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·經驗交流·

Galectin-3、Cytokeratin-19在甲狀腺良、惡性腫瘤中的表達

王一鳳鄧蒞霏廖兵

作者單位：330029 江西省腫瘤醫(yī)院

關鍵詞：甲狀腺腫瘤；半乳糖苷結合蛋白-3；低分子量角蛋白-19

甲狀腺腫瘤是作為常見的內分泌腺腫瘤，在總人群中的發(fā)病率為6%～9%，大部分為良性，只有約7%為惡性。甲狀腺癌的術前診斷現(xiàn)在主要有病史和體格檢查，還有頸部B超、頸部CT平掃和I131同位素檢查，但這些診斷手段對甲狀腺良、惡性腫瘤的確診特異性均不高。本文對甲狀腺腫瘤進行術前細胞學檢查(fine needle aspiration，F(xiàn)NA),并采用免疫組化的方法，聯(lián)合檢測甲狀腺腫瘤標志物細胞角蛋白19(Cytokeratin19)和β半乳糖苷結合蛋白(Galectin-3)，從而鑒別甲狀腺結節(jié)的良、惡性，為臨床的進一步治療提供有力的依據。

1材料和方法

1.1臨床資料

選取2008年7月-2012年6月在江西省腫瘤醫(yī)院頭頸外科住院擬行甲狀腺腫瘤手術切除的患者88例(男性26例，女性62例)。術前均對這些患者進行甲狀腺細胞學檢查，CK-19、Gal-3免疫組化染色，細胞涂片巴氏染色。術后均對甲狀腺腫瘤行常規(guī)病理檢查。

1.2方法

1.2.1細胞涂片制備和免疫組化染色患者取坐位，上身垂直頸部放松，由于甲狀腺易出血，用6號針頭進針后保持1 ml左右的負壓來回提插3～4次。保證常規(guī)涂片有2張，一張行快速染色，另一張立即用95%的酒精濕固定行巴氏染色。我們根據細胞核異形性將細胞分為7級，級別越高，惡性程度越高。另取細胞涂片鼠抗CK-19、Gal-3(1∶50，美國Antibody diagnostic公司)孵育后，加辣根過氧化物酶標記的羊抗鼠IgG(1∶50，美國Antibody diagnostic公司)，DNA顯色。每次實驗均設立不加一抗的陰性對照組。結果判斷：2種染色均以細胞質內出現(xiàn)棕黃色細胞顆粒為陽性，CK-19可有明顯細胞膜著色，Gal-3部分有細胞核著色；按陽性細胞所占百分比并參考著色強度確定分級：無明顯陽性細胞為陰性(-)，陽性細胞數<25%為弱陽性(+)，陽性細胞數25%～50%為中度陽性(2+)，陽性細胞數≥50為強陽性(3+)。

1.2.2靈敏度和特異度的計算我們將切除標本以10%甲醛溶液固定，常規(guī)組織處理，包埋切片，HE染色，形態(tài)學觀察。參照WHO分類標準及《腫瘤組織病理診斷》，由我院病理科醫(yī)師完成。以甲狀腺腫瘤術后病理為診斷腫瘤良、惡性的金標準，比較CK-19、Gal-3在良惡性腫瘤表達中的不同，并計算普通細胞涂片、普通細胞涂片結合CK-19、Gal-3免疫組化染色診斷良惡性腫瘤的敏感度和特異度。靈敏度=真陽性數/(真陽性數+假陰性數)×100%。特異度=真陰性數/(真陰性數+假陽性數)×100%。

1.3統(tǒng)計學方法

采用成組的Wilcoxon 秩和檢驗分析不同組間蛋白表達差異。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結果

2.1常規(guī)甲狀腺細胞病理診斷與術后病理診斷結果比較

88例患者術后病理顯示：65例良性甲狀腺腫瘤(結節(jié)性甲狀腺腫伴囊性變36例，腺瘤18例，橋本氏病11例)、23例甲狀腺乳頭狀癌。甲狀腺細胞學標本在鑒別結節(jié)良性腫瘤的靈敏度為74%(17/23)，特異度為94%(61/65)，見表1。

表1　細胞病理診斷結果與組織病理診斷結果比較/例

2.2Gal-3 在甲狀腺良、惡性病變中的表達

Gal-3 在甲狀腺良性病變中多數表達為弱陽性或陰性，僅2例為中度陽性表達；乳頭狀癌病例22例為強陽性表達。在甲狀腺乳頭狀癌和良性病變中陽性率分別為96%和3%；輕、中度表達陽性率在上述良、惡性病變分別為6%和4%。兩者在陽性強度上和陽性率的差異上均有統(tǒng)計學差異(P<0.01)。見表2。

2.3CK-19在甲狀腺良、惡性病變中的表達

CK-19 在結節(jié)性甲狀腺腫、甲狀腺腺瘤及橋本氏甲狀腺炎組織中大多數為陰性或者弱陽性表達，而乳頭狀癌病例則均為強陽性或中等表達，尤其是微小浸潤性乳頭狀癌也表現(xiàn)為明顯陽性，染色清晰。CK-19在良性甲狀腺病變(結甲+橋本氏病+腺瘤)中的陽性率，中、強度表達率分別為15%和6%，乳頭狀癌則分別為30%和70%,陽性率和陽性強度上兩者差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。見表2。

