岳　愷(南陽(yáng)市中心醫(yī)院腫瘤三科，河南　南陽(yáng)　473000)

自體免疫細(xì)胞聯(lián)合TP化療方案對(duì)老年晚期非小細(xì)胞肺癌患者生存的影響

岳愷
(南陽(yáng)市中心醫(yī)院腫瘤三科，河南南陽(yáng)473000)

〔摘要〕目的探討自體免疫細(xì)胞聯(lián)合紫杉醇+順鉑(TP)化療方案對(duì)老年晚期非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)患者生存的影響。方法選取2008 年4月至2011年4月來(lái)該院接受治療的老年晚期NSCLC患者65例，將其隨機(jī)分為對(duì)照組和觀察組，對(duì)照組采用TP化療方案，觀察組采用樹(shù)突細(xì)胞-殺傷細(xì)胞(DC-CIK)聯(lián)合TP化療方案進(jìn)行治療。療程結(jié)束后，流式檢測(cè)治療前后患者外周血CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD16+CD56+、CD4+CD25+細(xì)胞的比例，比較對(duì)照組和觀察組治療前后的機(jī)體免疫功能變化;采用電化學(xué)發(fā)光免疫分析法測(cè)定兩組患者治療前后外周血血清癌胚抗原(CEA)和細(xì)胞角蛋白19可溶性片段(CYFRA21-1)水平;比較兩組患者治療后的累積生存率。結(jié)果治療后觀察組淋巴細(xì)胞比例改善明顯優(yōu)于對(duì)照組(P＜0.05) ;治療后觀察組外周血血清CEA和CYFRA21-1含量與治療前和對(duì)照組治療后相比顯著下降(P＜0.05) ;觀察組累積生存率明顯高于對(duì)照組(P＜0.05)。結(jié)論自體免疫細(xì)胞聯(lián)合紫杉醇+TP化療方案能夠顯著改善老年晚期NSCLC患者免疫功能，有效降低血清腫瘤標(biāo)志物水平，提高生存率。

〔關(guān)鍵詞〕樹(shù)突細(xì)胞-細(xì)胞因子誘導(dǎo)殺傷細(xì)胞;紫杉醇+順鉑;非小細(xì)胞肺癌;免疫功能

第一作者:岳愷(1985-)，男，碩士，住院醫(yī)師，主要從事腫瘤內(nèi)科學(xué)臨床研究。

非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)占肺癌的80％以上，其中超過(guò)30％的患者發(fā)病年齡在70歲以上〔1〕。近年來(lái)，腫瘤生物治療技術(shù)已成為繼手術(shù)、放療和化療后治療腫瘤的第4種手段〔2〕。細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(CIK)現(xiàn)已成為抗腫瘤過(guò)繼細(xì)胞免疫治療的首選方案，具有T淋巴細(xì)胞強(qiáng)大的抗瘤活性和非主要組織相容性復(fù)合體(MHC)限制性殺瘤的優(yōu)點(diǎn)〔3〕。樹(shù)突細(xì)胞(DC)是目前發(fā)現(xiàn)的功能最強(qiáng)的專(zhuān)職抗原提呈細(xì)胞(APC)，可誘發(fā)抗原特異性免疫應(yīng)答，DC-CIK細(xì)胞聯(lián)合培養(yǎng)，具有增殖速度快、殺瘤活性高、殺瘤譜廣的優(yōu)點(diǎn)〔2〕。本研究采用自體DC-CIK聯(lián)合紫杉醇+順鉑(TP)化療方案治療老年晚期NSCLC，以期提高患者的生存率和生存質(zhì)量。

1　資料與方法

1.1一般資料選取我院于2008年4月至2011年4月收治的確診為晚期NSCLC的老年患者65例。入選標(biāo)準(zhǔn):①患者確診為晚期NSCLC;②年齡≥70歲;③無(wú)重要器官的嚴(yán)重病變以及嚴(yán)重的心腦血管疾病;④無(wú)精神障礙性疾病;⑤簽署知情同意書(shū)。將患者隨機(jī)分為對(duì)照組和觀察組，對(duì)照組33例，男18例，女15例;年齡70～84歲，中位年齡77.5歲;病理類(lèi)型:腺癌21例，鱗癌9例，腺鱗癌3例;臨床分期:ⅢB期21例，Ⅳ期12例。治療組32例，男17例，女15例;年齡72～85歲，中位年齡78.2歲;病理類(lèi)型:腺癌19例，鱗癌9例，腺鱗癌4例;臨床分期:ⅢB期21例，Ⅳ期11例。兩組患者性別、年齡、臨床分期、腫瘤浸潤(rùn)程度等比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，具有可比性。

