張　萍，吳　敏，湯　慧，朱應(yīng)成

(安徽省蕪湖市食品藥品檢驗(yàn)所，安徽 蕪湖　241000)

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基于HPLC-DAD方法建立的數(shù)字對(duì)照品庫(kù)檢索平臺(tái)用于雞蛋中四環(huán)素類藥物殘留的快速篩查

張萍，吳敏，湯慧，朱應(yīng)成

(安徽省蕪湖市食品藥品檢驗(yàn)所，安徽 蕪湖241000)

摘要：目的建立了同時(shí)檢測(cè)雞蛋中8種四環(huán)素類藥物殘留的HPLC-DAD方法，建立了它們的相對(duì)保留時(shí)間和多波長(zhǎng)檢測(cè)的峰面積比值數(shù)據(jù)庫(kù)，通過(guò)數(shù)據(jù)庫(kù)建立了一個(gè)數(shù)據(jù)檢索平臺(tái)，并將其用于雞蛋中的四環(huán)素類藥物的殘留的快速篩查。方法先建立起一個(gè)同時(shí)檢測(cè)8種藥物的HPLC-DAD色譜分析方法，然后根據(jù)所得的HPLC-DAD色譜圖中對(duì)照品的信息，建立起一個(gè)包含各對(duì)照品的相對(duì)保留時(shí)間比值和多波長(zhǎng)檢測(cè)峰面積比值的數(shù)據(jù)庫(kù)，并以此為基礎(chǔ)建立起一個(gè)檢索平臺(tái)；實(shí)際檢測(cè)時(shí)，如果樣品中出現(xiàn)可疑物質(zhì)，則可將疑似峰的保留時(shí)間和多波長(zhǎng)檢測(cè)的峰面積輸入庫(kù)中進(jìn)行檢索，達(dá)到快速篩查的目的。結(jié)果8種四環(huán)素類藥物在建立的色譜條件下實(shí)現(xiàn)了完全分離；數(shù)字對(duì)照品檢索數(shù)據(jù)庫(kù)在實(shí)際檢測(cè)中，顯示出簡(jiǎn)單方便，準(zhǔn)確可靠的優(yōu)勢(shì)。結(jié)論該方法建立的數(shù)字對(duì)照品庫(kù)可以代替實(shí)際對(duì)照品，在監(jiān)督現(xiàn)場(chǎng)對(duì)雞蛋中是否含有四環(huán)素類藥物殘留進(jìn)行快速篩查和檢定。

關(guān)鍵詞：雞蛋；四環(huán)素類藥物；殘留；數(shù)字對(duì)照品庫(kù)；現(xiàn)場(chǎng)快速篩查

Rapid determination of eight tetracycline residues in eggs by a

search platform using numerical reference substance database

四環(huán)素類是由鏈菌霉產(chǎn)生的一類廣譜抗菌素[1-3]，因其價(jià)格低、抗菌譜廣、飼料報(bào)酬高等優(yōu)點(diǎn)在畜禽和水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中被廣泛地應(yīng)用。此類藥物主要包括四環(huán)素、土霉素、金霉素，脫氧土霉素、米諾環(huán)素等。 在我國(guó)對(duì)于此類藥物在動(dòng)物養(yǎng)殖過(guò)程中的使用有嚴(yán)格的限制，但是一些養(yǎng)殖戶為了追求經(jīng)濟(jì)利益，長(zhǎng)期違規(guī)使用此類抗生素，造成該類藥物在禽類產(chǎn)品中大量殘留，極大的影響了獸藥的治病療效，也給人的身體健康帶來(lái)嚴(yán)重危害。

