張　婷

(安徽省淮北市食品藥品檢驗(yàn)中心，安徽 淮北　235000)

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治咳枇杷露的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

張婷

(安徽省淮北市食品藥品檢驗(yàn)中心，安徽 淮北235000)

摘要:目的對(duì)治咳枇杷露的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行研究，提高質(zhì)量控制水平。方法采用薄層色譜法對(duì)枇杷葉、薄荷腦、桔梗進(jìn)行鑒別，采用氣相色譜法測(cè)定薄荷腦的含量。結(jié)果枇杷葉、薄荷腦、桔梗的薄層色譜斑點(diǎn)清晰，分離度好，專(zhuān)屬性強(qiáng)，陰性無(wú)干擾；薄荷腦的線性范圍為0.400 8～2.405 0 μg(r=0.999 9), 平均加樣回收率為99.4%(n=6)，RSD=0.19%。結(jié)論優(yōu)化后的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)方法易行、準(zhǔn)確可靠, 可用于治咳枇杷露的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞:治咳枇杷露；薄層色譜法；氣相色譜法

治咳枇杷露收載于《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第二十冊(cè)，由枇杷葉、百部、前胡、桔梗、桑白皮、薄荷腦制備而成。功能與主治為清肺熱、止咳、祛痰，用于風(fēng)熱侵肺引起的口干作渴，咳逆痰多及支氣管炎咳嗽，兼治兒童傷風(fēng)呃逆，咳嗽痰盛[1]。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)比較簡(jiǎn)單，只有相對(duì)密度、pH值、裝量等相應(yīng)的檢查項(xiàng)，無(wú)薄層色譜鑒別和含量測(cè)定項(xiàng)。為了提高治咳枇杷露質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制水平，分別對(duì)處方中的枇杷葉、薄荷腦和桔梗的薄層色譜鑒別方法進(jìn)行研究，同時(shí)采用氣相色譜法測(cè)定薄荷腦的含量。

1儀器與試藥

1.1儀器AGILENT 7890A氣相色譜儀，F(xiàn)ID檢測(cè)器，島津Rtx-WAX色譜柱，Mettler AE-240電子分析天平。

1.2試藥薄荷腦對(duì)照品(批號(hào)：110728-200506)、萘對(duì)照品(批號(hào)：111673-200803)、枇杷葉對(duì)照藥材(批號(hào)：121261-200502)、桔梗對(duì)照藥材(批號(hào)：121028-200507)，均購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所；治咳枇杷露(安徽輝克藥業(yè)有限公司，批號(hào)：120829、130112、121202)，硅膠G薄層板(青島海洋化工廠)，D101型大孔吸附樹(shù)脂(天津制膠廠)，其余試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1枇杷葉TLC鑒別

2.1.1供試品溶液的制備取本品20 mL，加水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次15 mL，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)铀? mL使溶解，放冷，通過(guò)D101型大孔吸附樹(shù)脂柱(內(nèi)徑為1.5 cm，柱高為8 cm)，以水50 mL洗脫，棄去水洗脫液，再用稀乙醇洗脫至洗脫液無(wú)色，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。

2.1.2對(duì)照藥材溶液的制備取枇杷葉對(duì)照藥材2 g，加水100 mL，煎煮1 h，濾過(guò)，濾液同“2.1.1”項(xiàng)方法制成對(duì)照藥材溶液。

2.1.3陰性對(duì)照溶液的制備按處方比例取除枇杷葉外其余藥材，按制劑工藝制成陰性空白樣品，按“2.1.1”項(xiàng)方法制成陰性對(duì)照溶液。

2.1.4實(shí)驗(yàn)方法吸取上述三種溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷—乙酸乙酯—冰醋酸(8∶4∶0.1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，枇杷葉陰性色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上無(wú)斑點(diǎn)，結(jié)果見(jiàn)圖1。

2.2薄荷腦TLC鑒別[2-3]

2.2.1供試品溶液的制備取本品15 mL，加石油醚(30～60℃)提取2次，每次15 mL，合并石油醚液，低溫濃縮至1 mL，作為供試品溶液。

2.2.2對(duì)照品溶液的制備取薄荷腦對(duì)照品，加石油醚(30～60℃)制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.2.3陰性對(duì)照溶液的制備按處方比例取除薄荷腦外其余藥材，按制劑工藝制成陰性空白樣品，按“2.2.1”項(xiàng)方法制成陰性對(duì)照溶液。

2.2.4實(shí)驗(yàn)方法吸取上述三種溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷—乙酸乙酯(17 ∶3)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，薄荷腦陰性色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上無(wú)斑點(diǎn)，結(jié)果見(jiàn)圖2。

注：1.枇杷葉對(duì)照藥材；2~4.樣品；5.缺枇杷葉陰性樣品。

注：1.薄荷腦對(duì)照品；2~4.樣品；5.缺薄荷腦陰性樣品。

2.3桔梗TLC鑒別[4-6]