1.2DC-CIK細(xì)胞制備65例患者均在化療前靜脈采集經(jīng)造血?jiǎng)訂T后的外周血150 ml，以2 200 r/min離心15 min后收集上清液，留待細(xì)胞回輸時(shí)使用;細(xì)胞沉淀用磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌兩遍后加入PBS重懸，用淋巴細(xì)胞分離液按說(shuō)明書(shū)分離出外周血單合核細(xì)胞(PBMC)，生理鹽水洗滌3遍，采用無(wú)血清培養(yǎng)基重懸細(xì)胞并調(diào)整細(xì)胞濃度為1～2×107/ml后接種于6孔板，2 ml/孔，孵箱貼壁培養(yǎng)2 h后吸去未貼壁細(xì)胞留作CIK培養(yǎng)，貼壁細(xì)胞加入含有GM-CSF(800 U/ml)、白細(xì)胞介素(IL) -4(500 U/ml)的無(wú)血清培養(yǎng)基作為DC培養(yǎng)，每3天更換含有上述因子的完全培養(yǎng)基，第7天加入含1 000 U/ml腫瘤壞死因子(TNF) -α促成熟;未貼壁細(xì)胞加入含干擾素(INF) -γ，1 000 U/ml)的無(wú)血清培養(yǎng)基中做CIK培養(yǎng)，第2天加入IL-1α (100 U/ml)、IL-2(500 U/ml)、CD3單抗(50 ng/ml)，每3天更換含有上述因子的完全培養(yǎng)基;第8天收集成熟后的DC，以1∶10的比例與CIK混合培養(yǎng)7 d即為DC-CIK，第8天收集細(xì)胞進(jìn)行回輸，每天回輸一次，一共回輸6次，細(xì)胞總數(shù)(0.6～1.1)×1010。所有細(xì)胞均經(jīng)過(guò)細(xì)菌、真菌及內(nèi)毒素檢測(cè)為陰性后方可回輸。

1.3治療方法對(duì)照組采用TP方案進(jìn)行常規(guī)單純化療:第1天，紫杉醇135 mg/m2靜滴;第1～3天，TP 30 mg/m2靜滴。紫杉醇使用前日和當(dāng)日給予口服地塞米松8 mg，TP治療中輔以常規(guī)水化，2 w為1個(gè)療程;觀察組在化療前1 d采集外周血PMBC進(jìn)行DC-CIK培養(yǎng)，第2天進(jìn)行與對(duì)照組相同的化療方案，化療結(jié)束后進(jìn)行DC-CIK回輸。兩組患者2個(gè)月后進(jìn)行第2個(gè)療程的治療，共3個(gè)療程。

1.4觀察指標(biāo)與療效判定分別于治療前及治療后2 w抽取外周血4 ml，流式檢測(cè)患者外周血CD3+、CD4+、CD8+、CD16+CD56+、CD4+CD25+細(xì)胞比例;抽取患者清晨空腹靜脈血3 ml，采用電化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定法檢測(cè)患者血清中癌胚抗原(CEA) 和CYFRA21-1水平;同時(shí)對(duì)患者的累積生存率進(jìn)行分析。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS13.0軟件進(jìn)行分析，計(jì)量數(shù)據(jù)采用±s表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，累積生存率比較采用Kaplan-Meier法和Log-Rank檢驗(yàn)。

2　結(jié)果

2.1治療前后兩組患者外周血淋巴細(xì)胞亞群變化對(duì)照組和觀察組治療前CD3+、CD4+、CD8+、CD16+CD56+、CD4+CD25+細(xì)胞水平差異比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。對(duì)照組治療后CD3+、CD4+、CD16+CD56+、CD4+CD25+細(xì)胞水平與治療前相比變化不明顯(P＞0.05)，細(xì)胞CD8+比例顯著升高(P＜0.05) ;觀察組治療后CD3+、CD4+、CD16+CD56+細(xì)胞水平明顯高于治療前(P＜0.05)，CD8+細(xì)胞比例以及CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例顯著下降(P＜0.05)。見(jiàn)圖1。

圖1　對(duì)照組和觀察組患者治療前后免疫功能變化

2.2治療前后兩組患者外周血血清CEA和CYFRA21-1水平變化治療前觀察組和對(duì)照組的CEA和CYFRA21-1水平比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05) ;治療后觀察組和對(duì)照組CEA和CYFRA21-1水平與治療前均顯著下降(P＜0.05)，且觀察組下降幅度比對(duì)照組明顯(P＜0.05)。見(jiàn)圖2。

