楊曉琴

(湖北省來鳳縣婦幼保健院, 湖北 來鳳, 445700)

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宮頸病變中增殖細(xì)胞核抗原、Ki-67抗原表達(dá)與HPV感染的相關(guān)性

楊曉琴

(湖北省來鳳縣婦幼保健院, 湖北 來鳳, 445700)

摘要:目的探討宮頸病變中增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)、Ki-67的表達(dá)及其與HPV感染的相關(guān)性。方法回顧性分析90例病變宮頸標(biāo)本，比較不同宮頸病變組織中的PCNA、Ki-67免疫組化結(jié)果，并分析其與HPV結(jié)果的關(guān)系。結(jié)果PCNA、Ki-67在CIN、浸潤(rùn)性鱗癌中的表達(dá)率均高于慢性宮頸炎中(P<0.05)，而PCNA、Ki-67在CIN與浸潤(rùn)性鱗癌中的表達(dá)率無顯著差異(P>0.05); PCNA與Ki-67表達(dá)強(qiáng)度呈正相關(guān)(r=0.719，P<0.05); PCNA、Ki-67表達(dá)強(qiáng)度與HPV感染呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.599、0.521，P<0.05)。結(jié)論Ki-67和PCNA的表達(dá)強(qiáng)度均與宮頸疾病嚴(yán)重程度呈正相關(guān)。

關(guān)鍵詞:宮頸病變; 增殖細(xì)胞核抗原; Ki-67; HPV感染; 相關(guān)性分析

宮頸病變作為一類在婦產(chǎn)科臨床上比較常見的婦科疾病，嚴(yán)重威脅著婦女的身體健康。宮頸病變中的宮頸癌，其發(fā)生與發(fā)展與長(zhǎng)時(shí)間、連續(xù)性的宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)以及HPV感染存在緊密的聯(lián)系，這一觀點(diǎn)已經(jīng)得到了廣泛的認(rèn)同[1-2]。而增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)可以對(duì)細(xì)胞增殖的速度和細(xì)胞內(nèi)DNA的合成狀況進(jìn)行有效評(píng)價(jià)，該抗原生成的場(chǎng)所是在細(xì)胞核內(nèi)，其相對(duì)分子質(zhì)量為29kDa[3]。同時(shí)，Ki-67抗原也可以對(duì)細(xì)胞的增殖活性、腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)以及細(xì)胞周期等生物學(xué)行為進(jìn)行評(píng)價(jià)，是目前使用最為廣泛的增殖細(xì)胞標(biāo)記之一[4]。本研究探究PCNA、Ki-67的表達(dá)與宮頸病變及HPV感染之間的相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)告如下。

1資料與方法

經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，回顧性分析2011年6月—2014年6月在湖北省來鳳縣人民醫(yī)院婦產(chǎn)科行手術(shù)治療切除的90例病變宮頸標(biāo)本，年齡23～67歲，平均年齡為(51.2±5.1)歲，術(shù)后均經(jīng)病理切片證實(shí)存在宮頸病變；90例病變宮頸標(biāo)本中，包括21例慢性宮頸炎(23.33%)、45例CIN(50.00%)、24例子宮頸浸潤(rùn)性鱗癌(26.67%); 其中21例慢性宮頸炎組織的來源分別為子宮肌瘤、子宮腺肌瘤以及子宮脫垂行全子宮切除術(shù)的患者。上述入組患者均經(jīng)本研究組成員告知本研究的背景、方法及目的后，同意納入本研究，并簽署知情同意書。

術(shù)中選取無壞死、典型的病變區(qū)域，將組織切取后，立刻使用PBS液進(jìn)行漂洗至血液等雜志完全被漂洗干凈，立即送本院病理科，將組織的HPV-DNA提取出來，用10%的中性福爾馬林將余下的組織進(jìn)行固定，并用石蠟包埋后進(jìn)行連續(xù)切片，切片的層厚為5 μm，進(jìn)行免疫組化檢測(cè)與病理診斷。