雞蛋含有人體幾乎所有需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，被人們稱做“理想的營(yíng)養(yǎng)庫(kù)”，每個(gè)人幾乎每天都會(huì)食用雞蛋，因而蛋品的安全是關(guān)系到億萬(wàn)國(guó)民健康和生命的頭等大事。國(guó)內(nèi)外有關(guān)檢測(cè)四環(huán)素類藥物殘留的高效液相色譜法已有報(bào)道[4-6]，但多數(shù)檢測(cè)方法繁瑣、靈敏度偏低、尤其是在等度洗脫的狀態(tài)下只能同時(shí)檢測(cè)3~4種四環(huán)素類藥物。近年來(lái)，HPLC-MS/MS檢測(cè)四環(huán)素類藥物的報(bào)道亦逐漸增多[7-8]，但是由于其儀器昂貴、操作復(fù)雜，使用和維護(hù)費(fèi)用高，對(duì)于日常的食品安全監(jiān)督來(lái)說(shuō)不易推廣，因此并不是常規(guī)檢測(cè)的首選方法。

本文利用基層檢驗(yàn)部門現(xiàn)有的檢測(cè)儀器，建立了能同時(shí)檢出8種四環(huán)素類藥物的HPLC-DAD檢測(cè)方法。另外借鑒了目前在中藥檢測(cè)中推廣的“一測(cè)多評(píng)”的方法[9-11]以及HPLC-DAD法中多波長(zhǎng)定性測(cè)定法[12]的思路，以HPLC-DAD數(shù)據(jù)為基礎(chǔ)建立了一個(gè)數(shù)字對(duì)照品數(shù)據(jù)庫(kù)，該數(shù)據(jù)庫(kù)由8種藥物的相對(duì)保留時(shí)間比值和4個(gè)波長(zhǎng)下的峰面積比值組成，在工作中它們可以代替實(shí)際對(duì)照品對(duì)樣品進(jìn)行快篩，可以一次性檢測(cè)多種殘留藥物，大大縮短了檢測(cè)時(shí)間，降低了檢測(cè)成本，提高了檢測(cè)效率，可以在普通實(shí)驗(yàn)室中普及。另外本法的等度洗脫模式非常適用于快檢車載高效液相色譜儀。本研究為快速準(zhǔn)確的篩查雞蛋中的是否含有四環(huán)素類抗生素殘留藥物提供了一個(gè)很好的方法學(xué)參考。

1儀器與試藥

1.1儀器及主要設(shè)備Waters液相色譜儀(2998 PAD檢測(cè)器，Empower 2工作站)，Gemini C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)柱，Mettler XP205十萬(wàn)分之一天平。

1.2試劑與對(duì)照品4-差向四環(huán)素 (130401-200209，含量測(cè)定用)，土霉素 (130487-200703，88.8%)，脫水差向四環(huán)素(130402-200203，含量測(cè)定用)，美他環(huán)素(130499-200101，90.1%)，鹽酸四環(huán)素 (130488-200403，97.5%)，多西環(huán)素(130405-200405，含量測(cè)定用)， 鹽酸金霉素 (130489-200202，95.3%)，米諾環(huán)素(130514-200401，85.1%)，上述對(duì)照品均來(lái)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。

甲醇、乙腈均為色譜純，高氯酸酸為分析純，水為超純水。

1.3實(shí)驗(yàn)樣品雞蛋樣品來(lái)自蕪湖的大型超市和農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)，共取點(diǎn)20個(gè)，取樣品45批次，樣品類型有普通鮮雞蛋、山雞蛋、土雞蛋、草雞蛋、頭窩蛋和本雞蛋。

2方法與結(jié)果

2.1原理

2.1.1相對(duì)保留時(shí)間定性原理相對(duì)保留值α也叫選擇因子，是某組分X(待測(cè)物) 與另一組分 (參照物) 的調(diào)整保留值之比值(α =tRx/tR參)，在色譜條件一定的情況下，它只受柱溫和固定相的影響，與其它色譜操作條件無(wú)關(guān)，所以用α定性可以消除某些條件的影響，也是色譜學(xué)上使用廣泛的一種定性方法。在固定色譜操作條件下，可以在HPLC色譜圖上選擇一個(gè)色譜峰為內(nèi)參照峰，然后將同一色譜圖中其他各峰的保留時(shí)間與其相比得到一系列的相對(duì)保留值α，當(dāng)進(jìn)行未知物質(zhì)檢測(cè)時(shí)，在同樣的色譜條件下，若未知峰的相對(duì)保留值與其中某一個(gè)相對(duì)保留值α相同，則可認(rèn)為它們?yōu)橥晃镔|(zhì)。

