周　霞, 張　浩, 賀恒鵬, 趙　娜

(中國醫(yī)科大學附屬第四醫(yī)院 檢驗科, 遼寧 沈陽, 110032)

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缺血性腦血管病患者血清巨噬細胞移動抑制因子與腫瘤壞死因子α水平的變化

周霞, 張浩, 賀恒鵬, 趙娜

(中國醫(yī)科大學附屬第四醫(yī)院 檢驗科, 遼寧 沈陽, 110032)

摘要:目的探討缺血性腦血管病患者血清MIF與TNF-α水平的變化。方法檢測并比較140例缺血性腦血管病患者和20例健康人群的血清MIF、TNF-α的含量。結果缺血性腦血管病組患者血清MIF、TNF-α水平顯著高于對照組(P<0.01)。急性腦梗死患者中，重度組血清MIF、TNF-α水平最高，輕度組最低，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。血清MIF、TNF-α水平呈正相關性，并與缺血性腦血管病患者病情密切相關。ROC曲線分析顯示，血清MIF和TNF-α水平對患者病情有提示意義。結論血清MIF、TNF-α的含量變化與缺血性腦血管病的發(fā)生、發(fā)展密切相關，檢測血清中MIF、TNF-α的含量對缺血性腦血管病的預防和診療有重要的臨床意義。

關鍵詞:缺血性腦血管病; 巨噬細胞移動抑制因子; 腫瘤壞死因子-α

缺血性腦血管病(ICVD)是由于局部腦組織血液循環(huán)障礙導致缺血、缺氧而發(fā)生的軟化壞死，具有發(fā)病率高、致殘率高、病死率高的特點，嚴重影響患者的身心健康和生活質量。缺血后腦神經元損傷死亡歸因于多種分子參與的炎癥反應。巨噬細胞移動抑制因子(MIF)是一種促炎因子，可抑制巨噬細胞的自由游走移動，吸引其在炎性反應局部的浸潤聚集，增強它的吞噬功能，還可誘導巨噬細胞分泌多種細胞因子。有研究[1]表明, MIF可能參與ICVD的免疫炎癥調節(jié)過程并發(fā)揮重要作用。腫瘤壞死因子-α(TNF-α)參與了腦缺血后血腦屏障的破壞和炎癥反應的啟動，當腦組織缺血缺氧時，TNF-α在顱內大量表達，通過多種途徑發(fā)揮重要的神經毒性作用。本研究結合患者臨床資料，分析血清MIF、TNF-α水平與病情程度之間的關系，并研究血清MIF與TNF-α水平之間的相關性，現報告如下。

1資料與方法

1.1　一般資料

收集中國醫(yī)大四院2013年1月—2014年7月診斷明確的ICVD住院患者140例,按腦血管病分類及臨床診斷標準分為: ① 急性腦梗死組(ACI組發(fā)病2周以內)88例,男62例,女26例,年齡(63.25±10.78)歲。符合全國第4屆腦血管病學術會議上修訂的臨床診斷標準[2]: 經CT或者磁共振成像(MRI)診斷確診; 未見任何影響神經系統(tǒng)評分的殘疾。按美國國立衛(wèi)生研究所卒中量表(AIHSS評分)，進行神經功能缺損程度評估88例患者:重度梗死31例(男19例，女12例)，中度梗死26例(男20例，女6例)，輕度梗死31例(男23例，女8例); ② 短暫性腦缺血發(fā)作組(TIA組)12例,男5例,女7例,年齡(61.5±12.08)歲。臨床有明確TIA體征,并且CT/MRI未見腦梗死證據; ③ 椎-基底動脈供血不足組40例,男17例,女23例,年齡(58.12±12.47)歲?；颊呓?周內間斷有明顯頭痛、頭昏、眩暈、耳鳴、惡心、嘔吐等癥狀,但沒有確切的可以診斷為TIA或腦梗死的證據和體征,取血時有明顯癥狀。同時，收集男女各10例健康體檢者作為對照組，年齡(59.9±10.08)歲。

1.2　方法

取所有對象于清晨空腹采集靜脈血3 mL，病例組為臨床治療前采集的標本，并且無溶血、黃疸及乳糜血(室溫下靜置20 min, 3 500 r/min, 5 min離心后分離血清置于-80 ℃冰箱保存)。TNF-α測定：用R&D公司的Human TNF-α試劑盒，按說明書操作，結果用AT-FAME全自動酶標儀檢測。MIF測定：用RayBio公司的Human MIF試劑盒，按說明書操作，結果用AT-FAME全自動酶標儀檢測。

