劉春亮
(滁州市食品藥品檢驗中心,安徽 滁州 239000)
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RP-HPLC法測定吡嘧司特鉀片的含量及有關物質
劉春亮
(滁州市食品藥品檢驗中心,安徽 滁州239000)
摘要:目的采用RP-HPLC測定吡嘧司特鉀片的含量及有關物質,為片劑的質量控制提供有效的分析方法。方法采用C18分析柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流動相為:甲醇∶水∶冰醋酸(20∶30∶0.1),檢測波長為260 nm,流速1.0 mL·min-1。結果在選定的色譜條件下,吡嘧司特鉀與有關物質完全分離;制劑中輔料對主藥無干擾,吡嘧司特鉀在19.66~393.2 mg·L-1濃度范圍內,峰面積與濃度線性關系好,相關系數(shù)r=0.999 9,平均回收率為100.08% ,RSD= 0.21%。結論該法簡便,準確,專屬性強,可用于吡嘧司特鉀片的有關物質檢查及含量測定。
關鍵詞:高效液相色譜;吡嘧司特鉀片;有關物質
吡嘧司特鉀為肥大細胞穩(wěn)定劑,制成片劑用于治療過敏性鼻炎、支氣管哮喘。國內三家生產此藥品的原標準[1-4]均采用高效液相色譜法對本品有關物質進行測定,但是流動相比例和限度不一致,同時含量測定方法有紫外分光光度法和高效液相法兩種方法,故我們建立統(tǒng)一的高效液相標準方法,并建立統(tǒng)一的限度對質量加以控制,方法更為合理,高效。
1儀器、試劑與材料
1.1儀器安捷倫1260型高效液相色譜儀,安捷倫化學工作站,PDA檢測器。Sartorius BS21S電子天平。
1.2試劑甲醇、乙腈為色譜純,冰醋酸為分析純。
1.3材料吡嘧司特鉀對照品(A廠家提供,由原料精制而成,化學標定含量為99.8%),樣品(吡嘧司特鉀片,由A,B,C三廠家提供,批號分別為101001,1006004,100301)。
2方法與結果
2.1色譜條件色譜柱: C18分析柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流動相:甲醇∶水∶冰醋酸(20∶30∶0.1);檢測波長:260 nm;流速:1 mL·min-1;柱溫:30℃。
2.2破壞實驗和干擾實驗取本品經酸、堿、高溫、氧化和光照破壞后,在本實驗條件下各降解物均與主峰完全分離,片劑輔料和溶劑對主峰無干擾,見圖1。
2.3有關物質檢查
2.3.1樣品測定取吡嘧司特鉀樣品適量,置100 mL的容量瓶中,加水溶解,稀釋至刻度搖勻,制得濃度為0.4 g·L-1的供試液。精密量取供試液1 mL,置100 mL的容量瓶中,加水溶解,稀釋至刻度搖勻,制得濃度為2 mg·L-1的對照液。
同時取經過日光燈(3 000 lx)光照72 h的對照溶液10 mL(1 g·L-1)作為系統(tǒng)適用性溶液,照色譜條件試驗,取系統(tǒng)適用性溶液20 μL注入液相色譜儀,光照分解雜質對主峰的相對保留時間約為0.8 min,與主峰分離度應符合規(guī)定。
另取對照溶液20 μL注入液相色譜儀,調節(jié)檢測靈敏度,使主成分色譜峰的峰高為記錄儀滿量程的10%~25%;再精密量取供試品溶液與對照溶液各20 μL,分別注入液相色譜儀,記錄色譜圖至主成分峰保留時間的5倍,檢查雜質。供試品溶液的色譜圖中如有雜質峰,各雜質峰面積和不得大于對照溶液中主成份峰面積1.5倍(1.5%)。色譜圖見圖2。
2.3.2測定結果測定A、B、C三廠有關物質的結果分別為(0.53±0.08)%、(0.30±0.06)%、(2.31±0.14)%。
2.4片劑含量測定
2.4.1標準曲線的線性范圍精密稱取吡嘧司特鉀對照品19.66 mg,置100 mL量瓶中,用水溶解并稀釋至刻度,搖勻,精密量取上述溶液5 mL,置50 mL量瓶中,用水稀釋制成標準溶液,在上述色譜條件下分別進樣1、2、5、10、20 μL記錄色譜圖,以對照品溶液進樣濃度C為橫坐標,峰面積A為縱坐標做線性回歸。吡嘧司特鉀在19.66~393.2 g·L-1濃度范圍內,相應峰面積A與其對照品濃度呈良好的線性關系,回歸方程為:A=2.445 88C-0.082 55,r=0.999 9。
2.4.2精密度實驗 取對照品溶液20 μL,重復進樣6次,測定吡嘧司特鉀峰面積,結果RSD為0.06%。
2.4.3重復性試驗 取同一批樣品(A廠),配制供試品溶液6份,按上述色譜條件測定,取對照品同法操作,記錄色譜圖,按外標法計算含量,平均值為99.2%,RSD為1.0%。