HPV檢測(cè)試劑盒(上海星耀醫(yī)學(xué)科技發(fā)展有限公司)；Ki-67兔抗人單克隆抗體(上海滬峰科技發(fā)展有限公司); PCNA鼠抗人單克隆抗體(上海新肽生物科技有限公司); DAB顯色試劑盒(北京索萊寶科技有限公司)。

將本院病理科做好的石蠟切片進(jìn)行常規(guī)HE染色，并運(yùn)用SP法進(jìn)行Ki-67和PCNA免疫組化染色，嚴(yán)格依據(jù)試劑盒的說明書進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的操作，分別使用PBS與宮頸癌組織作為陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照。標(biāo)本HPV的檢測(cè)采用導(dǎo)流雜交法，嚴(yán)格依據(jù)HPV檢測(cè)試劑盒的說明操作，該試劑盒可以對(duì)5種低危HPV亞型、13種中高危HPV亞型、3種中國(guó)人常見的HPV亞型進(jìn)行檢測(cè)。

運(yùn)用半定量方法對(duì)每個(gè)切片獨(dú)立的3個(gè)的視野進(jìn)行觀察，以分析免疫組化結(jié)果[5]。對(duì)每一個(gè)視野中的1 000個(gè)細(xì)胞進(jìn)行連續(xù)觀察，分別取觀察到的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量的平均值，并計(jì)算其百分率以進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。細(xì)胞核中有棕黃色的顆粒出現(xiàn)則表示PCNA和Ki-67表達(dá)陽(yáng)性，可以使用增殖指數(shù)(PI)來反映陽(yáng)性率的大小，PI就是陽(yáng)性細(xì)胞占據(jù)細(xì)胞總數(shù)的比例，可以劃分為四個(gè)不同的等級(jí)，PI在0%～10%、10%～25%、25%～50%、50%以上可以依次計(jì)為(-)、(+)、(2+)、(3+)，其中(2+)、(3+)屬于強(qiáng)陽(yáng)性。

2結(jié)果

2.1　不同宮頸病變中PCNA的表達(dá)比較

由表1可知，PCNA在慢性宮頸炎中的陽(yáng)性表達(dá)率僅為52.83%，而在CIN中的陽(yáng)性表達(dá)率為90.00%、浸潤(rùn)性鱗癌中的陽(yáng)性表達(dá)率為100.00%。統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，PCNA在CIN、浸潤(rùn)性鱗癌中的表達(dá)率均高于慢性宮頸炎中(P<0.05); 而PCNA在CIN與浸潤(rùn)性鱗癌中的表達(dá)率相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表1　不同宮頸病變中PCNA的表達(dá)

與慢性宮頸炎比較，*P<0.05。

2.2　不同宮頸病變中Ki-67的表達(dá)比較

由表2可知，Ki-67在慢性宮頸炎中的陽(yáng)性表達(dá)率僅為38.09%，而在CIN中的陽(yáng)性表達(dá)率為84.44%、浸潤(rùn)性鱗癌中的陽(yáng)性表達(dá)率為100.00%。統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，PCNA在CIN、浸潤(rùn)性鱗癌中的表達(dá)率均高于慢性宮頸炎中(P<0.05); 而Ki-67在CIN與浸潤(rùn)性鱗癌中的表達(dá)率相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表2　不同宮頸病變中Ki-67的表達(dá)比較

與慢性宮頸炎比較，*P<0.05。

2.3　PCNA和Ki-67的相關(guān)性

經(jīng)Spearman等級(jí)相關(guān)分析顯示, PCNA與Ki-67表達(dá)強(qiáng)度呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.719，P<0.05)。

2.4　PCNA的表達(dá)和HPV感染的關(guān)系

在90例患者中，HPV感染陽(yáng)性54例、陰性36例，經(jīng)Spearman等級(jí)相關(guān)分析，PCNA表達(dá)強(qiáng)度與HPV感染呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.599，P<0.05)。PCNA表達(dá)與HPV感染關(guān)系比較見表3。

表3　PCNA表達(dá)與HPV感染之間關(guān)系

2.5　Ki-67的表達(dá)和HPV感染的關(guān)系

經(jīng)Spearman等級(jí)相關(guān)分析, Ki-67表達(dá)強(qiáng)度與HPV感染呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.521,P<0.05)。見表4。

