張國友，邱 靜，陳 剛，陳愛亮，趙 燕，徐貞貞，楊曙明

(中國農業(yè)科學院農業(yè)質量標準與檢測技術研究所/農業(yè)部農產品質量安全重點實驗室，北京 100081)

柑橘類水果是世界上產量最大的水果。中國是柑橘的主要原產國之一，有文字記載的栽培歷史達4 000 多年［1］。中國柑橘的生產面積于2004 年達到163 萬hm2，居世界第一位。近年來我國柑橘產量持續(xù)增長，產量于2011 年達2 750 萬t，居世界第一位。

辛弗林作為柑橘重要的天然產物之一，被廣泛使用于醫(yī)藥、食品、飲料、飼料和化妝品等行業(yè)中［2］。美國FDA 于2004 年禁止在膳食補充劑中添加麻黃堿之后，辛弗林作為替代品得到了更為廣泛的應用。然而，有報道稱辛弗林在心血管方面具有副作用甚至毒性［3-5］。加拿大衛(wèi)生總署于2010 年建議辛弗林日服用劑量要小于30mg［4］。Kaats GR 等［6］為了確認辛弗林是否具有副作用需要進行長期臨床研究。為了避免在農產品生產過程中辛弗林的誤用以致引發(fā)食物安全事件，本文針對辛弗林的結構、來源、分布及檢測技術的國內外研究進展進行綜述。

1 辛弗林的結構、來源及分布

1.1 辛弗林的結構

1.1.1 異構體 辛弗林(Synephrine，C9H13NO2)是一種天然生物堿。目前發(fā)現(xiàn)的辛弗林異構體有3 種:para-synephrine (p-辛弗林)、meta-synephrine (m-辛弗林)和ortho-synephrine (o-辛弗林)。p-辛弗林是枳實等柑橘產品提取物的主要藥用成分之一。o-辛弗林是通過人工合成產生的。關于m-辛弗林，有的學者認為，柑橘產品中含有m-辛弗林，而有的學者認為柑橘產品中沒有m-辛弗林［3，7，8］。m-辛弗林和p-辛弗林具有不同的生物活性和藥理特征，m-辛弗林的存在與否會直接影響辛弗林類產品的功效和食物的安全性。

1.1.2 對映體 辛弗林具有手性特征，含有兩個對映體。不同的對映體在手性環(huán)境中的生物活性、毒理學、環(huán)境化學過程等存在較大的差異［9］。左旋—辛弗林與右旋—辛弗林，即(－)－辛弗林與(+)－辛弗林在藥理活性上存在顯著差異［7］。柑橘中辛弗林主要以(－)－辛弗林為主［10］，提取過程中，(－)－辛弗林受到溫度、pH 值以及有機溶劑的影響會發(fā)生外消旋化［11］。重視辛弗林異構體和手性特征可以降低食物安全隱患。

1.2 辛弗林的來源與分布

辛弗林在蕓香科植物酸橙及其栽培變種、甜橙的果皮、果實、果汁、果籽中均有分布，在蕓香科植物吳茱萸中也有報道［3］。辛弗林的含量受到品種、產地以及生長期等因素的影響。不同品種柑橘落果中辛弗林的含量相差近20 倍［12］，同一植株柑橘皮中辛弗林的含量隨著果實成熟度的增加而降低［14］。辛弗林可以通過對柑橘類產品的提取和純化獲得，也可以通過化學合成獲得?；瘜W合成的辛弗林是外消旋混合物，其藥效遠小于天然提取的辛弗林［15，16］。

1.3 辛弗林的功效

辛弗林作為枳實提取物的主要藥用成分，被我國傳統(tǒng)醫(yī)學用于理氣寬中、行滯消脹、食積不化等［17］。美國等西方國家將辛弗林用于制作減肥產品。辛弗林可刺激α-和β3腎上腺素受體，能提升能耗、血壓、代謝、產熱和減輕體重［3，7］。辛弗林與咖啡因、甲基黃嘌呤、麻黃堿、?；撬岬群嫌脮r，對心血管和中樞神經的刺激作用加劇，會引發(fā)頭痛、癲癇、中風甚至心力衰竭。辛弗林常以植物提取物的形式與其他有效成分混合而成，所以在其副作用方面還存在爭議［3，5-7］。