圖2　對(duì)照組和觀察組患者外周血血清CEA和CYFRA21-1水平比較

2.3兩組患者累積生存率比較兩組患者治療結(jié)束后回訪(fǎng)3～36個(gè)月，對(duì)照組25例死亡，觀察組19例。Kaplan-Meier曲線(xiàn)顯示對(duì)照組1、2、3年的累積生存率分別為72.72％、36.36％、24.24％;觀察組分別為84.38％、59.38％、40.62％。Log-Rank檢驗(yàn)顯示兩組累積生存率差異顯著(P＜0.05)。

3　討論

肺癌是全國(guó)乃至全世界最常見(jiàn)的惡性腫瘤，在很多國(guó)家，肺癌已成為癌癥死亡的首要原因，NSCLC是肺癌中最常見(jiàn)的組織類(lèi)型，大部分患者在確診時(shí)已屬進(jìn)展期或無(wú)法治愈的Ⅲb期或Ⅳ期，生存期往往不超過(guò)12個(gè)月，即便是早期患者，在接受過(guò)手術(shù)治療后，仍有一半左右的患者于兩年內(nèi)復(fù)發(fā)，而老年NSCLC患者的死亡率更高〔4〕。目前針對(duì)NSCLC的治療仍以手術(shù)、放、化療為主，但由于老年患者在確診時(shí)多數(shù)已是晚期，或伴有高血壓、糖尿病、冠心病等多種疾病加上免疫功能低下，無(wú)法耐受手術(shù)治療以及放化療〔5〕。細(xì)胞免疫治療近年來(lái)在臨床上的應(yīng)用越來(lái)越受到患者以及醫(yī)護(hù)人員的肯定，尤其是針對(duì)老年癌癥患者，細(xì)胞免疫治療大大提高了其生活質(zhì)量并延長(zhǎng)了其生存期〔5〕。

DC-CIK治療是臨床常用的細(xì)胞免疫療法，該種細(xì)胞既發(fā)揮了CIK的非MHC限制性細(xì)胞毒作用，又能夠激發(fā)抗原負(fù)載的DC介導(dǎo)的MHC限制性細(xì)胞毒作用，從而進(jìn)一步增強(qiáng)特異性殺傷作用。另外，將DC-CIK聯(lián)合放化療已成為臨床上術(shù)后或非手術(shù)治療癌癥的首選方案，Yuanying等〔6〕將冷凍療法、化療以及DC-CIK細(xì)胞聯(lián)和治療轉(zhuǎn)移性NSCLC，結(jié)果顯示，采用聯(lián)合療法治療的患者5年總生存率顯著高于其他治療組; Yang等〔7〕采用DC-CIK聯(lián)合化療治療61例晚期NSCLC患者，觀察結(jié)果表明，DC激活過(guò)的CIK其CD3+CD56+雙陽(yáng)性率遠(yuǎn)高于單獨(dú)培養(yǎng)的CIK，并能促進(jìn)CIK的增殖，減少其凋亡，另外，不管是腺癌還是鱗癌患者，在經(jīng)過(guò)聯(lián)合治療后，患者的1、2年總生存率顯著高于單純化療組。

CEA是臨床上廣譜性的腫瘤標(biāo)志物，其在腫瘤診斷以及預(yù)后評(píng)估起著重要作用，研究顯示，超過(guò)50％的NSCLC患者血清CEA水平增高。CYFRA21-1是細(xì)胞角質(zhì)蛋白19的片段，該蛋白在正常人及肺部良性疾病患者的血清含量很低，而在腫瘤患者尤其是肺癌患者血清中的陽(yáng)性表達(dá)很高。文獻(xiàn)資料顯示，CYFRA21-1在肺癌中的陽(yáng)性率達(dá)60％～85％。因此，CYFRA21-1已成為臨床上肺癌檢測(cè)的最佳標(biāo)志物〔8〕，Pang等〔9〕研究結(jié)果提示，NSCLC患者在經(jīng)過(guò)化療后，CYFRA21-1水平顯著下降。

綜上，自體免疫細(xì)胞聯(lián)合TP化療方案能夠延緩老年晚期NSCLC患者的生存期并能顯著提高其生存質(zhì)量。

4　參考文獻(xiàn)

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〔2015-03-17修回〕

(編輯袁左鳴/滕欣航)

〔中圖分類(lèi)號(hào)〕R734.2

〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A

〔文章編號(hào)〕1005-9202(2015) 16-4563-03;

doi:10.3969/j.issn.1005-9202.2015.16.064