1.3　統(tǒng)計學處理

用SPSS 21.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析。對于實驗數據首先用Kolmogorov-Smirnov方法作正態(tài)性檢驗和方差齊性檢驗，計量資料以均數±標準差表示。兩組間比較采用t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析,P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。應用Spearman相關系數判斷MIF和TNF-α之間的相關性,并分析其與疾病相關性。并應用ROC曲線分析血清MIF和TNF-α水平對患者病情的提示意義。設置檢驗水準α=0.05。

2結果

2.1　缺血性腦血管病患者血清MIF、TNF-α含量和各組間的比較

應用單因素方差分析結果顯示，缺血性腦血管病組與對照組之間血清MIF、TNF-α含量有顯著差異(P<0.05), 而且急性腦梗死組的輕度、中度、重度組之間，兩兩比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。見表1。

表1　缺血性腦血管病患者血清TNF-α與

與對照組比較，*P<0.05; 與急性腦梗死組比較，#P<0.05;

與輕度組比較，△△P<0.01; 與中度組比較，▲▲P<0.01。

2.2　Spearman相關分析

血清MIF與TNF-α水平成正相關(r=0.913,P=0.000); 血清MIF與缺血性腦血管病患者病情呈正相關(r=0.554,P=0.000); TNF-α水平與缺血性腦血管病患者病情明顯正相關(r=0.561,P=0.000)。

采用t檢驗對缺血性腦血管病患者的常規(guī)實驗室檢測指標與對照組進行簡單比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05), 見表2。同時應用ROC曲線分析將有差異的實驗室指標與MIF、 TNF-α水平進行分析, MIF(AUC: 0.895, 95%CI: 0.839～0.951), TNF-α(AUC: 0.869, 95%CI: 0.814～0.923), 糖化(AUC: 0.968, 95%CI: 0.939～0.996), 同型(AUC: 0.959, 95%CI: 0.927～0.990), 血小板(AUC: 0.220, 95%CI: 0.021～0.418), 空腹血糖(AUC: 0.755, 95%CI: 0.616～0.895), 高密(AUC: 0.297, 95%CI: 0.170～0.425)。

表2　缺血性腦血管病患者實驗室檢測指標與對照組比較

與對照組比較, *P<0.05。

3討論

在ICVD中[1], 過度的炎癥反應和內源性免疫反應會導致腦缺血、缺氧之后周圍白細胞進入腦實質，引起免疫反應，炎細胞激活、浸潤。而再灌注時，缺血神經元會釋放多種炎癥介質以及一系列毒性物質，引起血腦屏障和胞外基質受損、低灌注，而且缺血后炎癥能夠促使腦神經功能惡化，是使患者病情加重和預后不良的主要因素之一。本次實驗結果顯示,缺血性腦血管病組與對照組血清MIF含量有顯著差異(P<0.05), 急性腦梗死的輕度、中度、重度組之間，兩兩比較差異也有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。血清MIF與ICVD患者病情呈正相關。由此可見血清MIF含量與患者腦缺氧程度有密切關系。

MIF可由免疫細胞如單核/巨噬細胞、T細胞、B細胞，以及非免疫細胞如內皮細胞、上皮細胞、內分泌細胞、血管平滑肌細胞等合成并儲存與胞質中，甚至在下丘腦-垂體-腎上腺皮質軸中都有儲存，在受到信號刺激時快速釋放入血。有研究[3-4]表明，缺氧狀態(tài)下腦組織細胞的MIF的mRNA 表達上調，是腦組織缺氧的重要信號，并且缺氧促進MIF基因的轉錄，使血清中MIF含量升高。MIF 能抑制小膠質細胞活化及巨噬細胞浸潤，減小出血性損傷體積、減少組織水腫及減低神經損傷程度并保護腦神經細胞的功能。這與本次實驗結果相一致。Lue H等[5]發(fā)現在缺血狀態(tài)下, MIF作為可調節(jié)細胞間信號傳導的炎癥因子，可以通過下調心肌細胞下調JNK通路活性，進而下調bcl-2的表達，從而阻止心肌細胞凋亡，保護受損心肌。由此可見, ICVD患者血清MIF水平的升高可能與腦組織細胞的自身保護機制有關，但MIF具體機制需要進一步研究。