2.4.4穩(wěn)定性實驗同一份對照溶液,在0、1、2、3、4、8、10 h按上述色譜條件分別進樣分析,吡嘧司特鉀面積分別為478.9、478.3、478.2、478.8、479.0、479.7、478.8,峰面積的RSD為0.1%,樣品峰面積在10 h內穩(wěn)定。
2.4.5回收率實驗精密稱取吡嘧司特鉀10.31 mg置100 mL量瓶中,用水溶解并稀釋至刻度,搖勻,作為對照溶液,精密量取上述溶液10 mL,置50 mL量瓶中,用水稀釋至刻度作為對照品溶液。另取相應的混合輔料9份,分別置50 mL量瓶中,加水適量使溶解,精密量取對照溶液液4、5、6 mL配制成相當于80%,100%和120%濃度的樣品溶液各3份,用水稀釋至刻度,搖勻,濾過,取續(xù)濾液;照含量測定項下的方法,進樣10 μL,計算回收率,結果見表1,平均回收率為100.08%,RSD為0.21%。
表1 回收率實驗結果
2.4.6樣品含量測定取本品精密稱取約20 mg,置100 mL量瓶中,加水適量使超聲溶解,用水稀釋至刻度,搖勻,濾過,精密量取續(xù)濾液5 mL,至50 mL量瓶中,加水至刻度,搖勻,制成每1 mL約含20 μg的溶液。精密量取10 μL注入液相色譜儀,記錄色譜圖;另精密稱取干燥至恒重的吡嘧司特鉀對照品適量,同法測定,計算,即得。見圖3。
A 樣品B 對照品
圖3含量測定圖譜
2.4.7樣品測定結果測定A、B、C三廠樣品質量分別為(99.5±0.3)% 、(100.8±0.2)%、(98.5±0.2)%。
3討論[5-7]
3.1吸收波長的選擇通過使用DAD檢測器分別對本品進行光譜掃描,結果表明在波長為260 nm處吸收最大,所以確定測定波長選在260 nm。
3.2檢測方法的確定考察不同的流動相比例:基本是用水∶冰醋酸∶甲醇系統(tǒng),但是比例不一樣,主要是冰醋酸的量,用樣品考察了4種比例:(1)水∶冰醋酸∶甲醇(400∶20∶600);(2)水∶冰醋酸∶甲醇(550∶3∶450);(3)水∶冰醋酸∶甲醇(600∶2滴∶600);(4)水∶冰醋酸∶甲醇(300∶1∶200),看分離情況。選擇水∶冰醋酸∶甲醇(300∶1∶200)這個比例較好。在破壞試驗中,光照實驗在主峰前均有較大雜質峰,考察了WATERS Sunfire C18、Agilent eclipse XDB-C18和大連依利特Hpersil C18三種色譜柱,此雜質峰相對主峰保留時間約為0.8 min,并以此達到有效分離,作為系統(tǒng)適用性考察使方法更為合理。一般有關物質考察到主峰保留時間的3倍,但是C廠記錄色譜圖至主成分峰保留時間的4倍時,還有明顯雜質出現(xiàn),故標準定為記錄色譜圖至主成分峰保留時間5倍。
3.3檢測的結果由于有關物質標準不一,綜合考慮將限度定為1.5%, C廠家雜質較多,按照原標準合格,按本文方法改進后明顯超限,是時間長降解還本身樣品不純,這需要進一步考證。含量試驗結果表明,紫外方法結果偏高,易受輔料的影響,高效液相色譜法則能準確測定其含量,不受輔料的影響。
總之,以上實驗可以看出,采用高效液相色譜法,通過專屬性、線性、回收率等研究證明此檢測方法具有靈敏、準確、重現(xiàn)性好等優(yōu)點,可更有效測定吡嘧司特鉀片中有關物質和含量。
參考文獻:
[1]國家藥典委員會.中國藥典(二部)[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010.
[2]國家食品藥品監(jiān)督管理局標準.YBH13992006[S],2006.
[3]國家食品藥品監(jiān)督管理局標準.YBH39572005[S],2005.
[4]國家食品藥品監(jiān)督管理局標準.YBH06832008[S],2008.
[5]沈衛(wèi)陽,于清峰,馬越峰,等.RP-HPLC檢查吡嘧司特鉀中有關物質及其片劑的含量測定[J].中國藥學雜志,2004,39(1):63-64.
[6]沈衛(wèi)陽,陳蓉,胡育筑.吡嘧司特鉀膠囊的RP-HPLC測定[J].中國醫(yī)藥工業(yè)雜志,2003,34(11):573-574.
[7]趙喆,王昕,左文堅.HPLC法測定醋酸可的松有關物質及其注射液的含量[J].中國藥品標準,2006,7(3):38-41.
(收稿日期:2014-04-17,修回日期:2015-02-10)
doi:10.3969/j.issn.1009-6469.2015.08.013