梁璐璐，王影姣，金小寶

(廣東藥學院基礎(chǔ)學院/廣東省生物活性藥物研究重點實驗室，廣州 510006)

急性酒精中毒是指由于一次過量飲酒而引起的中樞神經(jīng)系統(tǒng)由興奮轉(zhuǎn)為抑制的狀態(tài)［1］，嚴重者可引起急性胃出血、急性胃炎、急性肝炎、高血壓等甚至死亡。由于飲酒而引起的相關(guān)問題是僅次于心血管疾病、腫瘤的第三大公共衛(wèi)生問題［2］，因此，研發(fā)解酒產(chǎn)品有很好的應用前景。《中國藥典》［3］記載，蜂蜜可以“補中、潤燥、止痛、解毒”。有文獻報道，蜂蜜能夠促進酒精的分解吸收和減輕飲酒帶來的頭痛癥狀［4］，很多解酒保健品中都添加了蜂蜜組分。但是，蜂蜜解酒的物質(zhì)基礎(chǔ)及其可能的作用機制尚未闡明。本研究擬探討蜂蜜是否對急性酒精中毒大鼠具有解酒作用，并對其可能的作用機制進行初步探討。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 SPF 級雄性SD 大鼠，體質(zhì)量為180—200g，由廣州中醫(yī)藥大學(大學城)實驗動物中心提供，合格證號SCXK (粵)2013-0020。屏障系統(tǒng)動物房，每籠放養(yǎng)4 只，每天接受12h 光照/12h 黑暗，光照周期為8:00—20:00，動物可以自行攝取標準飼料和清潔用水，適應性喂養(yǎng)3d 后啟用。實驗室室溫控制在(22±3)℃，相對濕度為50%—70%。動物實驗遵守國際實驗動物倫理學要求。

1.1.2 藥物與試劑 食用級無水乙醇、0.9%生理鹽水(廣州文?？茖W儀器有限公司);冠生園純凈蜂蜜(上海冠生園蜂制品有限公司，批號170508M1);維衛(wèi)康鼎久解酒口服液 (北京維衛(wèi)康科技有限公司，批號20140417);乙醇檢測試劑盒(BioAssay Systems，USA);ADH 試劑盒(南京建成生物公司，批號:20140417);ALDH 試劑盒(北京安迪華泰科技有限公司，批號:HTBX030);總蛋白試劑盒(南京建成生物公司，批號20140417)。

1.1.3 實驗儀器 高速冷凍離心機(Centrifuge 5810R，德國Eppendorf);組織勻漿機(IKA-T10，德國IKA 公司);電熱恒溫水箱(金壇市精達儀器制造廠);分析天平(賽多利斯科學儀器北京有限公司);分光光度計(U-2900，日本HITACHI);450nm 酶標儀(ELX808，美國BioTek 公司)。

1.2 實驗方法

1.2.1 動物分組 36 只SPF 級雄性SD 大鼠，適應性喂養(yǎng)3d 后均禁食不禁水13h，隨機分為6 組:正常組(不做任何處理)、模型組(灌服生理鹽水15mL/kg)、蜂蜜低濃度組(灌服5%蜂蜜15mL/kg)、蜂蜜中濃度組(灌服10%蜂蜜15mL/kg)、蜂蜜高濃度組(灌服20%蜂蜜15mL/kg)、陽性藥物對照組(根據(jù)人與動物藥物劑量換算灌服鼎久解酒口服液12.5mL/kg)，每組6 只。

1.2.2 模型構(gòu)建及給藥 本研究參考酒精中毒大鼠模型構(gòu)建的方法［5］并加以改進，采用75%食用級無水乙醇按10mL/kg 一次性灌胃法構(gòu)建急性酒精中毒大鼠模型。除正常組外，其余各組均以75%食用級無水乙醇按10mL/kg 灌胃大鼠，30min 后，各治療組分別給藥，模型組灌服生理鹽水。

1.2.3 動物取材及標本處理 各處理組大鼠給藥2.5h后腹主動脈取血并處死大鼠，立即剖取肝臟和胃，肝臟去包膜、胃去內(nèi)容物后經(jīng)預冷的生理鹽水反復沖洗干凈，用濾紙吸干、稱重，冰浴下按1∶9 加入預冷的生理鹽水，用自動組織勻漿機分別制成肝組織和胃組織勻漿。收集的全血靜置1h 后2 500r/min 離心15min，取上清，-20℃冰箱保存，留作血清乙醇濃度檢測。制備的10%肝組織勻漿3 000r/min 低溫離心15min，取上清，-20℃冰箱保存，留作肝ADH、ALDH、總蛋白含量檢測。制備的10%胃組織勻漿3 000r/min 低溫離心15min，取上清，-20℃冰箱保存，留作胃ADH、ALDH、總蛋白含量檢測。

1.2.4 檢測指標 血清乙醇濃度，嚴格按照乙醇檢測試劑盒說明書完成檢測;肝ADH 和ALDH 活性，嚴格按照各試劑盒說明書完成檢測，結(jié)果用肝組織蛋白含量校正;胃ADH 和ALDH 活性，嚴格按照各試劑盒說明書完成檢測，結(jié)果用胃組織蛋白含量校正。

2 結(jié)果與分析

2.1 大鼠灌酒后一般形態(tài)表現(xiàn)

除正常組外，各實驗組大鼠灌酒5min 后均相繼出現(xiàn)后腹拖地，共濟失調(diào)(步態(tài)不穩(wěn)，困倦感，動作不協(xié)調(diào))，尿失禁，側(cè)臥，翻正反射消失(將大鼠背部向下，保持30s 不動)等醉酒癥狀，說明大鼠急性酒精中毒模型構(gòu)建成功。