2.3.1供試品溶液的制備取本品15 mL，加7%硫酸乙醇20 mL及水30 mL，加熱回流2 h，放冷，用三氯甲烷振搖提取3次，每次40 mL，合并三氯甲烷液，加水洗滌2次，每次40 mL，棄去水層，三氯甲烷液用無(wú)水硫酸鈉脫水，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。

2.3.2對(duì)照藥材溶液的制備取桔梗對(duì)照藥材1 g，加水100 mL，煎煮1 h，濾過(guò)，濾液同“2.3.1”項(xiàng)方法制成對(duì)照藥材溶液。

2.3.3陰性對(duì)照溶液的制備按處方比例取除桔梗外其余藥材，按制劑工藝制成陰性空白樣品，按“2.3.1”項(xiàng)方法制成陰性對(duì)照溶液。

2.3.4實(shí)驗(yàn)方法吸取上述三種溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙醚-甲酸(10 ∶9 ∶0.2)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，桔梗陰性色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上無(wú)斑點(diǎn)，結(jié)果見(jiàn)圖3。

注：1.桔梗對(duì)照藥材；2~4.樣品；5.缺桔梗陰性樣品。

2.4 薄荷腦含量測(cè)定

2.4.1色譜條件毛細(xì)管色譜柱：Rtx-WAX色譜柱(柱長(zhǎng)30 m，內(nèi)徑0.25 mm，膜厚0.25 μm)，柱溫：140℃；檢測(cè)器：FID，檢測(cè)器溫度：260℃；進(jìn)樣口溫度：260℃，分流比為5 ∶1；載氣：氮?dú)?，流速?.0 mL·min-1；氫氣流速：40 mL·min-1；空氣流速為400 mL·min-1；氮?dú)馕泊担魉贋?0 mL·min-1；進(jìn)樣量：2 μL。[6-7]

2.4.2內(nèi)標(biāo)溶液的制備精密稱(chēng)取萘對(duì)照品160.73 mg，置25 mL量瓶中，加環(huán)己烷溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為內(nèi)標(biāo)溶液。

2.4.3對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備精密稱(chēng)取薄荷腦對(duì)照品100.21 mg，置50 mL量瓶中，加環(huán)己烷溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液(每1 mL含2.004 2 mg薄荷腦)。

2.4.4供試品溶液的制備[7]精密量取本品50 mL，置500 mL圓底燒瓶中，加水250 mL，連接揮發(fā)油測(cè)定器，自測(cè)定器上端加水使充滿刻度部分，并溢流入燒瓶為止，加環(huán)己烷3 mL，連接回流冷凝管，加熱保持微沸3 h，放冷，將測(cè)定器中的液體移至分液漏斗中，冷凝管及揮發(fā)油測(cè)定管內(nèi)壁用環(huán)己烷少量洗滌，并入分液漏斗中，分取環(huán)己烷液，水液再用環(huán)己烷提取2次，每次3 mL，用鋪有無(wú)水硫酸鈉0.5 g的漏斗濾過(guò)，合并環(huán)己烷液，置25 mL量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1 mL，加環(huán)己烷至刻度，搖勻，即得。

2.4.5陰性對(duì)照溶液的制備按處方比例取除薄荷腦外其余藥材，按制劑工藝制成陰性空白樣品，按“2.4.4”項(xiàng)方法制成陰性對(duì)照溶液。

2.4.6專(zhuān)屬性考察按照“2.4.1”項(xiàng)色譜條件，吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液各2 μL,分別注入氣相色譜儀，結(jié)果見(jiàn)圖4。表明其他藥味不干擾供試品溶液中薄荷腦的測(cè)定。

混合對(duì)照品樣品陰性對(duì)照

圖4治咳枇杷露 GC 色譜圖

注：1.薄荷腦；2.萘。

2.4.7線性關(guān)系考察分別精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL，置10 mL量瓶中，再分別精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1 mL，用環(huán)己烷定容至刻度，搖勻，精密吸取2 μL注入氣相色譜儀，按照“2.4.1”項(xiàng)色譜條件測(cè)定，記錄峰面積。以進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，薄荷腦和內(nèi)標(biāo)物峰面積的比值為縱坐標(biāo)，經(jīng)線性回歸，得回歸方程為：Y=0.607 5X-0.006 2(r=0.999 9)，結(jié)果表明，薄荷腦在0.400 8～2.405 0 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.4.8精密度試驗(yàn)精密吸取同一對(duì)照品溶液，在“2.4.1”項(xiàng)色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣5次，以薄荷腦峰面積與內(nèi)標(biāo)物峰面積的比值計(jì)算，RSD為0.21%，表明本法精密度良好。

