楊長俊 吳莉莉

甲狀腺微小乳頭狀癌冷凍切片診斷和免疫組化表達及意義

楊長俊 吳莉莉

目的探討結(jié)節(jié)性甲狀腺腫合并甲狀腺微小乳頭狀癌的冷凍切片診斷及半乳糖凝集素-3(Galectin-3)、間皮瘤相關(guān)抗體-1(HBME-1)、細胞角蛋白19(CK19)、CD56的表達及意義。方法對40例冷凍切片診斷為甲狀腺微小乳頭狀癌進行光鏡觀察并采用免疫組化EnVision法檢測Galectin-3、HBME-1、CK19、CD56的表達水平。結(jié)果40例均為甲狀腺微小乳頭狀癌, 光鏡下主要組織學(xué)特征為毛玻璃樣核、核溝、纖維性間質(zhì)、核內(nèi)包涵體及砂礫體。免疫組化Galectin-3、HBME-1 、CK19在甲狀腺微小乳頭狀癌中均呈陽性表達, 在結(jié)節(jié)性甲狀腺腫中呈陰性或個別弱陽性表達。CD56在甲狀腺微小乳頭狀癌6例呈輕度著色,34例呈陰性表達, 在周圍結(jié)節(jié)性甲狀腺腫組織均呈陽性表達。結(jié)論甲狀腺微小乳頭狀癌的診斷主要依據(jù)組織病理學(xué), Galectin-3、HBME-1、CK19及CD56的聯(lián)合檢測有助于提高甲狀腺微小乳頭狀癌的診斷準確率。

甲狀腺微小乳頭狀癌；冷凍切片；半乳糖凝集素-3；間皮瘤相關(guān)抗體-1；細胞角蛋白19；CD56；免疫組化

甲狀腺微小乳頭狀癌是指直徑≤1 cm的甲狀腺乳頭狀癌。由于腫瘤微小, 常與結(jié)節(jié)性甲狀腺腫并發(fā), 臨床表現(xiàn)與形態(tài)學(xué)有時并不典型, 如不仔細檢查往往造成臨床及病理的漏診, 特別是在冷凍切片檢查時。為了進一步認識該疾病、減少誤診, 收集信陽市中心醫(yī)院病理科2011～2013年冷凍切片檢查診斷甲狀腺微小乳頭狀癌40例, 并經(jīng)石蠟切片和免疫組化進一步證實, 總結(jié)其診斷及鑒別診斷要點, 分析Galectin-3、HBME-1 、CK19及CD56的表達水平及其在鑒別診斷中的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 信陽市中心醫(yī)院2011～2013年甲狀腺冰凍切片病理學(xué)檢查病例1195例, 診斷甲狀腺微小乳頭狀癌40例。其中男7例, 女33例, 男女之比1∶5。年齡23～70歲, 平均年齡45歲。

1.2 方法 組織標本均為手術(shù)切除后立即送檢的新鮮標本,按間隔0.2～0.5 cm切開, 肉眼觀察可疑病灶以最大面取材, 有鈣化取周圍軟組織。采用LEICA CM1950型恒冷式冷凍切片機, -22℃以下切片, 切片厚5 μm, HE染色。對冷凍切片后組織及剩余組織用4％中性甲醛固定, 石蠟包埋, 切片厚4 μm, HE染色。免疫組化染色用EnVision法, 抗體Galectin-3、HBME-1、CK19、CD56及試劑盒均購自DAKO公司。每種抗體均設(shè)陽性及陰性對照, 操作用Roche公司BenchMark XT全自動免疫組化機。

2 結(jié)果

2.1 組織病理學(xué)特征 甲狀腺微小乳頭狀癌腫塊大小0.2～1 cm,無包膜。切面灰白色, 部分呈放射狀和纖維瘢痕樣。組織學(xué)上在結(jié)節(jié)性甲狀腺腫組織中可見微小病灶,12例主要呈現(xiàn)乳頭狀結(jié)構(gòu), 核呈毛玻璃樣核, 可見核溝、核內(nèi)包涵體和纖維瘢痕。23例主要呈腺樣結(jié)構(gòu), 核呈毛玻璃樣核, 可見核溝、核內(nèi)包涵體和纖維瘢痕。5例主要呈乳頭狀或腺樣結(jié)構(gòu), 無明顯核的特征, 無纖維瘢痕形成。