3討論

宮頸病變是一系列宮頸疾病的總稱，是女性宮頸常發(fā)的病理性變化，廣義上包括所有宮頸區(qū)域內(nèi)定的疾病，狹義上是指和宮頸癌的發(fā)生具有密切關(guān)系的疾病，比如宮頸癌前病變、宮頸癌、HPV亞臨床感染[6]?，F(xiàn)如今許多學(xué)者[7-8]普遍認(rèn)為HPV感染和宮頸癌的發(fā)生與發(fā)展具有密切的關(guān)系，但是并不是所有HPV感染均能誘發(fā)宮頸癌，長(zhǎng)時(shí)間、連續(xù)性的HPV感染才會(huì)有發(fā)展為宮頸癌的可能性。有研究資料[9]表明，單純一過性的HPV感染自然消退的平均時(shí)間為8個(gè)月，并不能夠誘發(fā)宮頸上皮癌變的發(fā)生，并且一過性HPV感染占據(jù)了所有HPV感染患者總數(shù)的4/5左右。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)并確定的HPV亞型約有110種，可以誘發(fā)生殖道感染的亞型有35種，眾多HPV亞型可以分為高危型和低危型兩類，其主要是依據(jù)和宮頸癌之間的關(guān)系進(jìn)行分類。據(jù)WHO[10]報(bào)道，HPV感染所誘發(fā)的宮頸癌占據(jù)宮頸癌患者總數(shù)的95%以上。此外，還有研究[11]表明，宮頸癌患者伴有HPV感染的比例在99%以上，只是感染的嚴(yán)重程度有差異。

CIN是宮頸癌前病變，異形增殖細(xì)胞浸潤(rùn)宮頸黏膜上皮的下1/3區(qū)域內(nèi)為CINⅠ，異形增殖細(xì)胞浸潤(rùn)宮頸黏膜上皮的1/2到2/3之間則為CINⅡ，異形增殖細(xì)胞浸潤(rùn)宮頸黏膜上皮的2/3以上者則為CINⅢ，這種CIN分級(jí)方式依據(jù)了細(xì)胞核分裂像的數(shù)量和黏膜上皮垂直層次上的病理性核分裂的分布情況[12]，這種分級(jí)方式可以反映異形細(xì)胞對(duì)宮頸黏膜上皮不同層次的侵襲程度，但具有明顯的缺陷性，并不能對(duì)增殖細(xì)胞的性質(zhì)進(jìn)行評(píng)價(jià)，在不同的黏膜上皮層次上均可見到細(xì)胞多形性增加、細(xì)胞的質(zhì)量降低、細(xì)胞核的體積增大。因而可以認(rèn)為增殖細(xì)胞在黏膜上皮不同層次的浸潤(rùn)有可能只是由增殖細(xì)胞的數(shù)量變化引起的。如若不能正確的對(duì)此進(jìn)行診斷，可能會(huì)引起患者過度的焦慮，并且也有可能使治療方案的制定不合理[13]。因此，在臨床上尋求一種可以準(zhǔn)確鑒別CIN病變和良性反應(yīng)性細(xì)胞增生的方法，特別是尋找到檢測(cè)高度CIN病變的標(biāo)記物，可以很大程度上降低診斷錯(cuò)誤和漏診的發(fā)生率。

