胡 蕾，戴 青，劉 芳，劉松青#（.第三軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部，重慶 400038；2.重慶市第三人民醫(yī)院藥學(xué)部，重慶 40004）

硫酸嗎啡口腔崩解片（Morphine sulfate orally disintegrating tablets，以下簡稱硫酸嗎啡口崩片）具有服用方便、起效時(shí)間快、生物利用度高、鎮(zhèn)痛效用強(qiáng)的特點(diǎn)，特別適用于無水條件下的鎮(zhèn)痛治療和吞水即嘔吐的癌癥化療患者的治療，也可有效地被運(yùn)用于戰(zhàn)傷救治[1-2]。已有研究討論了嗎啡口崩片的制備工藝及處方，本試驗(yàn)在其基礎(chǔ)上進(jìn)一步考察所選處方的質(zhì)量及穩(wěn)定性[3]。參考2010年版《中國藥典》（二部）硫酸嗎啡緩釋片[4]項(xiàng)下要求，以高效液相色譜（HPLC）法測定口崩片中硫酸嗎啡的含量，且通過影響因素試驗(yàn)、加速試驗(yàn)及長期試驗(yàn)評(píng)價(jià)該制劑的穩(wěn)定性，初步確定該制劑貯藏條件及有效期。

1 材料

1.1 儀器

BP211D型電子天平（德國Sartorius公司）；3531型離心機(jī)（美國Abbott公司）；Waters2690液相色譜系統(tǒng)、2487雙波長紫外檢測器（美國Waters 公司）；XMTD-7007 型藥品穩(wěn)定性試驗(yàn)箱（重慶市永生實(shí)驗(yàn)儀器廠）。

1.2 藥品與試劑

硫酸嗎啡口崩片（第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院自制，批號(hào)：100401、100402、100403，片質(zhì)量：60 mg，含硫酸嗎啡：每片10 mg）；硫酸嗎啡對(duì)照品（中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)：171238-200907，純度：99.9%）；庚烷磺酸鈉、甲醇均為色譜純，冰醋酸、氫醌均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 含量測定HPLC方法學(xué)的建立與考察

2.1.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)[4]色譜柱：Diamosil C18（2）（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-庚烷磺酸鈉醋酸溶液（取庚烷磺酸鈉2.02 g，加水適量溶解，加冰醋酸5 ml，加水稀釋至1 000 ml，搖勻，50 ∶50，V/V），流速：0.8 ml/min；柱溫：30 ℃；檢測波長：233 nm；進(jìn)樣體積：10 μl。理論板數(shù)按硫酸嗎啡峰計(jì)不低于1 000。

2.1.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取對(duì)照品適量（硫酸嗎啡10.0 mg），加氫醌溶液（取氫醌30 mg，加流動(dòng)相1 000 ml溶解）10 ml溶解成1 000 μg/ml；精密量取4 ml置于50 ml量瓶中，再以氫醌溶液稀釋成80 μg/ml的母液，待用。

2.1.3 供試品溶液的制備 取自制硫酸嗎啡口崩片樣品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（60 mg，相當(dāng)于硫酸嗎啡10 mg），置于25 ml量瓶中，加氫醌溶液適量，超聲處理使硫酸嗎啡溶解，用氫醌稀釋至刻度，搖勻，濾過；精密量取續(xù)濾液1 ml，置于25 ml量瓶中，加氫醌溶液稀釋至刻度，搖勻成16 μg/ml溶液，即得。

2.1.4 方法專屬性試驗(yàn) 取相同處方組成但缺主藥成分的空白口崩片樣品，按“2.1.3”項(xiàng)下方法制得硫酸嗎啡陰性對(duì)照液，考察輔料對(duì)主藥的測定是否存在干擾。陰性對(duì)照、對(duì)照品和供試品溶液（批號(hào)：100401）的色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖A.陰性對(duì)照；B.對(duì)照品；C.供試品；1.溶劑；2.嗎啡Fig 1 HPLC chromatogramsA.negative control；B.control；C.sample；1.solvent；2.morphine

由圖1 可見，在此色譜條件下，硫酸嗎啡與其他峰分離較好，且峰形良好，保留時(shí)間適中，輔料對(duì)其測定無干擾。

2.1.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 分別精密吸取硫酸嗎啡對(duì)照品母液（80 μg/ml）1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 ml至10 ml量瓶中，以氫醌溶液定容成8、12、16、20、24 μg/ml的系列質(zhì)量濃度溶液，搖勻，分別精密量取10 μl注入色譜儀，記錄色譜圖，測定峰面積。將峰面積（y）與質(zhì)量濃度（x）作線性回歸，得硫酸嗎啡的線性回歸方程：y＝9.54×103x+1.37×103（r＝0.999 9）。結(jié)果表明，硫酸嗎啡檢測質(zhì)量濃度線性范圍為8～24 μg/ml。