2 辛弗林的檢測技術

在柑橘中是否含有m-辛弗林以及在辛弗林的副作用方面存在爭議，檢測技術和方法的發(fā)展是正確認識辛弗林、深入理解其藥理作用和進行質量控制的保障。

2.1 樣品前處理

2.1.1 提取 溶劑提取法是常用的方法，乙醇或甲醇是最常用的溶劑，按操作可分冷浸法、滲流法和回流法，回流法提取效率較高［18］。連續(xù)回流法，即索氏提取法(SE)的提取效率高，操作方便，但是因提取液加熱時間長而不適用于受熱易分解的成分。Karsten Putzbach 等［19］比較了SE 法與聲波提取法對酸橙類食品補充劑中的辛弗林等4 種生物堿的提取效率，發(fā)現(xiàn)聲波提取法的提取效果比SE 法好。賀冬秀等［20］比較了超聲波輔助提取法(UAE)與微波輔助提取法(MAE)對陳皮中辛弗林的提取效率，發(fā)現(xiàn)MAE 法更好。超臨界流體提取法(SFE)節(jié)省溶劑而且可以在相對低溫條件下完成提取，周鳴謙等［21，22］使用SFE-CO2萃取柑橘落果中的辛弗林，提取率達35.8%，萃取物中辛弗林含量為44.7%，遠高于溶劑法萃取物(4.6%)，但是萃取壓力高、耗時長導致操作成本相對較高，而采用超聲強化SFE 法則可以進一步的提高提取效率。另外，Sun Yujing 等［23］比較了曬干、烘干和凍干對未熟柑橘落果中生物活性成分提取的影響，發(fā)現(xiàn)凍干方式有利于辛弗林的提取。

2.1.2 凈化 常用的凈化方法有有機溶劑萃取法、固相萃取法(SPE)［10］、樹脂色譜法(離子交換樹脂，大孔吸附樹脂)和分子印跡固相萃取法 (MISPE)等［20，21，24］。分子印跡固相萃取法具有親和性高和專一性強的特點，比較適用于富集復雜基質中的目標物。

2.2 檢測方法

2.2.1 薄層色譜掃描法(TLC) TLC 法是辛弗林定性及定量分析中常用的重要方法之一，在《中國藥典》2005 版中被采用為鑒別辛弗林的標準方法，然而近來研究發(fā)現(xiàn)TLC 法不能鑒別青皮辛弗林和枳實辛弗林［25］。高效薄層掃描法(HPTLC)是在TLC 基礎之上的改良方法，其靈敏度和分離度都有很大的提高，可以準確地檢出極微量的物質。Shawky，E［26］利用HPTLC 法實現(xiàn)了酸橙皮中辛弗林及其代謝物章魚胺的同時測定，Rf值分別為0.292±0.008 3 和0.413 ±0.008 9，此方法特別適合分析植物提取物等復雜基質，可以自動同時分析多份樣品，而不需要過多的清洗操作，只需要簡單的樣品前處理和少量的溶劑。

2.2.2 毛細管電泳法(CE) CE 法具有快速、高效、可重復性好、溶劑消耗量少、測定所需樣品量小、移動方便等特點［27，28］。CE 法抗污染能力強，適用于天然產物等復雜基質的分析，然而CE 法同時測定的樣品數(shù)量有限。

