組織勻漿3 000r/min 低溫離心15min，取上清，-20℃冰箱保存，留作肝ADH、ALDH、總蛋白含量檢測(cè)。制備的10%胃組織勻漿3 000r/min 低溫離心15min，取上清，-20℃冰箱保存，留作胃ADH、ALDH、總蛋白含量檢測(cè)。

1.2.4 檢測(cè)指標(biāo) 血清乙醇濃度，嚴(yán)格按照乙醇檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)完成檢測(cè);肝ADH 和ALDH 活性，嚴(yán)格按照各試劑盒說(shuō)明書(shū)完成檢測(cè)，結(jié)果用肝組織蛋白含量校正;胃ADH 和ALDH 活性，嚴(yán)格按照各試劑盒說(shuō)明書(shū)完成檢測(cè)，結(jié)果用胃組織蛋白含量校正。

2 結(jié)果與分析

2.1 大鼠灌酒后一般形態(tài)表現(xiàn)

除正常組外，各實(shí)驗(yàn)組大鼠灌酒5min 后均相繼出現(xiàn)后腹拖地，共濟(jì)失調(diào)(步態(tài)不穩(wěn)，困倦感，動(dòng)作不協(xié)調(diào))，尿失禁，側(cè)臥，翻正反射消失(將大鼠背部向下，保持30s 不動(dòng))等醉酒癥狀，說(shuō)明大鼠急性酒精中毒模型構(gòu)建成功。

2.2 蜂蜜對(duì)急性酒精中毒大鼠血清乙醇濃度的影響

與正常組相比，模型組大鼠血清乙醇濃度極顯著升高(P＜0.01)，說(shuō)明急性酒精中毒大鼠造模成功。與模型組比較，蜂蜜低、中濃度組大鼠血清乙醇濃度均顯著降低(P＜0.05)，蜂蜜高濃度組大鼠血清乙醇濃度極顯著降低(P＜0.01)。與陽(yáng)性藥物對(duì)照組相比，蜂蜜各處理組大鼠血清乙醇濃度明顯升高(P＜0.01) (表1)。此結(jié)果表明，蜂蜜可降低急性酒精中毒大鼠血清中的乙醇含量，但效果不及陽(yáng)性藥物對(duì)照組。

表1 大鼠血清乙醇濃度(±s，n=6)

表1 大鼠血清乙醇濃度(±s，n=6)

注:與正常組相比:# P＜0.01;與模型組相比:* P＜0.05，＊＊P＜0.01;與陽(yáng)性藥物對(duì)照組相比:△P＜0.01

2.3 蜂蜜對(duì)急性酒精中毒大鼠肝、胃組織中的ADH 的影響

與模型組比較，蜂蜜中、高濃度組大鼠肝組織ADH活性極顯著升高(P＜0.01)，蜂蜜低濃度組大鼠胃組織ADH 活性顯著升高(P＜0.05)，蜂蜜中、高濃度組大鼠胃組織ADH 活性極顯著升高(P＜0.01)。與陽(yáng)性藥物對(duì)照組相比，蜂蜜低濃度組大鼠肝組織ADH 活性顯著降低(P＜0.05)，蜂蜜中、高濃度組大鼠肝組織ADH活性降低，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P ＞0.05)。蜂蜜各濃度組胃ADH 活性均極顯著減低(P＜0.01)(表2)。此結(jié)果提示，蜂蜜能升高急性酒精中毒大鼠肝組織和胃組織ADH活性水平，但升高的水平不及陽(yáng)性藥物對(duì)照組。

表2 大鼠肝、胃組織ADH 活性(±s，n=6)

表2 大鼠肝、胃組織ADH 活性(±s，n=6)

注:與模型組相比，* P＜0.05，＊＊P＜0.01;與陽(yáng)性藥物對(duì)照組相比，△P＜0.05，△△P＜0.01

2.4 蜂蜜對(duì)急性酒精中毒大鼠肝、胃組織中的ALDH的影響

與模型組比較，蜂蜜低濃度組肝組織ALDH 活性顯著升高(P＜0.05)，蜂蜜中、高濃度組肝組織和胃組織ALDH 活性極顯著升高(P＜0.01)。與陽(yáng)性藥物對(duì)照組相比，蜂蜜各濃度組大鼠肝ALDH 活性降低，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P ＞0.05)，蜂蜜低濃度組大鼠胃ALDH 活性極顯著降低(P＜0.01)，蜂蜜中、高濃度組大鼠胃ALDH活性升高，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P ＞0.05) (表3)。此結(jié)果提示，蜂蜜能升高急性酒精中毒大鼠肝組織和胃組織ALDH 活性水平，但部分濃度的蜂蜜組升高水平不及陽(yáng)性藥物對(duì)照組。

表3 大鼠肝、胃ALDH 活性(±s，n=6)

表3 大鼠肝、胃ALDH 活性(±s，n=6)

注:與模型組相比，* P＜0.05，＊＊P＜0.01;與陽(yáng)性藥物對(duì)照組相比:△P＜0.01

3 討論

解酒藥物的核心是降低血液中乙醇及其代謝產(chǎn)物的濃度而減輕其對(duì)各器官的損傷。進(jìn)入體內(nèi)的酒精大部分由ADH 氧化為乙醛，乙醛由ALDH 轉(zhuǎn)化為乙酸，再經(jīng)三羧酸循環(huán)，最后氧化成二氧化碳和水排出體外［6］。ADH 和ALDH 主要分布在肝臟和胃中，是酒精代謝的關(guān)鍵酶［7，8］。本研究結(jié)果表明，蜂蜜可以通過(guò)提高肝組織和胃組織中ADH 和ALDH 活性從而降低急性酒精中毒大鼠血清乙醇濃度，具有較好的解酒作用。乙醛是導(dǎo)致醉酒不適以及肝損傷的主要物質(zhì)［9］，肝臟中ALDH 的活性升高直接導(dǎo)致乙醛在肝臟中的量減少，說(shuō)明蜂蜜具有潛在的護(hù)肝功效，可作為解酒護(hù)肝產(chǎn)品的原材料進(jìn)一步研究。

蜂蜜成分復(fù)雜，含有碳水化合物、蛋白質(zhì)、礦物質(zhì)、維生素、有機(jī)酸、黃酮、酚酸、酶等200 多種化學(xué)物質(zhì)［10］，具有抑菌、抗氧化和抗炎等活性，對(duì)治療創(chuàng)傷、燒傷、胃潰瘍等疾病具有一定的療效［11，12］。眾多研究發(fā)現(xiàn)，蜂蜜中的糖類、黃酮類和酚酸類［13-18］化學(xué)物質(zhì)是其主要起作用的生物活性成分。目前已知我國(guó)傳統(tǒng)解酒草藥葛根和葛花中的主要解酒有效成分為黃酮類物質(zhì)［19，20］，但尚不知道蜂蜜中的何種有效生物活性成分導(dǎo)致這種解酒作用。因此，蜂蜜中的有效解酒成分需要進(jìn)一步研究。

4 結(jié)論

本文通過(guò)構(gòu)建急性酒精中毒SD 大鼠模型，探討了蜂蜜的解酒作用及其可能的作用機(jī)制，結(jié)果表明，蜂蜜可通過(guò)提高肝組織和胃組織中ADH 和ALDH 活性從而降低急性酒精中毒大鼠血清乙醇濃度，有較好的解酒作用。

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