本研究結果表明，血清TNF-α含量在ICVD患者發(fā)病后即明顯增高，并與疾病嚴重程度密切相關，這與目前國外部分研究結果相同[6-8]。TNF-α可由單核巨噬細胞，內皮細胞等產生，是機體炎癥與免疫應答的最重要的炎癥介質之一，參與失血、凝血、炎癥及免疫防疫等過程。國內有研究[9-10]表明，血清TNF-α的濃度與腦梗死的面積呈正相關，這與本次結果相符。TNF-α在神經組織損傷病理過程中起重要作用，機制可能是其介導炎癥級聯反應、誘導細胞的凋亡、促進腦水腫、破壞血腦屏障等方式加重腦缺血性損傷，通過檢測血清TNF-α的含量，可在一定程度上反映腦水腫的嚴重程度，以利于判斷缺血性患者的預后，阻斷TNF-α的生成和表達對改善缺血性患者的預后可能具有潛在的臨床價值。

本研究結果顯示，血清MIF與TNF-α正相關，這與劉雙喜等[11]結果相同。血清MIF 可激活血管內皮細胞和血管平滑肌細胞表達豐富的致炎因子和細胞介質，如TNF-α、IL-1、IL-2、IL-6、IL-8、一氧化氮等多種制炎因子，而TNF-α高表達又可刺激白細胞表達組織因子、黏附分子、NO等并放大炎癥反應過程，加重腦組織損傷[12-13]。

ROC曲線下的面積( AUC)被認為是評估一個試驗診斷價值的最好的指標，當AUC<0.5時無診斷價值，AUC在0.5～0.7時有較低準確性，AUC在0.7～0.9時有一定準確性, AUC>0.9時有較高的準確性。本研究通過ROC 曲線對缺血性腦血管病患者的常規(guī)實驗室檢測指標[14]進行分析，結果表明MIF 和TNF-α對ICVD均有較高診斷效能, MIF略高于TNF-α, 同時糖化血紅蛋白、同型半胱氨酸、空腹血糖對缺血性腦血管病也有較高診斷效能。因此，在對ICVD進行臨床診療時可以結合MIF、TNF-α、糖化血紅蛋白、同型半胱氨酸、空腹血糖等實驗室指標，特別是對于CT/MRI未見明顯改變、沒有明顯神經功能損傷體征的疑難病例診斷。

ICVD患者血清MIF含量反映了腦組織的缺氧程度，MIF對組織缺氧后的TNF-α等炎癥因子的分泌升高起著重要的介導作用。MIF對腦組織神經有一定保護作用，但其促進TNF-α的分泌又增加了腦神經的損傷，因此，血清MIF、TNF-α在ICVD的致病機制還需進一步研究，進而擴大MIF的保護作用，阻斷TNF-α對腦神經的損傷作用，為ICVD的治療開辟新途徑。對高危人群血清MIF、TNF-α水平監(jiān)測對ICVD的早期診斷、早期干預治療、防止嚴重并發(fā)癥的發(fā)生具有臨床意義。

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Change of relationship between serum MIF、TNF-α and ischemic cerebrovascular disease

ZHOU Xia，ZHANG Hao，HE Hengpeng, ZHAO Na

(TheFourthAffiliatedHospitalofChinaMedicalUniversity,Shenyang,Liaoning, 110032)

ABSTRACT:ObjectiveTo explore the change of serum TNF-α and MIF levels in patients with ischemic cerebrovascular disease. MethodsLevels of TNF-α and MIF in 140 patients with ischemic cerebrovascular disease and 20 healthy people were detected and compared. ResultsSerum MIF, TNF-α levels of patients with ischemic cerebrovascular disease were significantly higher than those of the control group (P<0.01). In patients with acute cerebral infarction, the levels of MIF and TNF-α were the highest in severe group and the lowest in mild group, and there were significant differences among groups (P<0.05). There was a positive correlation between MIF and TNF-α, and were correlated with ischemic cerebrovascular disease severity. ROC curve analysis showed that serum levels of MIF and TNF-α were able to reflect the clinical severity of ischemic cerebrovascular disease. ConclusionThe variation in contents of serum MIF and TNF-α is closely related to the occurrence and development of ischemic cerebrovascular disease. The detection of serum MIF and TNF-α has the important clinical significance for prevention and treatment of ischemic cerebrovascular disease.

KEYWORDS:ischemic cerebrovascular disease; macrophage migration inhibitory factor; tumor necrosis factor-α

收稿日期:2015-01-09

中圖分類號:R 743

文獻標志碼:A

文章編號:1672-2353(2015)17-024-04

DOI:10.7619/jcmp.201517008