2.2 蜂蜜對急性酒精中毒大鼠血清乙醇濃度的影響

與正常組相比，模型組大鼠血清乙醇濃度極顯著升高(P＜0.01)，說明急性酒精中毒大鼠造模成功。與模型組比較，蜂蜜低、中濃度組大鼠血清乙醇濃度均顯著降低(P＜0.05)，蜂蜜高濃度組大鼠血清乙醇濃度極顯著降低(P＜0.01)。與陽性藥物對照組相比，蜂蜜各處理組大鼠血清乙醇濃度明顯升高(P＜0.01) (表1)。此結(jié)果表明，蜂蜜可降低急性酒精中毒大鼠血清中的乙醇含量，但效果不及陽性藥物對照組。

表1 大鼠血清乙醇濃度(±s，n=6)

表1 大鼠血清乙醇濃度(±s，n=6)

注:與正常組相比:# P＜0.01;與模型組相比:* P＜0.05，＊＊P＜0.01;與陽性藥物對照組相比:△P＜0.01

2.3 蜂蜜對急性酒精中毒大鼠肝、胃組織中的ADH 的影響

與模型組比較，蜂蜜中、高濃度組大鼠肝組織ADH活性極顯著升高(P＜0.01)，蜂蜜低濃度組大鼠胃組織ADH 活性顯著升高(P＜0.05)，蜂蜜中、高濃度組大鼠胃組織ADH 活性極顯著升高(P＜0.01)。與陽性藥物對照組相比，蜂蜜低濃度組大鼠肝組織ADH 活性顯著降低(P＜0.05)，蜂蜜中、高濃度組大鼠肝組織ADH活性降低，但無統(tǒng)計學差異(P ＞0.05)。蜂蜜各濃度組胃ADH 活性均極顯著減低(P＜0.01)(表2)。此結(jié)果提示，蜂蜜能升高急性酒精中毒大鼠肝組織和胃組織ADH活性水平，但升高的水平不及陽性藥物對照組。

表2 大鼠肝、胃組織ADH 活性(±s，n=6)

表2 大鼠肝、胃組織ADH 活性(±s，n=6)

注:與模型組相比，* P＜0.05，＊＊P＜0.01;與陽性藥物對照組相比，△P＜0.05，△△P＜0.01

2.4 蜂蜜對急性酒精中毒大鼠肝、胃組織中的ALDH的影響

與模型組比較，蜂蜜低濃度組肝組織ALDH 活性顯著升高(P＜0.05)，蜂蜜中、高濃度組肝組織和胃組織ALDH 活性極顯著升高(P＜0.01)。與陽性藥物對照組相比，蜂蜜各濃度組大鼠肝ALDH 活性降低，但無統(tǒng)計學差異(P ＞0.05)，蜂蜜低濃度組大鼠胃ALDH 活性極顯著降低(P＜0.01)，蜂蜜中、高濃度組大鼠胃ALDH活性升高，但無統(tǒng)計學差異(P ＞0.05) (表3)。此結(jié)果提示，蜂蜜能升高急性酒精中毒大鼠肝組織和胃組織ALDH 活性水平，但部分濃度的蜂蜜組升高水平不及陽性藥物對照組。

表3 大鼠肝、胃ALDH 活性(±s，n=6)

表3 大鼠肝、胃ALDH 活性(±s，n=6)

注:與模型組相比，* P＜0.05，＊＊P＜0.01;與陽性藥物對照組相比:△P＜0.01

3 討論

解酒藥物的核心是降低血液中乙醇及其代謝產(chǎn)物的濃度而減輕其對各器官的損傷。進入體內(nèi)的酒精大部分由ADH 氧化為乙醛，乙醛由ALDH 轉(zhuǎn)化為乙酸，再經(jīng)三羧酸循環(huán)，最后氧化成二氧化碳和水排出體外［6］。ADH 和ALDH 主要分布在肝臟和胃中，是酒精代謝的關(guān)鍵酶［7，8］。本研究結(jié)果表明，蜂蜜可以通過提高肝組織和胃組織中ADH 和ALDH 活性從而降低急性酒精中毒大鼠血清乙醇濃度，具有較好的解酒作用。乙醛是導致醉酒不適以及肝損傷的主要物質(zhì)［9］，肝臟中ALDH 的活性升高直接導致乙醛在肝臟中的量減少，說明蜂蜜具有潛在的護肝功效，可作為解酒護肝產(chǎn)品的原材料進一步研究。

蜂蜜成分復雜，含有碳水化合物、蛋白質(zhì)、礦物質(zhì)、維生素、有機酸、黃酮、酚酸、酶等200 多種化學物質(zhì)［10］，具有抑菌、抗氧化和抗炎等活性，對治療創(chuàng)傷、燒傷、胃潰瘍等疾病具有一定的療效［11，12］。眾多研究發(fā)現(xiàn)，蜂蜜中的糖類、黃酮類和酚酸類［13-18］化學物質(zhì)是其主要起作用的生物活性成分。目前已知我國傳統(tǒng)解酒草藥葛根和葛花中的主要解酒有效成分為黃酮類物質(zhì)［19，20］，但尚不知道蜂蜜中的何種有效生物活性成分導致這種解酒作用。因此，蜂蜜中的有效解酒成分需要進一步研究。

4 結(jié)論

本文通過構(gòu)建急性酒精中毒SD 大鼠模型，探討了蜂蜜的解酒作用及其可能的作用機制，結(jié)果表明，蜂蜜可通過提高肝組織和胃組織中ADH 和ALDH 活性從而降低急性酒精中毒大鼠血清乙醇濃度，有較好的解酒作用。

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