2.1.2多波長(zhǎng)定性原理朗伯-比耳定律為：A =kC，在高效液相色譜中，A表示峰面積，C為溶液的濃度，k為常數(shù)。在第1個(gè)波長(zhǎng)處, 峰面積與濃度的關(guān)系為A1=k1C，在第2個(gè)波長(zhǎng)處, 峰面積與濃度的關(guān)系為A2=k2C , 兩個(gè)波長(zhǎng)的峰面積之比為A1/A2=k1C/k2C =k1/k2= 常數(shù)。在試驗(yàn)中選擇靈敏度較高的4個(gè)波長(zhǎng), 計(jì)算其中1個(gè)的峰面積與其它3個(gè)峰面積之比, 得到的數(shù)值分別以R1，R2，R3表示。若色譜條件不變, 則每次測(cè)定的R1，R2，R3這一組數(shù)據(jù)也不變。依據(jù)這一組數(shù)據(jù)可對(duì)未知組分進(jìn)行準(zhǔn)確定性。

2.2方法

2.2.1對(duì)照品儲(chǔ)備液及混合對(duì)照品溶液的制備準(zhǔn)確稱取4-差向四環(huán)素，土霉素，脫水差向四環(huán)素，美他環(huán)素，鹽酸四環(huán)素，多西環(huán)素，鹽酸金霉素，米諾環(huán)素對(duì)照品各適量分別置于10 mL的容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋制至刻度，制成相應(yīng)的濃度約為1 g·L-1標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，儲(chǔ)備液冷藏保存，保存期為2個(gè)月。

精密量取4-差向四環(huán)素，土霉素，脫水差向四環(huán)素，美他環(huán)素，多西環(huán)素對(duì)照品儲(chǔ)備液1 mL，鹽酸四環(huán)素和米諾環(huán)素對(duì)照品儲(chǔ)備液2 mL及鹽酸金霉素3 mL同置于20 mL的容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度即得混合對(duì)照品儲(chǔ)備液。

2.2.2雞蛋的處理取雞蛋兩枚，用料理機(jī)混勻后，取混勻樣品5 g，置錐形瓶中，精密加入5%高氯酸酸溶液25 mL，25℃超聲20 min，放冷至室溫后，取上清液過(guò)濾后備用。

2.2.3液相色譜條件取對(duì)照品的混合儲(chǔ)備液，過(guò)濾后進(jìn)液相色譜儀，色譜條件如下：色譜柱： Gemini C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動(dòng)相：[0.15 mol·L-1醋酸銨溶液-0.01 mol·L-1EDTA-三乙胺(100 ∶10∶1)(用醋酸調(diào)節(jié)pH至8.5)]：乙腈(81∶19)；流速：1.0 mL·min-1；柱溫：35 ℃；進(jìn)樣量：20 μL；檢測(cè)波長(zhǎng)：DAD掃描范圍為190~400 nm，圖1為其中4個(gè)波長(zhǎng)下的色譜圖。從圖中可以看出各色譜峰與其相鄰峰的分離度良好分離度值在1.5～5.8范圍內(nèi)。各峰的理論塔板數(shù)也較高，均不低于4 000。

圖18種四環(huán)素類藥物在不同波長(zhǎng)處的色譜圖

注：1.4-差向四環(huán)素；2.土霉素；3.脫水差向四環(huán)素；4.美他環(huán)素；5.鹽酸四環(huán)素；6.多西環(huán)素；7.鹽酸金霉素；8.米諾環(huán)素。

2.3數(shù)字對(duì)照品譜庫(kù)的建立

2.3.1相對(duì)保留時(shí)間數(shù)據(jù)庫(kù)的建立實(shí)驗(yàn)中將米諾環(huán)素選為內(nèi)參物質(zhì)，通過(guò)其他峰的保留時(shí)間和它進(jìn)行比較得到了一系列的相對(duì)保留值，結(jié)果如下表1。從表中的結(jié)果可以看出使用相同的色譜柱，每種物質(zhì)在不同的色譜儀上的相對(duì)保留值變化不大，表明使用同一根色譜柱，在相同的色譜條件下以相對(duì)保留值對(duì)色譜峰進(jìn)行定性準(zhǔn)確性良好。