表2　甲狀腺不同病變CK-19、Gal-3表達/例

3討論

在過去20年中，甲狀腺腫瘤細胞學檢查已成為甲狀腺腫瘤診斷的常規(guī)檢查。我們可以制作細胞涂片標本，通過檢測腫瘤細胞學的物異性，以明確腫瘤性質。FNA的敏感性和特異性分別為 47%～96%、74%～99%，穿刺醫(yī)生的技術和細胞室醫(yī)師制片、讀片水平等均會影響其變異度。而且，細胞學對甲狀腺濾泡樣增生的診斷仍較為模糊，從而導致了部分不必手術的患者接受手術治療。近年來，分子生物學技術和免疫組化技術被人們廣泛運用到FNA，通過對細胞涂片腫瘤標志物 (如Galectin-3、CK-19、CD44v6、CK-19和RET等)的檢測，達到鑒別腫瘤良惡性的目的，從而提高診斷效率。

在我們以往的研究中，Galectin-3在甲狀腺惡性腫瘤中的表達顯著高于甲狀腺正常組織和良性病變[1]。Galectin-3即半乳糖苷結合蛋白，是植物凝素中的一組。它能夠參與細胞與間質之間的炎癥反應、黏附、免疫調節(jié)和細胞生長，細胞凋亡以及腫瘤細胞轉移及浸潤和mRNA 前體的剪切等，且Galectin-3能夠參與多種細胞功能，在上皮細胞和免疫細胞中表達，特別是在mRNA剪接過程中發(fā)揮重要作用。有研究證明，無論是在mRNA或者是蛋白水平，Galectin-3在濾泡起源的甲狀腺乳頭狀癌均特征性的表達。Saggiorato等[2]分析了23例甲狀腺乳頭狀癌和54例濾泡性腺瘤的細胞學標本和術后病理標本，免疫組化結果均顯示Gal-3免疫反應在所有乳頭狀癌術后病理標本中均為陽性，在對照的細胞學標本中陽性則為16/17。所以認為術前診斷甲狀腺乳頭狀癌Gal-3是一種可靠的分子標記物，能提高細胞學診斷的準確性。

CK-19是一種低分子量角蛋白，可用于甲狀腺良惡性腫瘤的鑒別診斷。Baloch等[3]認為CK-19對鑒別其他濾泡良性病變和濾泡型乳頭狀癌有明顯的區(qū)別作用。我們的研究提示CK-19在甲狀腺良性病變中多為陰性或弱陽性表達(92%)，而在乳頭狀癌中則都是中、強陽性表達(94%)，由此可以說明CK-19陽性表達是濾泡細胞增生惡變的重要標志，可以作為鑒別甲狀腺良、惡性病變的主要指標，尤其是對甲狀腺乳頭狀癌的診斷具有重要參考價值。

我們將免疫組化技術運用于甲狀腺腫瘤細胞學穿刺標本，發(fā)現(xiàn)甲狀腺惡性腫瘤有腫瘤標志物Galectin-3、CK-19表達，其表達要遠遠高于良性病變。與普通的細胞涂片相比，獨立檢測Galectin-3、CK-19可以大大提高診斷甲狀腺良惡性病變的準確率，其中Galectin-3的敏感性佳。

我們的研究結果與國內外的一些研究相近。王麗華等在甲狀腺新鮮標本中行細胞學檢查，他們檢測Galectin-3和CD44v6在甲狀腺新鮮標本中的表達，比較其與普通細胞涂片在診斷甲狀腺結節(jié)良惡性的敏感性和特異性，揭示腫瘤標志物陽性表達可提高診斷的準確性[4]。有學者也發(fā)現(xiàn)，聯(lián)合檢測Galectin-3、CK-19能夠有效地提高疑難FNA診斷水平，能夠有效鑒別甲狀腺結節(jié)的良惡性[5]。

綜上所述，術前行甲狀腺細胞學穿刺普通細胞涂片結合Galectin-3、CK-19免疫組化檢查，能夠顯著提高甲狀腺結節(jié)良惡性診斷的敏感度和特異度。

參考文獻

[1]杜馥曼，楊玉芝，馮琨，等.Galectin-3 和 CD44v6 在甲狀腺癌中的表達及臨床價值〔J〕.標記免疫分析與臨床，2010，17(2):86-88.

[2]Saggiorato E,Cappia S,De GillIi P,et al.Galectin-3 as a presurgical immunocytodiagnostic marker of minimally invasive follicular thyroid carcinoma〔J〕.J Clin Endocrinol Metab,2001,86(11):5152-5158.

[3]Baloch ZW,Abraham S,Roberts S,et al.Differential expression of cytokeratins infollicular variant of papillary carcinoma:an immunohistochemical study and its diagnosticutility 〔J〕.Hum Pathol,1999,30 (10):1166-1171.

[4]王麗華，趙永桔，王曉穎，等.Galectin-3 和 CD44v6 在甲狀腺細針穿刺標本上的表達及意義〔J〕.上海醫(yī)學，2006，29(11):785-788.

[5]Rossi ED，Raffaelli M，Minimo C，et al.Immunocytochemical evaluation of thyroid neoplasms on thin-layer smears from fine-needle aspiration biopsies〔J〕.Cancer，2005，105(2):87-95.

(編輯：甘艷)

(收稿日期2014-11-17修回日期 2015-01-10)

文章編號：1001-5930(2015)04-0623-02

中圖分類號：R736.1

文獻標識碼：B

DOI：10.3969/j.issn.1001-5930.2015.04.048

通訊作者：廖兵