2.1.6 精密度考察 按“2.1.5”項(xiàng)下方法，精密制備高、中、低3種質(zhì)量濃度（8、16、24 μg/ml）硫酸嗎啡對(duì)照品溶液各5份，進(jìn)樣測定，計(jì)算日內(nèi)精密度RSD 分別為0.38%、0.34%、0.42%（n＝5）；按上述方法連續(xù)5 d 分別進(jìn)樣測定，計(jì)算日間精密度RSD分別為0.89%、0.69%、0.31%（n＝5）。

2.1.7 加樣回收率考察 取硫酸嗎啡口崩片樣品（批號(hào)：100401）20 片，研細(xì)，精密稱取適量（60 mg，相當(dāng)于硫酸嗎啡10 mg），置于25 ml量瓶中，加氫醌溶液適量，超聲處理使硫酸嗎啡溶解，用氫醌稀釋至刻度（80 μg/ml）；分別精密量取上述供試品溶液（80 μg/ml）0.5 ml 15 份置于10 ml 量瓶中，分為3組，分別加入硫酸嗎啡對(duì)照品溶液（80 μg/ml）0.6、1.5、2.4 ml，分別用氫醌溶液稀釋至刻度，定容成質(zhì)量濃度為8.8、16、23.2 μg/ml的3種溶液，搖勻，離心，取上清液進(jìn)樣10 μl，測定硫酸嗎啡含量，計(jì)算回收率。結(jié)果，平均回收率為98.36%～100.80%，表明該方法回收率較好，能滿足含量測定的要求，詳見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝3）Tab 1 Results of recovery test（n＝3）

2.1.8 溶液穩(wěn)定性考察（1）樣品穩(wěn)定性試驗(yàn)：按照“2.1.3”項(xiàng)下方法進(jìn)行樣品處理后，分別考察其在儀器樣品室10 ℃條件下0、6、12、24 h 的穩(wěn)定性，及在常溫下0、1、2、4 h 的穩(wěn)定性。結(jié)果在兩種條件下，測得含量的RSD 分別為0.82%和0.13%（n＝4），表明樣品的穩(wěn)定性良好。（2）對(duì)照品穩(wěn)定性：取80 μg/ml對(duì)照品母液置于－20 ℃下考察其穩(wěn)定性。分別于0、1、3、6 d時(shí)取2 ml，置于10 ml量瓶中用氫醌溶液稀釋成16 μg/ml，測定質(zhì)量濃度，計(jì)算含量的RSD為0.88%（n＝4），表明對(duì)照品溶液在－20 ℃條件下6 d內(nèi)的穩(wěn)定性良好。

2.1.9 樣品含量測定 分別取3 個(gè)批號(hào)的樣品各20 片研細(xì)，分別按“2.1.3”項(xiàng)下的方法制得供試品溶液，每批各3份，搖勻，進(jìn)樣，測定樣品中的硫酸嗎啡含量，結(jié)果分別為（102.40±0.51）%、（102.26±0.59）%、（101.13±2.60）%，RSD為0.68%，表明其含量符合口崩片的制劑標(biāo)準(zhǔn)。

2.2 硫酸嗎啡口崩片的穩(wěn)定性研究

根據(jù)2010年版《中國藥典》對(duì)制劑穩(wěn)定性考察要求[4]，通過影響因素試驗(yàn)、加速試驗(yàn)及長期試驗(yàn)考察硫酸嗎啡口崩片的穩(wěn)定性，確定其貯存條件及有效期。

有關(guān)物質(zhì)檢測方法：參考硫酸嗎啡緩釋片標(biāo)準(zhǔn)中相關(guān)方法[4]，取本品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取細(xì)粉適量（約相當(dāng)于硫酸嗎啡20 mg），加氫醌溶液（取氫醌30 mg，加流動(dòng)相1 000 ml溶解）10 ml，超聲處理，使硫酸嗎啡溶解，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液（2 000 μg/ml）；精密量取適量，加氫醌溶液溶解并定量稀釋制成每1 ml中約40 μg的溶液，作為對(duì)照溶液（40 μg/ml）。精密量取供試品溶液和對(duì)照品溶液各10 μl，分別注入色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的4倍。供試品溶液色譜圖中如有雜質(zhì)峰，各雜質(zhì)峰面積之和不得大于對(duì)照溶液主峰面積（2.0%）。有關(guān)物質(zhì)（%）＝各雜質(zhì)峰面積之和/對(duì)照溶液主峰面積×100%。

崩解時(shí)間測定方法：在5 ml玻璃小管中預(yù)先盛有37 ℃、2 ml蒸餾水，任取片劑1片置于小玻璃管中，即刻計(jì)時(shí)，靜態(tài)條件下觀察片劑崩解情況。以完全崩解且混懸介質(zhì)全部通過710 μm篩網(wǎng)為準(zhǔn)，記錄崩解時(shí)間[3]。