2.3.2基于多波長(zhǎng)測(cè)定的峰面積比值數(shù)據(jù)庫(kù)的建立多波長(zhǎng)測(cè)定是HPLC-DAD方法中一種比較簡(jiǎn)單的定性的方法。因各組分在不同波長(zhǎng)處的峰面積之比為一組定值，故可選擇4個(gè)或多個(gè)靈敏度較高的波長(zhǎng)進(jìn)行同時(shí)檢測(cè)，再選擇其中1個(gè)波長(zhǎng)與其它波長(zhǎng)處的峰面積相比，得到一組定值，建立起一個(gè)面積比值的標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)庫(kù)。我們計(jì)算了355 nm波長(zhǎng)處的峰面積與270 nm、370 nm和390 nm波長(zhǎng)處峰面積的比值A(chǔ)270/A355，A370/A355，A390/A355，將這3個(gè)峰面積之比分別以R1，R2，R3表示，色譜圖見圖1。我們選擇不同質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液，測(cè)定了8 種藥物在4個(gè)波長(zhǎng)處的峰面積，計(jì)算了它們的峰面積之比，10次測(cè)定結(jié)果如表2。從表2中可以看出，10次測(cè)定的峰面積比均在一定的范圍內(nèi)。

2.3.3數(shù)字對(duì)照品庫(kù)檢索平臺(tái)的建立及樣品的檢測(cè)本文將“2.3.1”和“2.3.2”中相對(duì)保留時(shí)間比值和多波長(zhǎng)測(cè)定的峰面積比值數(shù)據(jù)庫(kù)通過(guò)Excel表格的編程功能集成為一個(gè)8種四環(huán)素類藥物的數(shù)字對(duì)照品檢索平臺(tái)。在現(xiàn)場(chǎng)快篩時(shí)如果樣品中出現(xiàn)了可疑物質(zhì)，則可將樣品的HPLC-DAD色譜圖中可疑峰的保留時(shí)間和內(nèi)參米諾環(huán)素峰的保留時(shí)間輸入檢索平臺(tái)中的相對(duì)保留時(shí)間比值數(shù)據(jù)庫(kù)中，數(shù)據(jù)庫(kù)直接就會(huì)得出是否為以下的哪種可疑物質(zhì)；然后再將樣品可疑峰的多波長(zhǎng)檢測(cè)的峰面積輸入檢索平臺(tái)的峰面積比值數(shù)據(jù)庫(kù)中，數(shù)據(jù)庫(kù)直接就會(huì)判定出該可疑物質(zhì)的具體品種。

表1　相同色譜柱上8種四環(huán)素類藥物在不同色譜儀上的相對(duì)保留時(shí)間比值

注：A為Gemini C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；B為L(zhǎng)una C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)。

表2　8種四環(huán)素類藥物在4個(gè)波長(zhǎng)下的峰面積比一覽表

3討論

3.1色譜條件的選擇

3.1.1色譜柱的選擇考慮到方法應(yīng)用的通用性以及四環(huán)素類藥物的分子中大多數(shù)含酚羥基和烯酸型羥基，具有一定極性，所以選擇了檢測(cè)分析中常用的C18反相柱。本實(shí)驗(yàn)考察了以下不同牌號(hào)的色譜柱，(1)Gemini C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)柱；(2)Luna C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)柱；(3) Hypersil C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)柱；(4) Aglient ZORBAX SB C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)柱；(5) Kromasil C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)柱；(6)MG II C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)柱；結(jié)果表明8種藥物在長(zhǎng)柱上都達(dá)到了基線分離，而在短柱上的有的峰還不能完全分開，因此實(shí)驗(yàn)選用了長(zhǎng)柱。