本次研究對(duì)PCNA、Ki-67的表達(dá)與宮頸病變及HPV感染之間的關(guān)系進(jìn)行分析，研究的結(jié)果顯示, PCNA抗原在宮頸癌組織、慢性宮頸炎和CIN中均為陽(yáng)性，但是在不同疾病中的表達(dá)率不相同，子宮浸潤(rùn)性鱗癌中PCNA抗原的陽(yáng)性表達(dá)率高達(dá)100.00%，慢性宮頸炎中其陽(yáng)性表達(dá)率僅為52.83%, CIN中其陽(yáng)性表達(dá)率為90.00%。經(jīng)統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，其在慢性宮頸炎中的陽(yáng)性表達(dá)率均低于在子宮浸潤(rùn)性鱗癌和CIN中的陽(yáng)性表達(dá)率(P<0.05)。通過對(duì)HPV感染和PCNA抗原之間的關(guān)系分析，PCNA抗原的表達(dá)水平和HPV感染呈現(xiàn)出正相關(guān)性(r=0.599,P<0.05), 即PCNA抗原的表達(dá)水平升高，HPV感染的發(fā)生率也隨之升高，這與以往學(xué)者的觀點(diǎn)一致[14]。本次研究對(duì)PCNA在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ之間的陽(yáng)性表達(dá)率進(jìn)行了比較分析，結(jié)果顯示各組間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，這和徐韶杰等[15]的觀點(diǎn)一致,這也說明了PCNA對(duì)CIN的分級(jí)診斷不具有良好的特異性，不能很好地區(qū)別CIN的分級(jí)。本研究結(jié)果表明，PCNA預(yù)測(cè)CIN Ⅲ的敏感度很高，可以高達(dá)100%, 因此可以作為一種腫瘤標(biāo)志物并與其他細(xì)胞增殖指標(biāo)一起使用，用于篩查宮頸癌。

本研究結(jié)果顯示, Ki-67在不同宮頸病變的陽(yáng)性表達(dá)率也不相同，子宮浸潤(rùn)性鱗癌中Ki-67抗原的陽(yáng)性表達(dá)率為100.00%, 慢性宮頸炎中其陽(yáng)性表達(dá)率僅為38.09%, CIN中其陽(yáng)性表達(dá)率為84.44%, 其在慢性宮頸炎中的陽(yáng)性表達(dá)率低于在子宮浸潤(rùn)性鱗癌和CIN中的陽(yáng)性表達(dá)率(P<0.05); 進(jìn)一步對(duì)HPV感染和Ki-67之間的關(guān)系分析，顯示Ki-67的表達(dá)水平和HPV感染呈現(xiàn)出正相關(guān)性(r=0.521,P<0.05), 這表明Ki-67可以輔助診斷HPV感染和宮頸癌。本次研究還對(duì)Ki-67和PCNA之間的相關(guān)性進(jìn)行了分析，結(jié)果顯示二者呈現(xiàn)出正相關(guān)性。此外，還有學(xué)者[16]采用HCⅡ法對(duì)CIN石蠟標(biāo)本的HR-HPV DNA進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果顯示Ki-67的表達(dá)水平和CIN的級(jí)別具有明顯的相關(guān)性，并且不同的Ki-67的陽(yáng)性表達(dá)水平和HR-HPV負(fù)荷之間的差異性很明顯。

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Correlation between expressions of proliferating cell nuclear antigen, Ki-67 and HPV infection in cervical lesions

YANG Xiaoqin

(MaternalandChildHealthCareHospitalofLaifengCounty,Laifeng,Hubei, 445700)

ABSTRACT:ObjectiveTo explore the correlation between expressions of proliferating cell nuclear antigen (PCNA), Ki-67 and HPV infection in cervical lesions. MethodsA total of 90 cases of cervical lesions were analyzed retrospectively. Immunohistochemistry results of PCNA and Ki-67 in different cervical lesions were compared, and their correlations with HPV were analyzed.ResultsThe expression rates of PCNA and Ki-67 in CIN and invasive squamous cell carcinoma were significantly higher than those in chronic cervicitis (P<0.05), but there were no significant differences in expression rates of PCNA and Ki-67 between CIN and invasive squamous cell carcinoma (P>0.05). There was a positive correlation between expressions of PCNA and invasive squamous cell carcinoma (r=0.719,P<0.05). There was a positive correlation between the expressions of PCNA, Ki-67 and HPV infection (r=0.599, 0.521,P<0.05).ConclusionExpressions of Ki-67 and PCNA were positively correlated with severity of cervical disease.

KEYWORDS:cervical lesions; proliferating cell nuclear antigen; Ki-67; HPV infection; correlation analysis

收稿日期:2015-04-06

中圖分類號(hào):R 711.74

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

文章編號(hào):1672-2353(2015)17-057-04

DOI:10.7619/jcmp.201517018