2.2 免疫組化 在甲狀腺微小癌中36例Galectin-3呈中-重度陽性著色(見圖1),4例輕度著色, 著色部位位于胞質(zhì),陽性率100％；在結(jié)節(jié)性甲狀腺中全部陰性。33例HBME-1呈中-重度陽性著色(見圖2),7例輕度著色, 著色部位位于胞膜, 陽性率100％；在結(jié)節(jié)性甲狀腺腫中全部陰性。40例CK19呈中-重度陽性著色(見圖3), 著色部位位于胞膜及胞質(zhì), 陽性率100％；在結(jié)節(jié)性甲狀腺腫中7例呈輕度著色。甲狀腺微小乳頭狀癌中6例CD56呈輕度著色, 著色部位位于胞膜, 陽性率15％, 且著色主要位于腫瘤組織與正常甲狀腺組織交界處；在結(jié)節(jié)性甲狀腺腫中CD56全部著色, 陽性率100％。

圖1 甲狀腺微小乳頭狀癌中Galectin-3(+), EnVision法

圖2 甲狀腺微小乳頭狀癌中HBME-1(+), EnVision法

圖3 甲狀腺微小乳頭狀癌中CK19(+), EnVision法

3 討論

術(shù)中快速冷凍切片檢查的診斷結(jié)果直接影響臨床的手術(shù)方案, 對外科醫(yī)生來說越來越重要。但是由于冷凍切片自身的局限性, 與石蠟切片相比, 組織結(jié)構(gòu)欠清晰, 細胞形態(tài)變異大, 甚至?xí)霈F(xiàn)人工假象, 由于甲狀腺微小癌體積小, 冷凍切片診斷相對困難。為了提高甲狀腺微小癌冷凍切片診斷的準確率, 需要：①大體檢查要細心, 需按2～3 mm書頁狀切開, 對灰白結(jié)節(jié)、纖維瘢痕樣組織要全面取材。②必須掌握乳頭狀癌的診斷標準, 組織結(jié)構(gòu):a.呈浸潤性生長；b.間質(zhì)常硬化；c.多分枝細長乳頭;d.常有濾泡, 呈扁圓形, 此時乳頭結(jié)構(gòu)則分枝減少、濾泡含深染膠質(zhì)；e.出現(xiàn)砂粒體, 是乳頭狀癌特征性標志, 有時僅見砂粒體未見乳頭結(jié)構(gòu), 但多取材多切片時就會找到乳頭結(jié)構(gòu)。同時應(yīng)注意與鈣化的膠質(zhì)鑒別,砂粒體位于間質(zhì)中, 而鈣化膠質(zhì)位于腺腔內(nèi)。細胞形態(tài):a.形狀多樣；b.胞漿嗜酸或透明；c.鱗化常見；d.特征性核：密集、卵圓、毛玻璃狀、核溝、核內(nèi)假包涵體、細小核仁[1］。上述特點并不一定每例都同時具備, 但卻是診斷乳頭狀癌所必備。③進行石蠟切片的對比觀察以及免疫組化染色的進一步證實。