3.1.2流動(dòng)相的選擇本實(shí)驗(yàn)選用了幾種文獻(xiàn)報(bào)道的測(cè)定四環(huán)素類藥物的流動(dòng)相體系包括：甲醇—水—草酸、甲醇—磷酸氫二鈉、乙腈—甲醇—醋酸、甲醇—乙腈—甲酸、醋酸銨—EDTA—三乙胺—乙腈，結(jié)果發(fā)現(xiàn)8種組分在醋酸銨—EDTA—三乙胺—乙腈體系中色譜保留行為較好，另外還考察了此體系各溶液間的不同配比以及流動(dòng)相pH值對(duì)檢測(cè)的影響，結(jié)果顯示在本法所用流動(dòng)相體系下，各組分間的分離度均達(dá)到了要求，并且峰形也較好。

3.1.3檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇利用二極管陣列檢測(cè)器(DAD)，記錄190~400 nm波長(zhǎng)段的光譜圖，通過(guò)觀察混合對(duì)照溶液在該波長(zhǎng)段的3D光譜圖，發(fā)現(xiàn)在上述色譜條件下，在270、355、370和390 nm波長(zhǎng)處8種物質(zhì)的信號(hào)值響應(yīng)較強(qiáng)，干擾較小，色譜分離度符合要求，因此選擇在將上述波長(zhǎng)作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.2樣品前處理?xiàng)l件的選擇近年來(lái)對(duì)于雞蛋樣本前處理凈化方法已有報(bào)道[13-14]，大部分都采用三氯乙酸-MeIlvaine-EDTA 為提取液進(jìn)行多步提取，然后再過(guò)固相小柱凈化，最后用氮?dú)獯蹈珊?，再取合適的溶液進(jìn)行稀釋。這些方法都可以把基質(zhì)中的四環(huán)素類抗生素提取出來(lái)，但使用的提取體系比較復(fù)雜，另外還要經(jīng)過(guò)較為繁瑣的過(guò)柱、淋洗、蒸發(fā)、濃縮等過(guò)程，不但被測(cè)組分容易損失，而且不利于今后在監(jiān)督現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行快速檢驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)以5%高氯酸酸溶液為提取液，采用超聲方法提取四環(huán)素類藥物，提取液經(jīng)濾膜過(guò)濾后直接就可以進(jìn)樣，這種方法也可以獲得良好的提取效果，大大節(jié)約了凈化時(shí)間和檢測(cè)成本，非常有利于今后在食品監(jiān)督現(xiàn)場(chǎng)的快檢。

4結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)建立了等度洗脫模式下HPLC-DAD方法同時(shí)檢測(cè)雞蛋中8種四環(huán)素類藥物的高效色譜分析方法，然后利用HPLC-DAD色譜圖的信息建立了一個(gè)數(shù)字對(duì)照品庫(kù)的檢索平臺(tái)，此平臺(tái)可以用來(lái)快篩雞蛋中是否含有四環(huán)素類藥物的殘留。

本實(shí)驗(yàn)建立起來(lái)的檢索平臺(tái)雖然只包含了8種藥物的數(shù)字對(duì)照品的數(shù)據(jù)，但是以此為方法學(xué)參考可以建立起包含更多種類的藥物殘留的綜合檢索平臺(tái)，為今后的食品安全監(jiān)督檢查提供更為便捷和準(zhǔn)確的快篩手段。

參考文獻(xiàn)：

[1]Hu Yu, Hui Mu, Hu YM. Determination of fluoroquinolones, sulfonamides, and tetracycline residues simultaneously in porcine tissue by MSPD and HPLC-DAD [J]. Journal of Pharmaceutical Analysis, 2012, 1: 76-81.

[2]楊開金.HPLC法測(cè)定四環(huán)素片的含量 [J]. 安徽醫(yī)藥, 2013,17(8):1308-1309.

[3]葛云芝，于小波，周光宏，等.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定雞肉中3中四環(huán)素類抗生素殘留 [J].食品科學(xué),2013,34(10):180-183.

[4]吳寧鵬，班付國(guó)，方忠意，等. 雞蛋中四環(huán)素藥物殘留量測(cè)定高效液相色譜法研究 [J]. 中國(guó)獸藥雜志, 2009, 43(8):9-12.