2.2.1 影響因素試驗(yàn) 取批號(hào)為100402的樣品，除去外包裝，分別取20 片樣品置于2 種高濕條件下[25 ℃、相對(duì)濕度（RH）92.5%，25 ℃、RH 75%]放置10 d。于第5 天、第10 天取樣測定，并與0 d質(zhì)量比較，結(jié)果見表2。

表2 吸濕增質(zhì)量結(jié)果Tab 2 Results of hygroscopic growth

由表2可知，高濕（25 ℃、RH 92.5%）條件下樣品的吸濕增質(zhì)量率大于5%，因此選擇高濕（25 ℃、RH 75%）條件下考察吸濕增質(zhì)量率。

取批號(hào)為100402 的樣品，除去外包裝，分別取20 片樣品置于強(qiáng)光（4 500 lx）、高溫（60 ℃）、高濕（25 ℃、RH 75%）條件下，放置10 d。于第5天、第10天取樣測定，并與0 d質(zhì)量比較，結(jié)果見表3。

表3 影響因素試驗(yàn)結(jié)果Tab 3 Results of influential factors test

由表3可知，本品3種試驗(yàn)條件下放置10 d，外觀、含量、有關(guān)物質(zhì)各檢查項(xiàng)均無明顯變化，表明本品對(duì)強(qiáng)光、高溫較穩(wěn)定；另，吸濕增質(zhì)量研究表明本品有一定吸濕性，但吸濕增質(zhì)量率未超過規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)（5%）。因此，模擬的上市包裝選擇鋁塑包裝，并于陰涼處密閉保存以維持產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定。

2.2.2 加速試驗(yàn) 3 批樣品模擬上市包裝，取適量，在40 ℃、RH75%條件下放置6個(gè)月。于1、2、3、6月分別取樣測定，并與0月數(shù)據(jù)比較。結(jié)果表明各項(xiàng)檢測指標(biāo)未見明顯變化，詳見表4。

表4 加速試驗(yàn)結(jié)果Tab 4 Results of accelerated rest

2.2.3 長期試驗(yàn) 3 批樣品模擬上市包裝，取適量，在25 ℃、RH60%條件下放置，于3、6、9、12、18、24 個(gè)月分別取樣測定，并與0 月數(shù)據(jù)比較。結(jié)果表明，各項(xiàng)檢測指標(biāo)結(jié)果基本穩(wěn)定，吸濕增質(zhì)量率未超過規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)（5%）；體外崩解時(shí)限檢查結(jié)果表明樣品在貯存的過程中崩解時(shí)限無明顯變化趨勢，詳見表5。因此，長期穩(wěn)定性考察結(jié)果表明本口崩片有效期可定為2年。

3 討論

表5 長期試驗(yàn)結(jié)果Tab 5 Results of long-term test

本研究參照2010年版《中國藥典》硫酸嗎啡緩釋片項(xiàng)下方法，以HPLC法測定硫酸嗎啡口崩片中硫酸嗎啡的含量。根據(jù)方法專屬性試驗(yàn)結(jié)果表明，口崩片中的空白輔料不影響主藥硫酸嗎啡的測定，故不需改變方法學(xué)中的色譜條件即可準(zhǔn)確測定硫酸嗎啡含量。硫酸嗎啡具還原性，在光照條件下能被空氣氧化，可生成偽嗎啡和N-氧化嗎啡，而其水溶液在中性或堿性條件下易被氧化[5]，故使用HPLC法測定硫酸嗎啡含量時(shí)，流動(dòng)相中加入了冰醋酸調(diào)節(jié)pH，且加入具有較強(qiáng)還原性質(zhì)的氫醌（鄰苯二醌）作為抗氧化劑，使檢測時(shí)樣品性質(zhì)保持穩(wěn)定[6-7]。

本品為口崩片，由于其制劑工藝的特點(diǎn)，所用輔料具有較強(qiáng)的吸濕性，因此需密封保存[8]。本文模擬上市包裝選擇泡罩包裝（又稱水泡眼包裝）作為硫酸嗎啡口崩片直接接觸藥品的包裝材料。所用材料主要為藥用鋁箔及塑料硬片（PTP），泡罩包裝外加防潮袋，符合原國家藥品監(jiān)督管理局《藥品包裝用材料、容器管理辦法（暫行）》有關(guān)各項(xiàng)規(guī)定[9]。參考《中國藥典》穩(wěn)定性考察項(xiàng)目，根據(jù)影響因素試驗(yàn)、加速試驗(yàn)及長期試驗(yàn)（24 個(gè)月）結(jié)果，各項(xiàng)指標(biāo)均符合規(guī)定，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，產(chǎn)品有效期確定為2年。

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