Galectin-3是一種結(jié)合β-半乳糖苷酶的外源性凝集素, 細胞膜表面的Galectin-3與同型細胞間的粘附有關(guān), Galectin-3水平的下調(diào)表示了各種腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移的活躍程度, 是甲狀腺微小乳頭狀癌診斷中的一個重要指標。Laco等[2］研究顯示22例甲狀腺微小乳頭狀癌胖有19例是Galectin-3表達陽性, 本研究結(jié)果40例甲狀腺微小乳頭狀癌中36例Galectin-3呈中-重度陽性著色,4例輕度著色, 著色部位位于胞質(zhì), 陽性率100％；在結(jié)節(jié)性甲狀腺腫中全部陰性, 與Laco等基本一致。HBME-1是間皮細胞微絨毛表面特異性標記物, 在腫瘤血管的形成、腫瘤的生長以及腫瘤的轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。國外一項研究表明HBME-1在甲狀腺乳頭狀癌中表達陽性率100％[3］。本研究結(jié)果40例甲狀腺微小乳頭狀癌中33例HBME-1呈中-重度陽性著色,7例輕度著色, 陽性率100％；在結(jié)節(jié)性甲狀腺腫中全部陰性。與文獻報道的結(jié)果一致。CK19是一種低分子量的角蛋白, 主要標記各種單層上皮。Laco等研究顯示22例甲狀腺微小乳頭狀癌中有13例CK19陽性, 陽性率59％。本研究結(jié)果40例甲狀腺微小乳頭狀癌中40例CK19呈中-重度陽性著色, 陽性率100％；在結(jié)節(jié)性甲狀腺腫中有7例呈輕度著色。CD56是一種神經(jīng)粘附分子, 正常表達于神經(jīng)元、星形細胞、雪旺細胞、肌管和自然殺傷細胞[4］, 可影響腫瘤細胞的遷移。國外研究結(jié)果表明, CD56在所有乳頭狀癌病例中均呈陰性表達, 在良性甲狀腺濾泡上皮持續(xù)性陽性表達[5］。本研究結(jié)果40例甲狀腺微小乳頭狀癌中6例CD56呈輕度著色,34例CD56呈陰性表達, 陽性率15％。

總之, 一些甲狀腺微小乳頭狀癌僅憑冷凍切片檢查診斷有一定困難。進行石蠟切片的對比觀察以及聯(lián)合4種抗體免疫組化染色對甲狀腺微小乳頭狀癌具有重要意義。

[1]紀小龍, 陳國璋.甲狀腺乳頭狀癌的一些診斷要點. 診斷病理學(xué)雜志,1994,1(1):45-46.

[2]Laco J, Ryska A, Cáp J, et al. Expression of galectin-3, cytokeratin-19, neural cell adhesion molecule and E-cadhedrin in certain variants of papillary thyroid carcinoma. Cesk Patol,2008,44(4):103-107.

[3]Ito Y, Yoshida H, Tomoda C, et al. HBME-1 expression in follicular tumor of the thyroid: an investigation of whether it can be used as a marker to diagnose follicular carcinoma. Anticancer Res,2005,25(1A):179-182.

[4]Cunningham BA, Hemperly JJ, Murray BA, et al. Neural cell adhesion molecule: structure, immunoglobulin-like domains, cell surface modulation, and alternative RNA splicing. Science,1987,236(4803):799-806.

[5]EI Demellawy D, Nasr AL, Babay S, et al. Diagnostic utility of CD56 immunohistochemistry in papillary carcinoma of the thyroid . Pathol Res Pract,2009,205(5):303-309.

Freezing microtome section diagnosis and immunohistochemical expression of papillary thyroid microcarcinoma and its significance

YANG Chang-jun, WU Li-li. Department of Pathology, Xinyang City Central Hospital, Xinyang464000, China

ObjectiveTo explore the freezing microtome section diagnosis of nodular goiter complicated with papillary thyroid microcarcinoma and the expression and significance of Galectin-3, human bone marrow endothelial cell-1 (HBME-1), cytokeratin19 (CK19) and CD56. Methods A total of40 diagnosed cases as papillary thyroid microcarcinoma by freezing microtome section were observed by light microscope, and the levels of Galectin-3, HBME-1, CK19 and CD56were detected by immunohistochemical EnVision method.ResultsAll the cases were papillary thyroid microcarcinoma. Under the light microscope, the main histopathologic features were ground glasslike nuclear, groove, fibrous stromal reactions, nuclear pseudoinclusion and psammoma bodies. The positive staining for Galectin-3, HBME-1 and CK19 was observed in nodular goiter microcarcinoma, but they were negative or mild expression in nodular goiter. There were6 cases with papillary thyroid microcarcinoma showing mild staining for CD56and34 cases revealed negative expression. In the nodular goiter, all cases showed positive straining.ConclusionDiagnosis of papillary thyroid microcarcinoma is mainly based on tissue pathology. The combined detection of Galectin-3, HBME-1, CK19 and CD56will improve the accuracy of diagnosing papillary thyroid microcarcinoma.

Papillary thyroid microcarcinoma; Freezing microtome section; Galectin-3; Human bone marrow endothelial cell-1; Cytokeratin19; CD56；Immunohistochemistry

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.02.003

2014-10-28］

464000 信陽市中心醫(yī)院病理科