[5]池利民，全則靈，張雪梅. HPLC測(cè)定豬肉食品中四環(huán)素族抗生素殘留 [J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué), 2010,38(7):3548-3549.

[6]李繼連，白雪梅，靳書剛，等. HPLC法測(cè)定魚類肌肉組織中土霉素和四環(huán)素藥物殘留含量 [J]. 黑龍江畜牧獸醫(yī), 2011(9):74-75.

[7]鐘偉龍，吳云普，呂飛，等.超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定飼料中四環(huán)素類藥物殘留[J]. 農(nóng)業(yè)災(zāi)害研究, 2012, 2(1): 33-35.

[8]連英杰，吳敏，黎翠玉， 等.直接提取-超高壓液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)原料奶及奶制品中的四環(huán)素類抗生素[J]. 食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào),2013,4(2): 489-495.

[9]李岑，楊紅霞，肖遠(yuǎn)燦，等.一測(cè)多評(píng)法測(cè)定藏藥當(dāng)佐中沒(méi)食子酸、羥基紅花黃色素-A、桂皮醛及胡椒堿的含量 [J].藥物分析雜志, 2011, 31(9):1658-1667.

[10] 魏鋒，程顯隆，馬玲云，等.藥品標(biāo)準(zhǔn)中替代對(duì)照品研究技術(shù)要求探討 [J]. 中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn), 2012, 13(1):12-15．

[11] 逄瑜，孫磊，金紅宇，等.替代對(duì)照品法在中藥多指標(biāo)含量測(cè)定中的應(yīng)用與技術(shù)要求探討[J]. 藥物分析雜志, 2013, 33(1):167-177.

[12] 陳笑梅，鄭自強(qiáng)，施旭霞. 高效液相色譜多波長(zhǎng)定性方法研究 [J].色譜,1999,17(2):1892-1899.

[13] 蔣天梅，馮三令，耿士偉，等.液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定雞蛋中四環(huán)素類藥物的殘留 [J].農(nóng)技服務(wù), 2012, 29(4): 476-477.

[14] 瑪爾江·巴哈提別克, 王彥, 王玉紅, 等. 應(yīng)用加壓毛細(xì)管電色譜技術(shù)檢測(cè)雞蛋中四環(huán)素類農(nóng)獸藥殘留的研究//全國(guó)生物醫(yī)藥色譜學(xué)術(shù)交流會(huì)(2010景德鎮(zhèn))論文集[C]. 景德鎮(zhèn),2010:7-11.

based on HPLC-DAD spectrums

ZHANG Ping, WU Ming, TANG Hui,et al

(WuhuInstituteofFoodandDrug,Wuhu241000,China)

Abstract:ObjectiveTo establish a rapid determination of eight tetracycline residues in eggs by HPLC-DAD, including 4-epianhydrotetracycline oxytraoycline, epitetracycline hydrochloride, methacycline, tetracycline, doxycycline, chlortetracycline and minocycline. Based on the HPLC-DAD spectrums, a numerical reference substance database including the adjusted relative retention times and the peak area rations was developed. A data search platform was integrated with the database and used for rapid screening of eight tetracycline residues in eggs. MethodsFirstly, HPLC-DAD spectrums were collected. Then a numerical reference substance database including the adjusted relative retention times and the peak area rations was established. Based on this database, a digital reference substance search platform was set up. For a suspicious substance in testing, we can compare its relative retention time and the peak area rations with the information in the database to identify this substance.Results8 tetracyclines were well separated based on the chromatographic conditions. This method has been successfully applied to real sample analysis.ConclusionThe reference substance database can be used to rapidly screen the eggs to judge whether the tetracycline residues are in eggs when surveillance on-site .

Key words:eggs; tetracycline; residues; numerical reference substance database; rapid screening

(收稿日期：2014-04-10，修回日期：2014-06-22).

基金項(xiàng)目：2012年安徽省食品藥品監(jiān)督管理局科研項(xiàng)目(No 009)

doi:10.3969/j.issn.1009-6469.2015.02.014