2.2.3 HPLC 法 HPLC 法是現(xiàn)在最常用的方法［29］，采用極性固定相和相對非極性的流動相將辛弗林分離(附表)。辛弗林分析方面多采用反相色譜柱，通過添加離子對試劑來提高峰對稱性和分辨率，降低基質干擾，但是離子對試劑存在離子抑制效應、穩(wěn)定性差等缺點。紫外檢測器是目前HPLC 法中最常見的檢測器，而熒光檢測器的靈敏度更高［36］?？傊?，HPLC 法具有分離度高，操作簡便、快速、重復性好、準確度高等優(yōu)點，但是樣品前處理較為復雜，固定相更換頻率高，溶劑消耗量大，檢測成本高。

附表 HPLC 法對不同樣品中辛弗林的檢測條件及線性范圍

2.2.4 氣相色譜法(GC) GC 法是天然產物分析與中藥質量控制方面常用的分析方法。Andrade AS 等［38］使用該方法進行了酸橙中p-辛弗林的分析，線性范圍為125～500 mg%，日內及日間精密度為3.6%和3.59%，平均回收率為78.1% ±3.64%。在缺乏液相和色譜聯(lián)用設備條件時，GC 法可以作為辛弗林分析的替代方法。

2.2.5 聯(lián)用技術 聯(lián)用技術在辛弗林檢測方面的應用有氣相色譜-質譜法(GC-MS)、液相色譜—串聯(lián)質譜法(LC-MS/MS)和氣相色譜-離子阱串聯(lián)質譜法(GC/ITMS)等。Marchei E 等［39］使用GC-MS 法對減肥類食品添加劑中辛弗林的含量進行了測定，線性范圍為0.1～50μg/mg (固態(tài))和0.1～50μg/mL (液態(tài))，平均回收率在89.3%和90.5%之間，定量限為0.1μg/mg (固態(tài))和0.1μg/mL (液態(tài))，不同基質中的辛弗林含量在3.1μg/mg (固態(tài))～480.2μg/mL (液態(tài))之間。由于辛弗林具有高極性和低揮發(fā)性，所以在使用GC-MS 法分析時要消耗額外的時間來提高揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性。液相色譜與質譜聯(lián)用技術極大地提高了靈敏度。Beyer J 等［40］使用LC-MS/MS 方法分析了人體血漿中辛弗林等的含量，定量限達10ng/mL。Santana J 等［41］使用LC/UV 和LC/MS/MS 方法分析了酸橙類食品補充劑中的m-辛弗林和p-辛弗林的含量，其中LC/MS/MS 法對辛弗林的定量限達0.02ng (on-column)。Nelson BC 等［42］使用LC/MS/MS 方法分析了酸橙中辛弗林等物質的含量，其定量限達1pg (on-column)。Rossato LG 等［43］使用GC/IT-MS 對Caco-2 (人克隆結腸腺癌細胞)中的辛弗林進行了測定，得到了比LC-MS/MS 更好的回收率:p-辛弗林(79.1%～95.1%)，m-辛弗林(81.1%～96.8%)，而且分析時間不超過9min。

3 結論

辛弗林的各種檢測方法中，TLC 法操作相對復雜，不適合快速分析，且靈敏度和分離度都相對較低。CE法具有快速、溶劑和樣品量消耗少而且移動方便等特點，但是同時測定的樣品數(shù)量有限。HPLC 法分離度高，操作簡便、快速，同時測定的樣品數(shù)量高，但是樣品前處理較為復雜，溶劑消耗量大，色譜柱更換頻率高。色譜聯(lián)用技術具有快速、高靈敏度和分離度、能同時測定多份樣品等特點，能夠滿足檢測技術在未來多目標、快速、綠色環(huán)保等方面發(fā)展趨勢的需求。未來聯(lián)用技術的發(fā)展及其在飼料、飲料、食品添加劑等不同產品中辛弗林含量分析方面的應用;m-辛弗林和p-辛弗林的同時檢測;辛弗林及其他生物胺的同時檢測;不同品種、產地及生長期的柑橘產品中辛弗林的含量分析;辛弗林異構體和對映體在不同基質中的代謝、積累、藥理藥效以及對人體的副作用，特別是長期臨床試驗等方面都需要進一步的研究。

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