2.4.9重復(fù)性試驗(yàn)取同一供試品(批號(hào)為120829)5份，按“2.4.4”項(xiàng)方法制成供試品溶液，在“2.4.1”項(xiàng)色譜條件下測(cè)定含量，薄荷腦的含量為0.17 g·L-1，RSD為0.09%，表明本法重復(fù)性良好。

2.4.10穩(wěn)定性試驗(yàn)取制備好的供試品溶液(批號(hào)為120829)，在“2.4.1”項(xiàng)色譜條件下，每2 h進(jìn)樣一次，以薄荷腦峰面積與內(nèi)標(biāo)物峰面積的比值計(jì)算，RSD為0.15%，表明本品在18 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.11回收率試驗(yàn)精密量取已知薄荷腦含量為0.17 g·L-1的供試品(批號(hào)為120829)6份，每份25 mL，置圓底燒瓶中，再分別精密加入薄荷腦含量為2.209 6 g·L-1的對(duì)照品溶液2.0 mL(精密稱(chēng)取薄荷腦對(duì)照品55.24 mg，置25 mL量瓶中，加環(huán)己烷溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得)，按“2.4.4”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在“2.4.1”項(xiàng)色譜條件下測(cè)定，平均回收率99.4%，RSD為0.19%，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1　加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.4.12樣品含量測(cè)定取不同批號(hào)樣品三批(批號(hào)分別為120829、130112、121202)，按“2.4.4”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在“2.4.1”項(xiàng)色譜條件下測(cè)定并計(jì)算薄荷腦的含量，結(jié)果分別為0.17、0.19、0.17 g·L-1。

3討論

3.1枇杷葉薄層色譜鑒別 枇杷葉的薄層色譜鑒別參照了有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道[7-8]，曾以環(huán)己烷-乙酸乙酯-冰醋酸(12 ∶2 ∶0.2)為展開(kāi)劑，展開(kāi)后用10%硫酸乙醇溶液顯色、加熱，結(jié)果供試品和對(duì)照藥材斑點(diǎn)均不清晰，展距不理想，采用本文方法，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-冰醋酸(8∶4∶0.1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)后用5%香草醛硫酸溶液顯色、加熱，效果滿意。

3.2內(nèi)標(biāo)物的選擇薄荷腦屬于易揮發(fā)性物質(zhì)，為了抵消進(jìn)樣時(shí)揮發(fā)所帶來(lái)的誤差，故采用內(nèi)標(biāo)法測(cè)定薄荷腦的含量。經(jīng)查閱有關(guān)文獻(xiàn)[9-10]及參考藥典[7]，選用萘為內(nèi)標(biāo)物，且萘在該色譜條件下保留時(shí)間適中，峰形較好，分離度良好，而且陰性對(duì)照無(wú)干擾，使結(jié)果更加準(zhǔn)確可靠。

3.3含量測(cè)定提取時(shí)間的確定試驗(yàn)中曾取同一批樣品，照含量測(cè)定方法分別提取2、3、4 h，測(cè)得2 h含量結(jié)果偏低，3 h與4 h含量結(jié)果基本一致，說(shuō)明樣品在3 h時(shí)已基本提取完全，故確定提取時(shí)間為3 h。

3.4柱溫的選擇曾參照藥典[7]將柱溫設(shè)為110℃，在其余色譜條件不變的情況下，薄荷腦和內(nèi)標(biāo)物的保留時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，且峰形不理想，將柱溫改為140℃后[11-12]，效果滿意，最終確定柱溫為140℃。

4結(jié)論

本文所建立的枇杷葉、薄荷腦、桔梗薄層鑒別方法，提取簡(jiǎn)便，斑點(diǎn)清晰，陰性無(wú)干擾；薄荷腦含量測(cè)定方法經(jīng)方法學(xué)考察，結(jié)果表明線性關(guān)系、精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性及回收率均良好，方法可行；與原標(biāo)準(zhǔn)相比提高了治咳枇杷露的質(zhì)量控制水平。

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◇臨床醫(yī)學(xué)◇

Study on the quality standard of Zhikepipa Mixture

ZHANG Ting

(HuaibeiFoodandDrugInspectionCenter，Huaibei，Anhui235000，China)

Abstract：ObjectiveTo study the quality standard of Zhikepipa Mixture and improve the quality control level．MethodsFolium eriobotryae，menthol and radix platycodonis in Zhikepipa Mixture were identified by TLC．The content of menthol was determined by GC． ResultsTLC spots were clear with high resolution and strong specialization and the negative control showed no interference．The linear range of menthol was 0.400 8～2.405 0 μg (r=0.999 9) and the average recovery was 99.4 % with RSD of 0.19 %(n=6)．ConclusionThe improved quality standard is simple，accurate and can be used for the quality control of Zhikepipa Mixture．

Key words：Zhikepipa Mixture；TLC；GC

(收稿日期：2014-04-08，修回日期：2014-09-12)

doi:10.3969/j.issn.1009-6469.2015.02.020